專(zhuān)利名稱(chēng)：：碳代青霉烯衍生物和其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新穎的碳代青霉烯(3-吡咯烷基硫基-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-7-酮-2-羧酸化合物)衍生物，其制備方法和含有此類(lèi)化合物為活性成分的抗菌劑。Streptomycescattleya是由土壤中分離出的一種放線(xiàn)菌，由此菌種發(fā)酵分離出來(lái)的硫霉素(J.Am.Chem.Soc.Vol.100，P6491(1978))對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌在很大范圍內(nèi)有良好的抗菌譜和強(qiáng)抗菌活性。最近研究了具有不同β-內(nèi)酰胺環(huán)的碳代青霉烯衍生物的結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)不同于具有常規(guī)β-內(nèi)酰胺環(huán)的青霉素衍生物和頭孢菌素的結(jié)構(gòu)。硫霉素有強(qiáng)的抗菌活性，但是硫霉素本身是化學(xué)不穩(wěn)定的，有報(bào)告說(shuō)它在體內(nèi)會(huì)被某些酶，如腎的脫氫肽酶I(此文中稱(chēng)作DHPI)分解，因而減小了抗菌活性，尿恢復(fù)率低(Antimicrob.AgentChem-other.，Vol.22，P62(1982)，同上，Vol.23，P330(1983))。為了達(dá)到保持硫霉素良好的抗菌活性，同時(shí)又獲得化學(xué)穩(wěn)定性的目的，Merck&Co.Inc.已經(jīng)合成了許多硫霉素的類(lèi)似物。結(jié)果，由硫霉素的氨基亞胺基化(formimidation)得到的亞胺硫霉素(imi-penem)經(jīng)過(guò)實(shí)際研究成為藥用產(chǎn)品(USP4194047)。但是，同硫霉素一樣，亞胺硫霉素在人體腎臟中同樣可被DHP-I分解。因此它不能用于治療泌尿生殖系統(tǒng)感染。另外，由于分解產(chǎn)物對(duì)腎有毒性，因此，亞胺硫霉素不能單獨(dú)用藥，而是需要和諸如Cilastatin(Antimicrob.AgentsChemother.，Vol.12(suppl.D)，P1(1983))的DHP-I抑制劑結(jié)合使用。但在二十世紀(jì)80年代，隨著對(duì)有足夠高穩(wěn)定性的碳代青霉烯化合物不斷增長(zhǎng)的需求，對(duì)各種有1β-甲基碳代青霉烯基本骨架的碳代青霉烯化合物進(jìn)行了研究。SumitomoCo.合成了meropenem，它對(duì)DHP-I比亞胺硫霉素更穩(wěn)定，并有寬的抗菌譜(EP126587;AntimicrobialAgentsandChemotherapy，Vol.33，No.7，P1009(1989);JournalofAntibiotics，Vol.43，No.5，P519(1990))。另外，Lederle合成了L.J.C.10627，它顯示出更好的抗菌活性和對(duì)DHP-I的穩(wěn)定性。和本發(fā)明接近的現(xiàn)有技術(shù)，已知的有EP182213，EP243686，EP411664。公開(kāi)了在吡咯烷的2′-位上有脒基烷基、ureiren烷基、氨基甲酰基烷基、烷氧基亞氨基烷基和亞氨基烷基的碳代青霉烯衍生物，吡咯烷的4′位通過(guò)S(硫)連接于碳代青霉烯骨架上。本發(fā)明提供了在吡咯烷2′-位上有烷氧基亞氨基、羥基亞氨基或亞肼基基團(tuán)的碳代青霉烯衍生物，這在相關(guān)
技術(shù)領(lǐng)域：
中從未公開(kāi)過(guò)。β-內(nèi)酰胺抗菌劑顯示出選擇性的抗菌活性，并且對(duì)動(dòng)物體細(xì)胞無(wú)大的毒性作用，因此它們作為常用藥物廣泛應(yīng)用于治療由細(xì)菌引起的傳染病。特別是碳代青霉烯化合物，它對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性菌有寬的抗菌譜，并且比其它抗菌劑的毒性更低。但是，人們?nèi)匀幌Ｍ軌蚋倪M(jìn)它的抗菌活性和對(duì)DHP-I的穩(wěn)定性，以便能減小其對(duì)腎臟的毒性和對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的副作用。為了能提供對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性菌具有良好的抗菌活性，特別是同時(shí)又對(duì)DHP-I具有高穩(wěn)定性的新的碳代青霉烯化合物，本發(fā)明人進(jìn)行了廣泛的研究并完成了本發(fā)明。本發(fā)明提供了式(Ⅰ)化合物其中R1是氫原子或甲基，R2是氫原子、金屬或非金屬鹽基團(tuán)，或者是羧基保護(hù)基。通式(Ⅰ)的金屬或非金屬鹽基團(tuán)表示堿金屬鹽，如鈉鹽或鉀鹽;堿土金屬鹽，如鎂鹽或鈣鹽;銨鹽;脂族鹽，如三乙胺鹽、吡啶鹽、甲基吡啶鹽、乙醇胺鹽、三乙醇胺鹽、二環(huán)己胺鹽、N′，N′-二芐基亞乙胺鹽、二芐基胺鹽;酸加成鹽，例如無(wú)機(jī)鹽如鹽酸化物、氫溴化物、硫酸鹽、磷酸鹽;有機(jī)酸鹽如甲酸鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽;或分子內(nèi)的四價(jià)鹽。羧基保護(hù)基可以是，例如低級(jí)烷基或是下文提及的酯化羧基。上文提到的酯基包括至少一個(gè)適當(dāng)?shù)娜〈?，例如低?jí)鏈烷酰氧基(低級(jí))烷基，如乙酰氧基甲基、丙酰氧基甲基、丁酰氧基甲基、戊酰氧基甲基、新戊酰氧基甲基、己酰氧基甲基;低級(jí)烷基磺?；?低級(jí))烷基，如2-甲基乙基;一(或二，或三)鹵代(低級(jí))烷基，如2-碘甲基、2，2，2-三氯乙基;低級(jí)烷氧羰氧基(低級(jí))烷基，如甲氧羰氧基甲基、乙氧羰氧基甲基、丙氧羰氧基甲基、叔丁氧羰氧基甲基、1-(或2-)甲氧羰氧基乙基、1-(或2)-乙氧羰氧基乙基;可以有2-苯并[c]呋喃酮亞基(低級(jí))烷基[Phthalidentl(lower)alkylgroup]的低級(jí)烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基;低級(jí)鏈烯基，如乙烯基、烯丙基、異丙烯基;低級(jí)炔基，例如乙炔基、丙炔基;可以有至少一個(gè)以上取代基的芳基低級(jí)烷基，例如芐基、4-甲氧基芐基、4-硝基芐基、2-硝基芐基、三苯甲游基、二苯甲基、雙(甲氧基苯基)甲基、3，4-二甲氧基芐基、4-羥基-3，5-二叔丁基芐基;可以有至少一個(gè)以上取代基的芳基，如苯基、4-氯苯基、甲苯基、叔丁基苯基、二甲苯基、菜基、脒基;2-苯并[c]呋喃酮基?！暗图?jí)”是指碳數(shù)為1-6，“低級(jí)烷基”包括直鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基。“低級(jí)烷氧基”包括直鏈或支鏈烷氧基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基。R3表示氫原子或亞胺基保護(hù)基或藥學(xué)上可接受的鹽。適當(dāng)?shù)膩啺坊Ｗo(hù)基可以是氨基甲?；?、脂族?；⒎甲艴；?、雜環(huán)酰基、芳基取代的脂族?；?、雜環(huán)基取代的脂族酰基、所有這些都是由羧酯、碳酯、磺酸、氨基甲酸衍生而來(lái)的。脂族酰基包括飽和或非飽和的非環(huán)或環(huán)狀?；?，例如，低級(jí)鏈烷?；?，如甲?；?、乙?；⒈；⒍□；?、異丁?；?、戊酰基、異戊酰基、新戊?；⒓乎；?低級(jí)烷基磺?；?，如甲磺?；?、乙磺?；?、丙磺酰基、異丙磺?；?、丁磺?；?、異丁磺酰基、戊磺酰基、己磺酰基;氨基甲?；?N-烷基氨基甲酰基，如甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲?；?低級(jí)烷氧羰基，如甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、丁氧羰基、叔丁氧羰基;低級(jí)鏈烯氧羰基，如乙烯氧羰基、烯丙氧羰基、異丙烯氧基羰基;低級(jí)鏈烯?；绫；?、甲基丙烯?；投辊；?(低級(jí))環(huán)烷基羰基，如環(huán)丙烷基羰基、環(huán)戊烷基羰基、環(huán)己烷基羰基。芳族酰基包括芳?；?，如苯甲?；⒓妆郊柞；?、二甲苯甲酰基;N-芳基氨基甲?；鏝-苯基氨基甲?；-甲苯基氨基甲?；-萘基氨基甲?；?芳基磺酰基，如苯磺?；?、甲苯磺酰基。雜環(huán)酰基包括雜環(huán)?；?，如Proyl、煙?；悷燉；⑧邕蚧驶?、噻二唑基羰基、四唑基羰基、tetrazolyrbonyl。芳族基團(tuán)取代的脂族酰基包括芳烷?；绫交?低級(jí))烷?；绫揭阴；⒈奖；?、苯己酰基;芳烷氧羰基，例如苯基(低級(jí))烷氧羰基，如芐氧羰基、penetyloxycarbonyl;芳氧基鏈烷?；?，例如苯氧基(低級(jí))鏈烷酰基，如苯氧基乙?；⒈窖趸；?。由雜環(huán)基取代的脂族?；s環(huán)基(低級(jí))鏈烷?；?，例如雜環(huán)(低級(jí))鏈烷?；玎绶曰阴；?、咪唑基乙?；?、呋喃基乙?；⑺倪蚧阴；⑧邕蚧阴；⑧缍蛞阴；?、噻吩基丙?；?、噻二唑基丙?；?。上述?；杀灰粋€(gè)或一個(gè)以上選自下述基團(tuán)的取代基取代低級(jí)烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、戊基、己基;鹵素，如氯、溴、碘、氟;低級(jí)烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基;低級(jí)烷硫基，如甲硫基、乙硫基、丙硫基、異丙硫基、丁硫基、戊硫基、己硫基;硝基。所有這些取代基的優(yōu)選?；羞x自下述基團(tuán)的取代基一(或二，或三)鹵代鏈烷?；?，如氯乙酰基、溴乙?；?、二氯乙酰基、三氟乙酰基;一(或二，或三)鹵代烷氧羰基，如氯甲氧羰基、二氯甲氧羰基、2，2，2-三氯乙氧羰基;硝基(或鹵代，或低級(jí)烷氧基);芳烷氧羰基，如硝基芐氧基羰基、氯代芐氧基羰基、甲氧基芐氧基羰基;一(或二，或三)鹵代低級(jí)烷基磺?；?，如氟代甲磺酰基、二氟甲磺?；?、三氟甲磺?；?、三氯甲磺?；?。“亞氨基保護(hù)基”優(yōu)選(C2-C4)鏈烯氧羰基、苯基(C1-C4)烷氧羰基、鄰硝基(或間硝基，或?qū)ο趸?芐氧基羰基、鄰甲氧基(或間甲氧基，或?qū)籽趸?芐氧基羰基。R4表示氫原子、低級(jí)烷基、羥基、氰基、鹵素基團(tuán)如氯、溴、碘、氟。R5表示羥基、低級(jí)烷氧基、保護(hù)或未保護(hù)的氨基，或下述通式(1)-(4)之一其中R6和R7各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基。R8是羥基、氰基、鹵原子如氯、溴、碘、氟，或者是可被適當(dāng)取代基選擇性地取代的含有1-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基團(tuán)，保護(hù)或未保護(hù)的氨基，或下面通式其中R9是低級(jí)烷基磺酰基如甲磺?；u代(C1-C4)烷基磺?；?，苯基(C1-C4)烷基磺酰基如對(duì)甲苯磺?；琋，N-二(低級(jí))烷基氨磺酰如N，N-二甲基氨磺酰。其中R6與上文定義相同。其中R6、R7與上文定義相同。其中R6與上述定義相同，R10是低級(jí)烷基、低級(jí)烷基磺?；Ⅺu代低級(jí)烷基磺?；?、苯基(C1-C4)烷基磺?；-(低級(jí))烷基氨磺?；?、N，N-二(低級(jí))烷基氨磺?；⒖捎蛇m當(dāng)取代基選擇性取代的含1-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)、保護(hù)或未保護(hù)的氨基，或下面通式其中R11是鹵原子、羥基、氰基，這些基團(tuán)是在苯基的鄰-、間-或?qū)?位之一的位置上取代，R6、R7與上文定義相同?！昂?-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基團(tuán)”包括含有1-4個(gè)氮原子的不飽和5或6節(jié)單環(huán)雜環(huán)基團(tuán)，例如吡咯基、吡咯啉基(pyrrol-idiyl)、咪唑基(如2-咪唑基)、咪唑啉基(如2-咪唑啉基)、吡唑基、吡唑啉基、吡啶基、吡啶N-氧化物、pyridinio、二氫吡啶基、四氫吡啶基(如1，2，3，6-四氫吡啶基)、嘧啶基、pyrimidinio、吡嗪基、pyrazinio、噠嗪基(如1，3，5-三嗪基、1，2，4-三嗪基和1，2，3-三嗪基)、四氫三嗪基(如1，2，5，6-四氫-1，2，4-三嗪基、1，4，5，6-四氫-1，2，4-三嗪基)、triazinio、三唑基(如1H-1，2，4-三唑基、1H-1，2，3-三唑基、2H-1，2，3，-三唑基)、triazolio、四嗪基、tetrazinio、四唑基(如1H-四唑基、2H-四唑基)、tetrazolio;含有1-3個(gè)氮原子和1-2個(gè)硫原子的不飽和5或6節(jié)單雜環(huán)基，例如噻唑基、異噻唑基、噻二唑基(如1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基)、thiadiazolio、噻唑啉基(如2-噻唑啉基)、二氫噻嗪基，含1-2個(gè)氧原子和1-3個(gè)氮原子的不飽和5或6節(jié)單環(huán)雜環(huán)基，例如噁二唑基(如、1，2，4-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基);含有1-4個(gè)氧原子的飽和5或6節(jié)單環(huán)雜環(huán)基，例如二氧戊環(huán)基(如1，3-二氧戊環(huán)基)、二噁烷基(如1，3-二噁烷基、1，4-二噁烷基);含1-4個(gè)硫原子的飽和5或6節(jié)單環(huán)雜環(huán)基，例如二硫戊環(huán)基(如1，3-二硫戊環(huán)基)、二噻烷基(如1，3-二噻烷基、1，4-二噻烷基);以及上文提到的含氮原子的5或6節(jié)不飽和單環(huán)雜環(huán)基的“季銨化”的基團(tuán)。上述雜環(huán)基可被1-3個(gè)選自下述基團(tuán)的取代基取代氨基;與上述定義的亞胺基保護(hù)基相同的氨基保護(hù)基;低級(jí)烷氨基(如甲氨基、乙氨基、丙氨基、異丙氨基、丁氨基、己氨基);脲基(低級(jí))烷基(如脲基甲基、脲基乙基、脲基丙基、脲基己基);氨基甲?；?上文定義的低級(jí)烷基;氨基(低級(jí))烷基(如氨甲基、氨乙基、氨丙基、氨丁基、氨己基);羥基(低級(jí))烷基和保護(hù)的羥基(低級(jí))烷基;疊氮基(低級(jí))烷基(如疊氮基甲基、疊氮基乙基、疊氮基己基);鹵代(低級(jí))烷基(如氯甲基、溴甲基、碘乙基、溴丙基、溴己基)?！氨Ｗo(hù)的羥基(低級(jí))烷基”包括帶有硝基的苯基(C1-C4)烷氧羰氧基(C1-C4)烷基;帶有硝基的三苯基(C1-C4)烷氧(C1-C4)烷基;帶有硝基的三(C1-C4)烷基甲硅烷氧基(C1-C4)烷基。如果上述雜環(huán)基是在2-位上有氨基或保護(hù)的氨基的噻唑基，或是在3-位上有氨基或保護(hù)的氨基的1，2，4-噁二唑基時(shí)，上述雜環(huán)基有如下式所述的“互變異構(gòu)體”其中R12是氨基或保護(hù)的氨基，R13是亞氨基或保護(hù)的亞氨基。本發(fā)明的范圍包括了所有上述互變異構(gòu)體。但是，含有“互變異構(gòu)體”的目的產(chǎn)物和中間體，例如2-氨基(或保護(hù)的氨基)-噻唑基為方便起見(jiàn)用下式表示3-氨基(或保護(hù)的氨基)-1，2，4-噁二唑基用下式表示其中“被保護(hù)的氨基”包括有例如下述基團(tuán)之一連接于氨基上的氨基基團(tuán)C1-C4烷氧羰基，如叔丁氧羰基;鹵代(C1-C3)烷氧羰基，如2-碘代乙氧羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基;取代或未取代的芳(低級(jí))烷氧羰基[al(lower)alkyloxycarbonyl];取代或未取代的苯基(C1-C3)烷氧羰基，如芐氧羰基、對(duì)甲氧基芐氧羰基、鄰硝基芐氧羰基、對(duì)硝基芐氧羰基;三(C1-C4)烷基甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基。n是1至4的整數(shù)。本發(fā)明還提供了制備下面化合物(Ⅳ)的方法其中R1、R2、R3、R4、R5和R14與上文定義相同，該方法是使式(Ⅱ)化合物其中R1和R2與上文定義相同，R14是氫或羥基保護(hù)基，與下面式(Ⅲ)化合物進(jìn)行反應(yīng)其中R3、R4和R5與上文定義相同。本發(fā)明還提供了合成上文式(Ⅲ)化合物的有用步驟。另外，本發(fā)明證明了通式(Ⅰ)化合物顯示出有效的抗菌活性和低毒性(表1、2、3)。本發(fā)明化合物具有下面的基本結(jié)構(gòu)按照系統(tǒng)命名它被稱(chēng)作是7-氧代-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸或1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。為方便起見(jiàn)，在本說(shuō)明書(shū)中以常用的下式碳代青霉烯為基礎(chǔ)編號(hào)，上述基本結(jié)構(gòu)被稱(chēng)作1-碳代青霉-2-烯-3-羧酸;本發(fā)明包括了以碳代青霉烯結(jié)構(gòu)的1-、5-、6-和8-位的不對(duì)稱(chēng)碳為基礎(chǔ)的光學(xué)異構(gòu)體。在這些異構(gòu)體中優(yōu)選(5R，6R，8R)構(gòu)型的化合物，即與硫霉素有相同立體構(gòu)型(5R，5S)(5，6-反式)并且其中8-位上的碳原子為R-構(gòu)型，或在1-位上有甲基的情況下的(1R，5S，6S，8R)構(gòu)型的化合物。相應(yīng)地，在式(Ⅰ)化合物中，具有優(yōu)選立體構(gòu)型的一組化合物用式(Ⅰ-a)表示其中R1、R2、R3、R4和R5如上文定義。2′-(N-取代)吡咯烷-4′-硫基基團(tuán)也包括了以吡咯烷結(jié)構(gòu)2-和4-位不對(duì)稱(chēng)碳為基礎(chǔ)的所有可能的異構(gòu)體。在這些異構(gòu)體中，優(yōu)選的是(2′S，4′S)構(gòu)型和(2′R，4′S)構(gòu)型的化合物。在式(Ⅰ-a)化合物中，下面一組化合物有特別好的抗菌活性R1是甲基，R5是低級(jí)烷氧基或基團(tuán)，其中R6是氫原子或(低級(jí))烷基，R10是(低級(jí))烷基或(低級(jí))烷基磺?；?、苯基(C1-C4)烷基磺?；蚧鶊F(tuán)(其中R11和上文定義相同)。另外，就2-(N-取代亞氨基)基團(tuán)的雙鍵而言，存在著順式(Z)和反式(E)的幾何異構(gòu)體。這些異構(gòu)體也包括于本發(fā)明之中。在這些異構(gòu)體中，(E)-異構(gòu)體有特別好的抗菌活性。在與式(Ⅲ)反應(yīng)之前，式(Ⅱ)化合物必須轉(zhuǎn)化為它的活性衍生物。這就是要把式(Ⅱ)化合物加入到惰性有機(jī)溶劑中使其在堿性條件下與活化試劑進(jìn)行反應(yīng)得到式(Ⅱ-a)的活性衍生物。其中R1、R2、R14與上文定義相同，A是離去基團(tuán)。反應(yīng)所用活性試劑可以是例如酸酐，如甲磺酸酐、三氟甲磺酸酐、對(duì)甲苯磺酸酐、三氟乙酸酐;或酰氯，如甲磺酰氯、對(duì)-甲苯磺酰氯或氯代磷酸二苯基酯。特別優(yōu)選的是氯代磷酸二苯基酯。在式(Ⅱ-a)中，A是離去基團(tuán)，如三氟乙酰氧基、甲磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基、對(duì)甲苯磺酰氧基或二苯氧基磷酰氧基。特別優(yōu)選的是二苯氧基磷酰氧基。反應(yīng)所用的惰性有機(jī)溶劑可以是例如氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、三氯乙烯、乙醚、四氫呋喃、二噁烷、苯、甲苯、氯苯、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、六甲基磷酰三胺或這些溶劑的混合物。特別優(yōu)選的是乙腈、苯、甲苯或甲苯和苯的混合物，或是甲苯和乙酸乙酯的混合物。反應(yīng)所用的堿可以是例如三甲胺、三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、N-甲基嗎啉、N-甲基吡咯烷、N-甲基哌啶、N，N-二甲基苯胺、1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)或1，5-二氮雜雙環(huán)[4.3.0]壬-5-烯(DBN)，或吡啶、4-二甲氨基吡啶、甲基吡啶、二甲基吡啶、喹啉或異喹啉。特別優(yōu)選的是N，N-二異丙基乙胺和三乙胺。關(guān)于式(Ⅱ)化合物，已知下式(Ⅱ)的3，7-二氧代-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷環(huán)系與3-羥基-7-氧代-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯環(huán)系是互變異構(gòu)關(guān)系，這二種環(huán)系本質(zhì)上是一致的。對(duì)上述反應(yīng)，每摩爾式(Ⅱ)化合物用1-3mol，優(yōu)選1-1.5mol堿和1-1.3mol活性試劑。反應(yīng)溫度不重要，反應(yīng)通常在-40至50℃，優(yōu)選-20至20℃范圍內(nèi)進(jìn)行，并且在0.5至3小時(shí)一般可定量地完成反應(yīng)。反應(yīng)完成后，用常規(guī)方法處理反應(yīng)產(chǎn)物，以定量地得到活性衍生物(Ⅱ-a)。式(Ⅱ-a)化合物可不經(jīng)分離就與式(Ⅲ)化合物反應(yīng)。反應(yīng)用上文提到的惰性有機(jī)溶劑和堿進(jìn)行反應(yīng)，每摩爾式(Ⅱ-a)化合物用1-2mol，優(yōu)選1-1.5mol的堿和0.8-1.2mol的式(Ⅲ)化合物。反應(yīng)通常在-40至50℃，優(yōu)選于-20至20℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行，一般在0.5至75小時(shí)可定量地完成反應(yīng)。另外，式(Ⅳ)化合物可由式(Ⅱ)化合物進(jìn)行一鍋反應(yīng)制得，也就是說(shuō)，可以不把式(Ⅱ-a)的活性衍生物分離出來(lái)。在此情況下，每摩爾式(Ⅱ)化合物使用2-5mol，優(yōu)選2.5-3.8mol堿。反應(yīng)完成后，進(jìn)行常規(guī)處理得到式(Ⅳ)粗品，使其不經(jīng)純化進(jìn)行反應(yīng)以脫除保護(hù)基。但是，最好是用結(jié)晶或是例如用硅膠柱色譜法純化粗產(chǎn)品(Ⅳ)。必要時(shí)，由式(Ⅳ)化合物除去羥基、亞氨基和羧基的保護(hù)基可得到式(Ⅰ)化合物。為了去除保護(hù)基團(tuán)，使用的方法可隨保護(hù)基類(lèi)型不同而改變。但可用常規(guī)方法進(jìn)行。例如，加入分解溶劑;用胺鹽、諸如鋅汞齊、鉻化合物(如氯化亞鉻、甲酸亞鉻)的金屬和下述有機(jī)或無(wú)機(jī)酸一起進(jìn)行化學(xué)還原乙酸、丙酸、鹽酸、氫硫酸;或用鉑或鈀化合物進(jìn)行催化氫化。例如，當(dāng)上述式(Ⅳ)中羥基、氨基或亞氨基的保護(hù)基是芳烷氧羰基，如芐氧羰基或?qū)ο趸S氧羰基，羧基的保護(hù)基是芳烷基，如芐基、對(duì)硝基芐基或二苯甲基時(shí)，這些保護(hù)基可用鉑催化劑或鈀催化劑催化氫化除去，鉑催化劑如氧化鉑、鉑絲或鉑黑，鈀催化劑如鈀黑、氧化鈀、鈀碳或氫氧化鈀-碳(Pearlman催化劑)。當(dāng)羧基保護(hù)基是烯丙基、烯丙基異丙烯基時(shí)，這些保護(hù)基可用鈀配位體復(fù)合物催化劑催化氫化除去，這些催化劑如鈀-碳、鈀黑、氫氧化鈀-碳、氯化鈀(Ⅱ)、四(三苯膦)鈀(O)、雙(二亞芐基乙酮(acton)鈀(O)、二[1，2-雙(二苯膦)乙烷]鈀、四(三苯膦)鈀(O)。用于催化氫化作用的溶劑包括，例如水、甲醇、乙醇、丙醇、四氫呋喃、二噁烷、乙腈、乙酸及含水的上述有機(jī)溶劑、磷酸鹽緩沖液(pH6.5至7.0)或3-(N-嗎啉代)丙磺酸(MOPS)溶液(pH6.5至7.2)。在1-3atm.的氫氣流中，0至40℃溫度范圍內(nèi)進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)可在0.5至8小時(shí)內(nèi)完成。當(dāng)上式(Ⅳ)中的羥基、氨基、亞氨基保護(hù)基是烯丙氧羰基，羧基保護(hù)基是烯丙基時(shí)，這些保護(hù)基可在含有烯丙基俘獲劑的惰性有機(jī)溶劑中通過(guò)有機(jī)可溶性鈀配位體復(fù)合物催化劑的反應(yīng)消除(J.Org.Chem.，Vol.47，587，1982)?？捎糜谠摲磻?yīng)的溶劑包括，例如丙酮、乙醚、四氫呋喃、二噁烷、乙酸乙酯、乙腈、二氯甲烷、氯仿和它們的混合物。烯丙基俘獲劑可以是例如2-乙基己酸鈉、2-乙基己酸鉀、吡啶、哌啶。反應(yīng)通常在-10℃至50℃，優(yōu)選在0℃至30℃溫度范圍內(nèi)進(jìn)行，對(duì)1mol式(Ⅳ)化合物用0.01至0.5mol鈀配位體復(fù)合物催化劑和0.5至5mol親核試劑，反應(yīng)一般在0.5至5小時(shí)內(nèi)完成。在消除保護(hù)基的反應(yīng)完成以后，式(Ⅰ)化合物可用常用處理方法，例如載于硅膠上的柱色譜法或吸附樹(shù)脂如DiaionHP-29或冷冰干燥或結(jié)晶的方法分離。起始物式(Ⅱ)化合物，當(dāng)其中R1是氫原子時(shí)，可由Salzmann方法獲得(J.Am.Chem.Soc.，Vol.102，6161-6163，1980)，在R1是甲基的情況下，可用Shih方法(Hetercycles，Vol.21，29-40，1984)或EP272，455的方法獲得。起始物式(Ⅲ)化合物可由下面流程1和流程2獲得。流程1的化合物(6)和流程2的化合物(13)是已知的，其制備方法在EP182213，EP243686，和USP4，921，352中描述。式(Ⅲ)或(Ⅲ-a)的硫醇衍生物由化合物(6)或(13)得到，其制備方法在下面的實(shí)施例中敘述。Ac乙?；鵅oc叔丁氧羰基Cbz芐氧羰基Et乙基Me甲基Ms甲磺酰基PMB對(duì)甲氧基芐基PNB對(duì)硝基芐基PNZ對(duì)硝基芐氧羰基TBDMS叔丁基二甲基甲硅烷基Ts對(duì)甲苯磺?；鵓h苯基E反式Z順式Ⅰ.抗菌試驗(yàn)按照日本化學(xué)治療協(xié)會(huì)(JapanSocietyofChemotherapy)的標(biāo)準(zhǔn)方法[Chemotherapy，Vol.29，76-79(1981)]，用瓊脂稀釋法試驗(yàn)抗菌活性，亞胺硫霉素用作內(nèi)標(biāo)物。把10mlMuellerHintonBroth傾入無(wú)菌試管，每種試驗(yàn)微生物用一鉑接種環(huán)接種并在37℃孵育過(guò)夜。但金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是在Tryt-icaseSoyBroth中而不是在MuellerHintonBroth中培育。把5mg各種抗菌劑溶于無(wú)菌蒸餾水中制成抗菌劑溶液，使其濃度為1mg/ml，進(jìn)行一系列成倍稀釋至0.25μg/ml。把1ml各種抗菌溶液傾入各培養(yǎng)皿并滅菌之后，加入經(jīng)過(guò)滅菌和冷卻的9mlMuellerHinton瓊脂基質(zhì)，充分混合;使之固化以制備用于最小抑制濃度(MIC)試驗(yàn)的瓊脂片基質(zhì)。把0.11ml細(xì)胞培養(yǎng)物傾入含有10ml緩沖型鹽水明膠(BSG)溶液的無(wú)菌試管中，并使之充分混合之后，含有抗菌劑的瓊脂片借助器具(stamp)用細(xì)胞懸浮液接種，在37℃下培養(yǎng)18小時(shí)。在觀察到細(xì)胞生長(zhǎng)后，MIC被認(rèn)為是無(wú)細(xì)胞生長(zhǎng)的最低藥物濃度。結(jié)果列于下表。注Staphylococcusaureus金黃色葡萄球菌Escherichiacoil大腸桿菌Klebsiellapneumoniae肺炎桿菌Enterobactercloacae泄殖腸桿菌Serratiamarcescens沙雷氏菌Citrobacterfreundii弗氏檸檬酸菌Proteusmirabilis奇異變形桿菌Proteusvulgaris普通變形桿菌Pseudomonasaeruginoas綠膿桿菌Ⅱ.對(duì)豬的腎脫氫肽酶-Ⅰ的穩(wěn)定性把300g豬腎均化并懸浮于三羥甲基氨基甲烷緩沖液(Trisbuffer)(100mMTris，50mMNaCl，0.01mMZnCl2，pH8.0)加入10%TritonX-100，在4℃攪拌24小時(shí)，以萃取DHP-Ⅰ。把上述萃取液在186，000×g超速離心1小時(shí)制得的上清液二次過(guò)濾(dia-filtered)，去除TritonX-100，加入75%飽和硫酸銨得到沉淀物。把上述沉淀物溶解于Tris緩沖液，將其快速流動(dòng)負(fù)載于DEAE-Sepharose，用陰離子交換色譜法得到豬的DHP-Ⅰ。將上述DHP-Ⅰ分成1ml一份，濃度為1單位/ml，將其貯于0-70℃。用甘氨?；摎浔交被?GDP)和亞胺硫霉素作對(duì)照化合物。按照Campbell的方法(MethodsEngymol.，19722-729，1970)，由酶的反應(yīng)可觀察到吸收率的降低，并測(cè)定最大水解速度。對(duì)DHP-Ⅰ的穩(wěn)定性用相對(duì)于GDP水解速度的比較水解速度來(lái)表示。表2對(duì)豬腎的脫氫肽酶－I的穩(wěn)定性III.毒性實(shí)驗(yàn)把300mg各種抗菌劑溶于無(wú)菌鹽水中，濃度為200mg/ml，以4倍稀釋系列在無(wú)菌試管中制備抗菌劑溶液，直至0.781mg/ml。給體重20±1g的4-5周齡ICR小鼠通過(guò)tale靜脈用藥0.2ml抗菌劑溶液，觀察二周后，確認(rèn)存活的小鼠并用概率分析方法測(cè)定LD50。雄性和雌性的數(shù)目各為5只。表3LD50(mg/Kg)</tables>本發(fā)明化合物對(duì)多種革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌具有良好的抗菌活性，被用作治療和預(yù)防人體由此類(lèi)細(xì)菌引起的傳染病。由于本發(fā)明化合物有寬抗菌譜，它們可用作動(dòng)物飼料添加劑、防腐劑，以及工業(yè)用和醫(yī)用的其它滅菌劑和消毒劑。本發(fā)明的化合物可以適于非口服用藥、口服用藥、外用藥的藥物制劑形式使用。液體制劑如注射液、糖漿或乳劑;固體制劑如片劑、膠囊或粒劑;外用制劑如軟膏或栓劑。劑量隨患者的癥狀、體重、年齡、性別、制劑的類(lèi)型、用藥時(shí)間和次數(shù)而變化。通常對(duì)成年人來(lái)說(shuō)活性成分的優(yōu)選日劑量大約為5-50mg/kg，對(duì)兒童來(lái)說(shuō)優(yōu)選的日劑量在大約5-25mg/kg范圍內(nèi)，優(yōu)選每日一次或一日多次用藥。本發(fā)明的化合物可與DHP-Ⅰ抑制劑如Cilastatin一起用藥?，F(xiàn)在將進(jìn)一步詳述本發(fā)明的實(shí)施例和參考實(shí)施例。然而，應(yīng)該明白這些特定的實(shí)施例決不限制本發(fā)明。在實(shí)施例及參考實(shí)施例中，對(duì)于薄層色譜，采用硅膠60F254(Merck)作為薄層板，采用紫外檢測(cè)器或茚三酮色顯現(xiàn)法、KMnO4顏色顯現(xiàn)法作為檢測(cè)方法。對(duì)于柱色譜的硅膠，采用硅膠60(Merck)，并用UV分光光度計(jì)DMS100S(Varian)測(cè)定紫外吸收。對(duì)于高速液相色譜，采用M-352(ACS)型儀器。NMR譜是在氘代二甲亞砜-d6或氘代氯仿-d1溶液中測(cè)量的，采用四甲基硅烷(TMS)作為內(nèi)標(biāo)物，而當(dāng)在氧化氘溶液中測(cè)量時(shí)，采用2，2-二甲基-2-硅雜戊烷-5-磺酸酯(DSS)。測(cè)量是用Ac200P(200MHzBruker)型儀器進(jìn)行的，所有的δ值都用ppm表示。NMR測(cè)量中所用縮寫(xiě)的含義表示如下s單峰DMSO-d6二甲亞砜-d6d雙峰CDCl3氯仿-d1t三重峰D2O氧化氘q四重峰J偶合值br寬峰Hz赫茲dd雙重雙峰Acetone-d6丙酮-d6m多重峰參考實(shí)施例1(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯參考實(shí)施例1-1向正己烷/乙酸乙酯(1/3)的100ml混合溶液中加入0.982g(2.51mmol)的(3S，4R)-3-[(1R)-(1-羥基乙基)]-4-[(R)-1-甲基-3-重氮基-3-對(duì)硝基芐氧羰基-2-氧代-丙基]-氮雜環(huán)丁烷-2-酮，加入乙酸銠(Ⅱ)二聚體為催化劑，并回流2小時(shí)。反應(yīng)后，使混合物溶液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑，所得漿狀物質(zhì)真空干燥得到0.867g(95%)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯。該化合物不穩(wěn)定，最好立即使用。NMR(CDCl3)δ1.10(d，3H)，1.32(d，3H)，2.80(m，1H)，3.22(dd，1H)，4.20(dd，1H)，4.25(m，1H)，4.70(s，1H)，5.25(m，2H)，7.50(d，2H)，8.20(d，2H)參考實(shí)施例1-2向甲苯/乙酸乙酯(1/1)的100ml混合溶液中，加入0.982g(2.51mmol)的(3S，4R)-3-[(1R)-(1-羥基乙基)]-4-[(R)-1-甲基-3-重氮基-3-對(duì)硝基芐氧羰基-2-氧代-丙基]-氮雜環(huán)丁烷-2-酮以及作為催化劑的乙酸銠(Ⅱ)二聚體，并回流1.5小時(shí)。反應(yīng)后，反應(yīng)混合物采用參考實(shí)施例1-1同樣的操作處理，得到0.611g(67%)(4R，5R，6S，8R)對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯。參考實(shí)施例2(4R，5R，6S，8R)-烯丙基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯參考實(shí)施例2-1向正己烷/乙酸乙酯(1/3)的120ml混合物溶液中加入0.982g(2.51mmol)的(3S，4R)-3-[(1R)-(1-羥基乙基)]-4-[(R)-1-甲基-3-重氮基-3-烯丙氧羰基-2-氧代-丙基]-氮雜環(huán)丁烷-2-酮及作為催化劑的乙酸銠(Ⅱ)二聚體，并回流2.5小時(shí)。反應(yīng)后，混合物溶液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑，所得的漿狀形式的物質(zhì)真空干燥得到0.632g(87.3%)(4R，5R，6S，8R)-烯丙基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯。該化合物也不穩(wěn)定，最好在制得后立即使用。NMR(CDCl3)δ1.10(d，3H)，1.32(d，3H)，2.81(m，1H)，3.21(dd，1H)，4.21(dd，1H)，4.23(m，1H)，4.66(d，2H)，4.69(s，1H)，5.29-6.20(m，3H)參考實(shí)施例3(5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯參考實(shí)施例3-1向140ml苯中加入7g(18.6mmol)(3S，4R)-3-[(1R)-(1-羥基乙基)]-4-[3-重氮基-3-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-氧代-丙基]-氮雜環(huán)丁烷-2-酮以及作為催化劑的乙酸銠(Ⅱ)二聚體，并回流2小時(shí)。反應(yīng)后，混合物溶液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑，向所得的殘留物中加入小體積的二氯甲烷并在室溫下攪拌使之溶解。隨后向反應(yīng)混合物中滴加入二乙醚結(jié)晶并攪拌15分鐘。產(chǎn)生的所需物質(zhì)經(jīng)過(guò)濾和真空干燥后得到3.95g(61.0%)(5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯。因?yàn)樵摶衔锊环€(wěn)定，最好立即用于后續(xù)步驟。NMR(CDCl3)δ1.35(d，3H，J＝6.1Hz)，2.44(m，1H)，2.92(m，1H)，3.19(dd，1H，J＝2.0Hz，J＝7.0Hz)，4.15(m，1H)，4.30(m，1H)，4.75(s，1H)，5.28(m，2H)，7.48(d，2H，J＝8.7Hz)，8.20(d，2H，J＝8.9Hz)優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述實(shí)施例1(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的(E)和(Z)異構(gòu)體實(shí)施例1-1把參考實(shí)施例1中得到的1.197g(3.3mmol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加入100ml無(wú)水乙腈中，在室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。同樣溫度下，滴加750μl(4.3mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入830μl(4.0mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌1小時(shí)。然后加入750μl(4.3mmol)N，N-二異丙基乙胺，并向反應(yīng)混合物中滴加實(shí)施例18-5中得到的1.36g(4.0mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧亞氨基-4-巰基吡咯烷的20ml無(wú)水乙腈溶液。添加后，移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5小時(shí)。反應(yīng)后，反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入乙酸乙酯提取產(chǎn)物。提取液依次用水及飽和氯化鈉水溶液洗滌，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥。過(guò)濾后，將濾液減壓濃縮并蒸除溶劑得到2.2g粗品。粗品用硅膠柱色譜處理(用正己烷乙酸乙酯＝14洗脫)并純化得到0.236g(10.4%)(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯，0.202g(8.9%)(E)-(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧亞氨基吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯以及0.570g(25.2%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物。(1)Z型δ1.12(dd，6H)，2.01(m，1H)，2.80(m，1H)，3.32(dd，J＝2.4Hz，J＝6.4Hz)，3.55-3.80(m，2H)，3.75(s，3H)，3.95-4.32(m，2H)，4.35(m，1H)，4.60(m，1H)，5.20-5.60(m，5H)，7.43(d，1H，J＝6.6Hz)，7.63(d，2H，J＝8.4Hz)，7.79(d，2H，J＝8.5Hz)，8.20(dd，4H)(2)E型δ1.23(d，3H，J＝5.9Hz)，1.26(d，3H，j＝7.2Hz)，2.01(m，1H)，2.80(m，1H)，3.33(dd，1H)，3.55-3.80(m，2H)，3.81(s，3H)，3.95-4.32(m，3H)，4.31(m，1H)，4.80-5.05(m，1H)，5.20-5.60(m，4H)，6.90(m，1H)，7.65(d，2H，J＝8.5Hz)，7.80(d，2H，J＝8.9Hz)，8.20(dd，4H)實(shí)施例1-2向10ml四氫呋喃及10ml0.1M4-嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中加入實(shí)施例1-1中得到的0.316g(0.462mmol)(E)-(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯，并攪拌到溶解。加入0.594g10%鈀/碳催化劑并在氫氣流中室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物用乙酸乙酯洗滌，分離，水層在10-20℃減壓濃縮并過(guò)濾除去提取出的雜質(zhì)。澄清的濾液經(jīng)過(guò)聚合物色譜(DiaionHP-20樹(shù)脂預(yù)先用甲醇和水洗滌)。在色譜過(guò)程中，首先用水洗脫除去4-嗎啉丙磺酸，然后用5%含水丙酮溶液洗脫收集含所需產(chǎn)物的餾份。餾份合并后在10-20℃減壓濃縮。殘留物凍干后得到0.101g(59.2%)(E)-(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。NMR(D2O)δ0.96(d，3H，J＝7.2Hz)，1.08(d，3H，J＝6.3Hz)，1.60(m，1H)，2.45(m，1H)，2.92(m，1H)，3.21(m，3H)，3.63(s，3H)，3.24(m，1H)，4.02(m，2H)，4.42(m，1H)，6.83-7.40(dd，1H，J＝5.3Hz，J＝5.9Hz)實(shí)施例1-3向17ml四氫呋喃及17ml0.1M4-嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入0.521g(0.764mmol)實(shí)施例1-1中得到的(Z)-(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯并攪拌到溶解。加入0.980g10%鈀/碳催化劑并于氫氣氣流中室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑并將濾液于減壓下濃縮以濾除有機(jī)溶劑。殘留物用乙酸乙酯洗滌后，分離，水層在10-20℃減壓濃縮，提取出的雜質(zhì)過(guò)濾除去。澄清的濾液按照實(shí)施例1-2中同樣的方法處理得到0.135g(47.8%)(Z)-(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。NMR(D2O)δ0.98(d，3H，J＝7.2Hz)，1.08(d，3H，J＝6.3Hz)，1.65(m，1H)，2.53(m，1H)，3.01-3.42(m，4H)，3.70(d，6H)，4.02(m，3H)，4.40(m，1H)，6.90and7.40(dd，1H，J＝5.2Hz，J＝5.5Hz)實(shí)施例2(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-乙氧羰基甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例2-1把參考實(shí)施例1中得到的1.39g(3.84mmol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到80ml無(wú)水乙腈中，于室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣的溫度下，滴加入803μl(4.61mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入916μl(4.42mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌1小時(shí)，然后加入803μl(4.61mmol)N，N-二異丙基乙胺，再向混合物溶液中滴加入實(shí)施例19-5得到的1.58g(3.84mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-乙氧羰基甲氧亞氨基-4-巰基吡咯烷的20ml無(wú)水乙腈溶液。添加完后，移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。反應(yīng)后，將反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入乙酸乙酯以提取產(chǎn)物。提取物依次用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥。過(guò)濾后，濾液減壓濃縮并蒸除溶劑得到2.55g粗品。粗產(chǎn)物進(jìn)行硅膠柱色譜處理(用氯仿甲醇＝401洗脫)和純化得到1.32g(45.5%)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-乙氧羰基羧甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的(E)及(Z)混合物。NMR(CDCl3)δ1.10(m，9H)，2.10(m，1H)，2.70(m，1H)，3.20(m，1H)，3.21(m，1H)，4.01(m，1H)，4.20(m，5H)，4.56(m，2H)，5.10-5.50(m，5H)，7.51(d，2H，J＝8.3Hz)，7.62(d，2H，J＝8.5Hz)，8.20(d，4H，J＝8.7Hz)實(shí)施例2-2向14ml四氫呋喃及14ml0.1M4-嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中加入0.439g(0.581mmol)實(shí)施例2-1所得到的(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-乙氧羰基甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的(E)及(Z)的混合物并攪拌到溶解。加入0.280g10%鈀/碳催化劑并在氫氣氣流中室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)后，濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物用乙酸乙酯洗滌后，分離，水層于10-20℃減壓濃縮，然后濾除提取出的雜質(zhì)。澄清的濾液用聚合物色譜分離(DiaionHP-20樹(shù)脂，預(yù)先用甲醇和水洗滌)。在色譜過(guò)程中，先用水洗脫除去4-嗎啉丙磺酸然后用5%含水丙酮溶液洗脫，收集含目的產(chǎn)物的餾份。合并各餾份于10-20℃減壓濃縮。殘留物凍干后得到0.125g(48.8%)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-乙氧羰基甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的(E)和(Z)混合物。NMR(D2O)δ1.10(m，9H)，1.70(m，1H)，2.53(m，1H)，3.05-3.60(m，3H)，3.60-4.00(m，2H)，4.20(m，2H)，4.30-4.80(m，5H)，6.99-7.55(m，2H)實(shí)施例3(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N，N-二甲基氨基羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例3-1把參考實(shí)施例1中所得到的0.696g(1.92mmol)(4R，5S，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到40ml無(wú)水乙腈中，于室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣溫度下，滴加入402μl(2.31mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入458μl(2.21mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌1小時(shí)。然后加入402μl(2.31mmol)N，N-二異丙基乙胺，再向混合物溶液中滴加入實(shí)施例20-5中所得的0.866g(2.11mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲基氨基羰基甲氧亞氨基)甲基-4-巰基吡咯烷的20ml無(wú)水乙腈溶液。添加完后，移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5小時(shí)。反應(yīng)后，反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入乙酸乙酯以提取產(chǎn)物。提取物按實(shí)施例1-1同樣的操作處理得到1.4g粗品。粗品用硅膠柱色譜分離(用氯仿甲醇＝401洗脫)和純化得到0.825g(56.9%)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲氨基羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的(E)和(Z)的混合物。NMR(Acetone-d6)δ1.20(dd，6H)，1.25(m，1H)，2.25(m，1H)，2.85(s，3H)，3.01(s，3H)，3.32(dd，1H，J＝2.6Hz，J＝6.4Hz)，3.60(m，2H)，4.01-4.40(m，3H)，4.70(m，3H)，4.80-5.20(m，1H)，5.20-5.56(m，4H)，7.46(d，2H，J＝8.5Hz)，7.80(d，2H，J＝8.6Hz)，8.20(m，4H)實(shí)施例3-2向10ml四氫呋喃及10ml0.1M4-嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中加入0.520g(0.689mmol)實(shí)施例3-1所得的(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲氨基羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯混合物，并攪拌到溶解。加入0.320g10%鈀/碳催化劑并在氫氣氣流中、室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸去有機(jī)溶劑。殘留物按實(shí)施例2-2同樣的操作處理得到0.162g(53.5%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N，N-二甲氨基羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的混合物。NMR(DMSO-d6)δ1.10(d，3H，J＝6.5Hz)，1.12(d，3H，J＝6.2Hz)，1.40(m，1H)，2.40(m，1H)，2.80(s，3H)，2.90(s，3H)，2.90-3.40(m，4H)，3.80-4.10(m，3H)，4.64(s，2H)，4.90(m，1H)實(shí)施例4(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-羧甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例4-1把參考實(shí)施例1中得到的0.627g(1.71mmol)(4R，5S，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到70ml無(wú)水乙腈中，在室溫?cái)嚢璨⒂帽±鋮s到0℃。在同樣的溫度下，滴加入320μl(1.82mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入377μl(1.82mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌1小時(shí)。然后加入320μl(1.82mmol)N，N-二異丙基乙胺，再向混合物溶液中滴加實(shí)施例21-2中得到的0.755g(1.5mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(對(duì)甲氧芐氧羰基甲氧亞氨基)甲基-4-巰基吡咯烷的20ml無(wú)水乙腈的溶液。添加完后，移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5小時(shí)。反應(yīng)后，反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入乙酸乙酯以提取產(chǎn)物。提取物用實(shí)施例1-1同樣的操作處理得到1.02g粗品。粗品用硅膠柱色譜分離(用氯仿甲醇＝401洗脫)和純化得到0.647g(44.1%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(對(duì)甲氧基芐氧羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物。NMR(Acetone-d6)δ1.22(dd，6H)，2.05(m，1H)，2.80(m，1H)，3.32(dd，1H，J＝2.5Hz，J＝6.4Hz)，3.60(m，1H)，3.65(s，3H)，4.01-4.20(m，4H)，4.30(m，1H)，4.60(s，2H)，5.21-5.54(m，7H)，7.60-7.80(m，6H)，8.20(m，6H)實(shí)施例4-2向12ml四氫呋喃和12ml0.1M4-嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入實(shí)施例4-1中所得的0.410g(0.484mmol)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(對(duì)甲氧芐氧羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物并攪拌到溶解。加入0.2g10%鈀/碳催化劑并在氫氣氣流中室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物按實(shí)施例2-2同樣的操作處理得到0.09g(45%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-羧甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的混合物。NMR(DMSO-d6)δ1.12(d，3H，J＝7.2Hz)，1.15(d，3H，J＝6.2Hz)，1.42(m，1H)，2.30(m，1H)，2.62(m，1H)，3.10(m，1H)，3.11(dd，1H，J＝2.3Hz，J＝6.3Hz)，3.20-4.20(m，4H)，4.40(m，3H)實(shí)施例5(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-氨基羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例5-1把參考實(shí)施例1中所得到的0.714g(1.97mmol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到40ml無(wú)水乙腈中，在室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣的溫度下，滴加入390μl(3.24mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入445μl(2.15mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌1小時(shí)。然后加入390μl(3.24mmol)N，N-二異丙基乙胺，再向混合物溶液中滴加實(shí)施例22-4中所得的0.782g(2.05mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-氨基羰基甲氧亞氨基-4-巰基吡咯烷的20ml無(wú)水乙腈溶液。添加完后，移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5小時(shí)。在反應(yīng)后，反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入乙酸乙酯以提取產(chǎn)物。提取物按實(shí)施例1-1中同樣的操作處理得到1.25g粗品。粗品用硅膠柱色譜(用氯仿∶甲醇＝40∶1洗脫)分離和純化得到0.8g(56%)(E)和(Z)，(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-氨基羰基甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物。NMR(CDCl3)δ1.12(d，3H，J-7.2Hz)，1.15(d，3H，J＝6.1Hz)，1.80(m，1H)，2.60(m，1H)，3.23(dd，1H，J＝2.5Hz，J＝6.4Hz)，3.50(m，2H)，3.90(m，2H)，4.22(m，1H)，4.50(m，3H)，5.10-5.45(m，5H)，5.50-6.20(m，2H)，6.80-7.05(m，1H)，7.40-7.64(m，4H)，8.20(dd，4H)實(shí)施例5-2向18ml四氫呋喃及18ml0.1M4-嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中加入實(shí)施例5-1中所得的0.515g(0.71mmol)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-氨基羰基甲氧亞氨基吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的(E)及(Z)的混合物并攪拌到溶解。加入0.31g10%鈀/碳催化劑并在氫氣氣流中、室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)后，濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物按實(shí)施例2-2同樣的操作處理得到0.17g(58.2%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-氨基羰基甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的混合物。NMR(D2O)δ1.05(d，3H，J＝7.2Hz)，1.08(d，3H，J＝6.2Hz)，1.60(m，1H)，2.40(m，1H)，2.95(m，1H)，3.05-3.40(m，3H)，3.70-4.10(m，3H)，4.40(m，1H)，4.64(s，2H)實(shí)施例6(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲氨基羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例6-1把參考實(shí)施例1中得到的0.601g(1.66mmol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到40ml無(wú)水乙腈中，在室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣溫度下，滴加入348μl(2.00mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入396μl(1.91mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌1小時(shí)。然后加入348μl(2.00mmol)N，N-二異丙基乙胺，再向混合物溶液中滴加入實(shí)施例23-2中所得的0.723g(1.83mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲氨基羰基甲氧亞氨基)甲基-4-巰基吡咯烷的15ml無(wú)水乙腈溶液。添加完后，移去冰浴，反應(yīng)混合物于室溫下攪拌6小時(shí)。反應(yīng)后，反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入乙酸乙酯以提取產(chǎn)物。提取物按實(shí)施例1-1同樣的操作處理得到1.15g粗品。粗品用硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝40∶1洗脫)和純化得到0.706g(57.7%)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲氨基羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的(E)及(Z)混合物。NMR(CDCl3)δ1.11(d，3H，J＝7.2Hz)，1.15(d，3H，J＝6.3Hz)，1.80(m，1H)，2.60(m，1H)，2.80(d，3H)，3.22(dd，1H，J＝2.4Hz，J＝6.4Hz)，3.45(m，2H)，3.80(m，2H)，4.22(m，1H)，4.50(m，3H)，5.10-5.50(m，5H)，7.44(d，2H，J＝8.4Hz)，7.60(d，2H，J＝8.5Hz)，8.20(dd，4H)實(shí)施例6-2向17ml四氫呋喃及17ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入實(shí)施例6-1中所得的0.490g(0.662mmol)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲氨基羰基甲氧亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的(E)及(Z)混合物，并攪拌到溶解。加入0.30g10%鈀/碳催化劑并在氫氣氣流中于室溫下攪拌4小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物按實(shí)施例2-2同樣的操作處理，得到0.173g(61.3%)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲氨基羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的(E)及(Z)混合物。NMR(DMSO-d6)δ1.03(d，3H，J＝7.3Hz)，1.05(d，3H，J＝6.1Hz)，1.42(m，1H)，2.42(m，1H)，2.81(d，3H)，2.91-3.39(m，4H)，3.81-4.11(m，3H)，4.65(d，2H)，4.91(m，1H)實(shí)施例7(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-羥基亞氨基吡咯烷)-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例7-1把參考實(shí)施例1中所得的0.975g(2.69mmol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到80ml無(wú)水乙腈中，在室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣的溫度下，滴加入550μl(3.08mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入613μl(2.96mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌1小時(shí)。然后加入550μl(3.08mmol)N，N-二異丙基乙胺，再向混合物溶液中滴加入實(shí)施例24-6中所得的0.878g(2.70mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羥基亞氨基-4-巰基吡咯烷的20ml無(wú)水乙腈溶液。添加完后，移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5小時(shí)。反應(yīng)后，反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入乙酸乙酯以提取產(chǎn)物。提取物按實(shí)施例1-1中同樣的操作處理得到0.987g粗品。粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝35∶1洗脫)和純化得到0.756g(42.0%)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羥基亞氨基吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的(E)和(Z)混合物。NMR(DMSO-d6)δ1.10(d，3H，J＝7.2Hz)，1.12(d，3H，J＝6.2Hz)，1.90(m，1H)，1.65(m，1H)，3.30(dd，1H)，3.52(m，1H)，3.95(m，3H)，4.22(m，1H)，4.49(m，1H)，5.01-5.50(m，5H)，7.60(d，2H，J＝8.7Hz)，7.72(d，2H，J＝8.7Hz)，8.20(d，4H)，10.8-11.2(brs，1H)實(shí)施例7-2向15ml四氫呋喃及15ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入實(shí)施例7-1中所得的0.470g(0.720mmol)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羥基亞氨基吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的(E)及(Z)混合物并攪拌到溶解。加入0.240g(10%)鈀/碳催化劑并在常壓氫氣下，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物按實(shí)施例2-2同樣的操作處理，得到0.132g(52.8%)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-羥基亞氨基吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的(E)和(Z)混合物。NMR(DMSO-d6)δ1.05(d，3H，J＝7.2Hz)，1.08(d，3H，J＝6.2Hz)，1.40(m，1H)，2.40(m，1H)，2.70(m，1H)，3.10-3.30(m，3H)，3.40-3.80(m，2H)，3.80-4.10(m，2H)，10.63(brs，1H)實(shí)施例8(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲磺酰基-N-甲基亞肼基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例8-1把參考實(shí)施例1中所得的0.804g(2.22mol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到100ml無(wú)水乙腈中，在室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣溫度下，滴加入520μl(2.98mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入600μl(2.89mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌2小時(shí)。然后加入520μl(2.98mmol)N，N-二異丙基乙胺，再向混合物溶液中滴加入實(shí)施例25-5中所得的1.0g(2.40mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲基磺?；?-N-(甲基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷的25ml無(wú)水乙腈溶液。添加完后，移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌72小時(shí)。反應(yīng)后，反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入二氯甲烷以提取產(chǎn)物。提取物用水及飽和氯化鈉水溶液洗滌，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥。過(guò)濾后，濾液減壓濃縮并蒸除溶劑得到1.32g粗品。粗品用硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝20∶1洗脫)和純化得到0.88g(52.1%)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲基磺?；?N-甲基亞肼基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的(E)和(Z)混合物。NMR(CDCl3)δ1.23(d，3H，J＝7.4Hz)，1.31(d，3H，J＝6.2Hz)，2.35(m，1H)，2.64(m，1H)，3.01(s，3H)，3.10(s，3H)，3.30(dd，1H，J＝2.6Hz，J＝6.7Hz)，3.32(m，1H)，3.50(m，1H)，3.80-4.10(m，2H)，4.24(m，2H)，4.73(m，1H)，5.13-5.22(m，4H)，7.10(m，1H)，7.43(d，2H，J＝8.5Hz)，7.60(d，2H，J＝8.7Hz)，8.20(dd，4H)實(shí)施例8-2實(shí)施例8-1所得的1.76g(2.31mmol)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的(E)及(Z)的混合物，用硅膠60F-254進(jìn)行制備性薄層色譜分離(用氯仿∶甲醇＝20∶1洗脫)以分離異構(gòu)體并純化，得到0.22g(12.5%)(E)-(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺酰基-N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯以及0.088g(5.0%)(Z)-(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯。NMR(CDCl3)δ(E)1.23(d，2H，J＝7.3Hz)，1.37(d，2H，J＝6.3Hz)，2.35(m，1H)，2.64(m，1H)，3.01(s，3H)，3.20(s，3H)，3.30(dd，1H，J＝2.7Hz，J＝6.8Hz)，3.31(m，1H)，3.51(m，1H)，4.90(m，2H)，4.23(m，2H)，4.72(m，1H)，5.10-5.50(m，2H)，7.50(d，2H，J＝8.5Hz)，7.60(d，2H，J＝8.7Hz)，8.20(d，2H，J＝8.7Hz)(Z)1.24(d，2H，J＝7.2Hz)，1.36(d，2H，J＝6.3Hz)，2.37(m，1H)，2.65(m，1H)，3.03(s，3H)，3.21(s，3H)，3.29(dd，1H，J＝2.8Hz，J＝6.9Hz)，3.40(m，2H)，4.29(m，3H)，4.89(m，2H)，5.11-5.51(m，2H)，7.50(d，2H，J＝8.5Hz)，7.61(d，2H，J＝8.7Hz)，8.21(d，2H，J＝8.6Hz)實(shí)施例8-3向12ml四氫呋喃及12ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入實(shí)施例8-2中所得的0.37g(0.486mmol)(E)-(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯并攪拌至溶解。加入0.27g10%鈀/碳催化劑并在氫氣氣流中于室溫?cái)嚢?5小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物用乙酸乙酯洗滌后分離，水層在10-20℃減壓濃縮，然后濾除提取出的雜質(zhì)。澄清的濾液進(jìn)行聚合物色譜分離(DiaionHP-20樹(shù)脂，預(yù)先用甲醇和水洗滌)。在此過(guò)程中，先用水洗脫以除去4-嗎啉丙磺酸，再用5%含水丙酮溶液洗脫，收集含所需產(chǎn)品的餾份。合并餾份并使其在10-20℃減壓濃縮，殘留物凍干后得到0.140g(64.5%)(E)-(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。NMR(DMSO-d6)δ(E)1.10(dd，6H)，1.64(m，1H)，2.45(m，1H)，2.90(m，1H)，2.99(s，3H)，3.08(s，3H)，3.20(dd，1H，J＝2.4Hz，J＝6.4Hz)，3.32(m，2H)，3.63(m，1H)，3.90(m，2H)，4.10(m，1H)實(shí)施例8-4向11ml四氫呋喃及11ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入實(shí)施例8-2中所得到的0.33g(0.434mmol)(Z)-(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺酰基-N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯并攪拌到溶解。加入0.23g10%鈀/碳催化劑并在氫氣氣流中于室溫?cái)嚢?7小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物用乙酸乙酯洗滌后分離，水層于10-20℃減壓濃縮，然后濾除提取出的雜質(zhì)。澄清的濾液按實(shí)施例8-3同樣的操作處理，得到0.116g(59.8%)(Z)-(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。NMR(DMSO-d6)δ(Z)1.09(dd，6H)，1.64(m，1H)，2.46(m，1H)，2.91(m，1H)，2.98(s，3H)，3.05(s，3H)，3.19(dd，1H，J＝2.3Hz，J＝6.4Hz)，3.31(m，2H)，3.62(m，1H)，3.89(m，2H)，4.08(m，1H)實(shí)施例8-5向20ml四氫呋喃及20ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入實(shí)施例8-1中所得的0.88g(1.16mmol)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-甲磺酰基-N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的(E)和(Z)的混合物并攪拌到溶解。加入0.5g10%鈀/碳催化劑并在氫氣氣流中于室溫?cái)嚢?2小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物用乙酸乙酯洗滌后分離，水層于10-20℃減壓濃縮，然后濾除形成的雜質(zhì)。澄清的濾液進(jìn)行聚合物色譜分離(DiaionHP-20樹(shù)脂，預(yù)先用甲醇及水洗滌)。在色譜過(guò)程中，首先用水洗脫以除去4-嗎啉丙磺酸，再用5%含水丙酮溶液洗脫以收集含目的產(chǎn)物的餾份。合并餾份，在10-20℃減壓濃縮。殘留物凍干后得到0.30g(58.0%)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的(E)和(Z)混合物。NMR(DMSO-d6)δ1.11(d，3H，J＝7.1Hz)，1.13(d，3H，J＝6.1Hz)，1.63(m，1H)，2.20(m，1H)，3.75(m，2H)，2.93(s，3H)，3.05(s，3H)，3.15(dd，1H)，3.30(m，2H)，3.60-3.90(m，2H)，4.10(m，1H)實(shí)施例9(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(2-吡啶基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例9-1將參考實(shí)施例1中所得到的1.81g(5.0mmol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到110ml無(wú)水乙腈中。在室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣的溫度下，滴加入1.1ml(6.31mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入1.2ml(5.79mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌2小時(shí)。然后加入1.1ml(6.31mmol)N，N-二異丙基乙胺，再向混合物溶液中滴加入實(shí)施例26-5中所得的1.9g(4.73mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(2-吡啶基亞肼基)甲基-4-巰基-吡咯烷的30ml無(wú)水乙腈溶液。添加完后，移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5小時(shí)。反應(yīng)后，把反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入二氯甲烷以提取產(chǎn)物。提取物按實(shí)施例8-1同樣操作處理得到2.5g粗品。粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿甲醇/＝201洗脫)和純化，得到2.08g(55.8%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(2-(吡啶基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物。NMR(CDCl3)δ1.31(d，3H，J＝7.3Hz)，1.38(d，3H，J＝6.2Hz)，2.10(m，1H)，2.64(m，1H)，2.7(dd，1H，J＝2.6Hz，J＝6.8Hz)，3.50(m，5H)，3.75(m，1H)，4.01(m，1H)，4.12(m，2H)，4.62(m，1H)，5.05-5.50(m，5H)，6.75(m，1H)，7.10(m，2H)，7.30-7.65(m，5H)，7.90-8.35(m，5H)實(shí)施例9-2向25ml四氫呋喃及25ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入實(shí)施例9-1中所得的1.3g(1.82mmol)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(2-吡啶基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的(E)和(Z)混合物并攪拌到溶解。加入0.5g10%鈀/碳催化劑，并在常壓氫氣下于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物用乙酸乙酯洗滌后分離，水層于10-20℃減壓濃縮。然后通過(guò)過(guò)濾除去形成的雜質(zhì)。澄清的濾液按實(shí)施例8-5同樣的操作處理，得到0.422g(53.6%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(2-吡啶基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的混合物。NMR(DMSO-d6)δ1.04(d，3H，J＝7.2Hz)，1.06(d，3H，J＝6.2Hz)，1.64(m，1H)，2.50(m，1H)，2.90(m，1H)，3.19(dd，1H，J＝2.5Hz，J＝6.7Hz)，3.10-3.60(m，1H)，3.80(m，2H)，4.10(dd，1H)，6.70(m，1H)，7.05(d，1H，J＝8.3Hz)，7.33(d，1H，J＝5.4Hz)，7.56(m，1H)，8.03(m，1H)實(shí)施例10(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(對(duì)羧基苯基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例10-1把參考實(shí)施例1中所得的0.672g(1.85mmol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到100ml無(wú)水乙腈中，在室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣的溫度下，滴加入0.38ml(2.30mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入0.44ml(2.12mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌2小時(shí)。然后加入0.38ml(2.30mmol)N，N-二異丙基乙胺，再向混合物溶液中滴加入實(shí)施例27-3中所得的1.0g(1.77mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(對(duì)甲氧基芐氧羰基苯基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷的15ml無(wú)水乙腈溶液。添加完后，移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌10小時(shí)。反應(yīng)后，反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入二氯甲烷以提取產(chǎn)物。提取物按實(shí)施例8-1中同樣的操作處理得1.42g粗品。粗品用硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝20∶1洗脫)和純化，得到0.855g(50.7%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(對(duì)甲氧基芐氧羰基苯基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物。NMR(CDCl3)δ1.23(d，3H，J＝7.4Hz)，1.27(d，3H，J＝6.2Hz)，2.05(m，1H)，2.70(m，1H)，3.22(dd，1H，J＝2.5Hz，J＝6.7Hz)，3.40(m，2H)，3.78(s，3H)，4.01(m，1H)，4.22(m，2H)，4.64(m，1H)，5.05-5.45(m，7H)，6.91(d，2H，J＝8.7Hz)，6.93(d，2H，J＝8.2Hz)，7.33(d，2H，J＝8.5Hz)，7.45(m，1H)，7.90(m，4H)，8.20(d，4H，J＝8.7Hz)實(shí)施例10-2向10ml四氫呋喃及10ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物溶液中，加入實(shí)施例10-1中所得的0.38g(0.418mmol)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(對(duì)甲氧基芐氧羰基苯基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的混合物并攪拌到溶解。加入0.15g10%鈀/碳催化劑，并在常壓氫氣下于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后，濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物用乙酸乙酯洗滌后分離，水層于10-20℃減壓濃縮，然后濾除提取出的雜質(zhì)。澄清的濾液按實(shí)施例8-5同樣的操作處理，得到0.102g(51.5%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(對(duì)羧基苯基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的混合物。NMR(D6O)δ1.22(d，3H，J＝7.2Hz)，1.28(d，3H，J＝6.3Hz)，1.43(m，1H)，2.35(m，1H)，2.80(m，2H)，3.15(dd，1H，J＝2.5Hz，J＝6.5Hz)，3.30(m，2H)，3.61-3.85(m，2H)，4.10(m，1H)，6.90(d，2H，8.5Hz)，7.30(d，2H，8.3Hz)實(shí)施例11(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例11-1把參考實(shí)施例1中所得的1.16g(3.20mmol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到120ml無(wú)水乙腈中，在室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣溫度下，滴加入0.66ml(3.78mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入0.72ml(3.49mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌2小時(shí)。然后加入0.66ml(3.78mmol)N，N-二異丙基乙胺，再向反應(yīng)混合物溶液中滴加入實(shí)施例28-4中所得的1.51g(2.91mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-(對(duì)硝基芐氧羰基)-N-甲基亞肼基甲基]-4-巰基吡咯烷的20ml無(wú)水乙腈溶液。添加后，移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌72小時(shí)。反應(yīng)后，反應(yīng)混合物溶液減壓濃縮，向殘留物中加入二氯甲烷以提取產(chǎn)物。提取物按實(shí)施例8-1同樣的操作處理得到2.45g粗品。粗品用硅膠柱色譜分離(用氯仿甲醇＝201洗脫)和純化，得到1.6g(58%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-(對(duì)硝基芐氧羰基)-N-甲基亞肼基甲基]吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的混合物。NMR(CDCl3)δ1.12(d，3H，J＝7.3Hz)，1.18(d，3H，J＝6.3Hz)，2.10(m，1H)，2.70(m，1H)，3.10(m，4H)，3.40(m，2H)，3.75(m，1H)，4.01(m，1H)，4.22(m，1H)，4.70(m，1H)，5.05-5.45(m，6H)，7.50(d，2H，J＝8.7Hz)，7.60(d，2H，J＝8.9Hz)，8.15(d，4H)實(shí)施例11-2向30ml四氫呋喃及30ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入實(shí)施例11-1中所得的1.6g(1.85mmol)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-(對(duì)硝基芐氧羰基)-N-甲基亞肼基甲基]吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物并攪拌到溶解。加入0.8g10%鈀/碳催化劑并在常壓氫氣下于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后，濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物用乙酸乙酯洗滌后分離，水層于10-20℃減壓濃縮，然后濾除提取出的雜質(zhì)。澄清的濾液按實(shí)施例8-5同樣的操作處理，得到0.325g(51.5%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的混合物。NMR(DMSO-d6)δ1.07(d，2H，J＝6.1Hz)，1.09(d，2H，7.2Hz)，1.62(m，1H)，2.19(m，1H)，3.05(br，s，3H)，3.15(dd，1H，J＝2.3Hz，J＝6.4Hz)，3.30(m，2H)，3.61-3.85(m，2H)，3.75(m，2H)，4.05(m，1H)實(shí)施例12(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N，N-二甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例12-1把參考實(shí)施例1中所得的2.83g(7.91mmol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到260ml無(wú)水乙腈中，在室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣溫度下，滴加入1.61ml(9.22mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入1.76ml(8.50mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌2小時(shí)。然后加入1.61ml(9.22mmol)N，N-二異丙基乙胺，再向反應(yīng)混合物溶液中滴加實(shí)施例29-2中所得的2.7g(7.66mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷的35ml無(wú)水乙腈溶液。添加完后，移去冰浴，反應(yīng)混合物溶液在室溫下攪拌7小時(shí)。反應(yīng)后，將反應(yīng)混合物溶液減壓濃縮，向殘留物中加入二氯甲烷以提取產(chǎn)物。提取物按實(shí)施例8-1同樣的操作處理得到3.5g粗品。粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿丙酮＝201洗脫)和純化，得到3.2g(58.8%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物。NMR(CDCl3)δ1.13(d，3H，J＝7.3Hz)，1.17(d，3H，J＝6.3Hz)，2.01(m，1H)，2.60(m，1H)，2.75(s，6H)，3.23(dd，1H，J＝2.7Hz，J＝6.8Hz)，3.27(m，1H)，3.64(m，1H)，4.01(m，1H)，4.22(m，2H)，4.55(m，1H)，5.10-5.50(m，4H)，7.55(d，2H，J＝8.8Hz)，7.62(d，2H，J＝8.7Hz)，8.20(m，4H)實(shí)施例12-2向30ml四氫呋喃及20ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入實(shí)施例12-1中所得的1.0g(1.43mmol)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物并攪拌到溶解。加入0.45g10%鈀/碳催化劑并在常壓氫氣下于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后，濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物用乙酸乙酯洗滌后分離，水層于10-20℃減壓濃縮，然后濾除提取出的雜質(zhì)。澄清的濾液按實(shí)施例8-5中同樣的操作處理，得到0.22g(40.0%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N，N-二甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的混合物。NMR(DMSO-d6)δ1.01(m，6H)，1.59(m，1H)，2.10(m，1H)，2.40(m，1H)，2.64(m，1H)，2.70(s，6H)，2.84(m，1H)，3.10-3.40(m，3H)，3.60-4.13(m，3H)實(shí)施例13(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N，N-二乙基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例13-1把參考實(shí)施例1中所得的1.12g(3.09mmol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到100ml無(wú)水乙腈中，在室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣溫度下，滴加入0.74ml(4.25mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入0.70ml(3.4mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌2小時(shí)。然后加入0.74ml(4.25mmol)N，N-二異丙基乙胺，再向混合物溶液中滴加入實(shí)施例30-2中所得的1.24g(3.26mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二乙基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷的20ml無(wú)水乙腈溶液。添加完后，移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5小時(shí)。反應(yīng)后，將反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入二氯甲烷以提取產(chǎn)物。提取物按實(shí)施例8-1同樣的操作處理得到2.5g粗品。粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿丙酮＝201洗脫)和純化得到1.35g(60.2%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二乙基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物。NMR(CDCl3)δ1.00(t，6H)，1.24(d，3H，J＝7.3Hz)，1.32(d，3H，H＝6.3Hz)，2.01(m，1H)，2.58(m，1H)，3.10(q，4H)，3.23(dd，1H，J＝2.6Hz，J＝6.8Hz)，3.37(m，2H)，3.63(m，1H)，4.01(m，1H)，4.20(m，2H)，4.33(m，1H)，5.10-5.30(m，4H)，7.50(d，2H，J＝8.8Hz)，7.61(d，2H，J＝8.8Hz)，8.20(m，4H)實(shí)施例13-2向30ml四氫呋喃及20ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入實(shí)施例13-1中所得的1.0g(1.38mmol)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二乙基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的(E)和(Z)混合物并攪拌到溶解。加入0.4g10%鈀/碳催化劑，并在常壓氫氣下于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物按實(shí)施例12-2同樣的操作處理得到0.26g(46%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N，N-二乙基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的混合物。NMR(DMSO-d6)δ0.93(t，6H)，1.13(m，6H)，1.53(m，1H)，2.10(m，1H)，2.40(m，1H)，2.64(m，1H)，2.84(m，1H)，3.01(q，4H)，3.10-3.35(m，3H)，3.61-4.15(m，3H)實(shí)施例14(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺?；?亞肼基甲基]吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例14-1把參考實(shí)施例1中所得的0.468g(1.29mmol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到50ml無(wú)水乙腈中，室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣的溫度下，滴加入0.271ml(1.55mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入0.30ml(1.45mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌2小時(shí)。然后加入0.271ml(1.55mmol)N，N-二異丙基乙胺，再向混合物溶液中滴加實(shí)施例31-4中所得的0.69g(1.55mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺酰基亞肼基]甲基-4-巰基吡咯烷的10ml無(wú)水乙腈溶液。添加完后，移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌36小時(shí)。反應(yīng)后，將反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入乙酸乙酯以提取產(chǎn)物。提取物按實(shí)施例8-1同樣的操作處理得到1.2g粗品。粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿甲醇＝401洗脫)和純化，得到0.152g(50.2%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺?；?亞肼基甲基]吡咯烷-4-基-硫基-4-]甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物。NMR(CDCl3)δ1.12(d，3H，J＝7.4Hz)，1.31(d，3H，J＝6.3Hz)，2.10(m，1H)，2.70(m，1H)，2.90(s，6H)，3.10(s，3H)，3.23(dd，1H，J＝2.6Hz，J＝6.9Hz)，3.37(m，2H)，3.63(m，1H)，4.20(m，2H)，4.70(m，1H)，5.10-5.30(m，4H)，7.50(m，2H)，7.59(d，2H，J＝8.7Hz)，8.20(m，4H)實(shí)施例14-2向15ml四氫呋喃及10ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入實(shí)施例14-1中所得的0.5g(0.63mmol)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺酰基)亞肼基甲基]吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物并攪拌到溶解。加入0.25g10%鈀/碳催化劑并在常壓氫氣下于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物按實(shí)施例12-2同樣的操作處理后得到0.16g(53.1%)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺?；?亞肼基甲基]吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的(E)及(Z)混合物。NMR(D6O)δ1.01(dd，6H)，1.59(m，1H)，2.10(m，1H)，2.40(m，1H)，2.60(m，1H)，2.84(m，1H)，2.90(s，6H)，3.10(s，3H)，3.10-3.40(m，3H)，3.60-4.10(m，3H)實(shí)施例15(5R，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例15-1把參考實(shí)施例3-1中所得的3.49g(10.0mmol)(5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到200ml無(wú)水乙腈中，在室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣的溫度下，滴加入2.26ml(14.0mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入2.49ml(12.0mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌2小時(shí)。然后向反應(yīng)混合物溶液中滴加入實(shí)施例25-5中所得的4.65g(11.1mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷的80ml無(wú)水乙腈溶液，并加入2.26ml(13.0mmol)N，N-二異丙基乙胺。添加完后，移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20小時(shí)。反應(yīng)后，反應(yīng)混合物冷卻到0℃并攪拌，過(guò)濾沉淀并用水和少量丙酮洗滌。沉淀在真空干燥器中干燥，得到5.0g(67.0%)(E)和(Z)(5R，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物。NMR(DMSO-d6)δ1.10(d，3H，J＝6.3Hz)，2.03(m，1H)，2.64(m，1H)，3.01(s，3H)，3.28(s，3H)，3.32(m，3H)，3.82-4.20(m，4H)，4.58(m，1H)，5.02-5.50(m，3H)，7.62(m，4H)，8.20(m，4H)實(shí)施例15-2把實(shí)施例15-1中所得的5.0g(6.70mmol)(5R，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的(E)及(Z)混合物經(jīng)過(guò)硅膠制備性薄層色譜處理(用氯仿∶甲醇＝20∶1洗脫)以分離異構(gòu)體并純化，得到0.7g(14.0%)(E)-(5R，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯及0.2g(4.0%)(Z)-(5R，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯。NMR(DMSO-d6)δ(E)1.10(d，3H，J＝6.3Hz)，2.03(m，1H)，2.62(m，1H)，3.02(s，3H)，3.29(s，3H)，3.32(s，3H)，3.82-4.19(m，4H)，4.58(m，1H)，5.01-5.48(m，3H)，7.62(m，4H)，8.20(m，4H)(E)1.10(d，3H，J＝6.2Hz)，2.03(m，1H)，2.62(m，1H)，3.02(s，3H)，3.25(s，3H)，3.33(m，3H)，3.82-4.20(m，4H)，4.59(m，1H)，5.02-5.46(m，3H)，7.63(m，4H)，8.21(m，4H)實(shí)施例15-3向15ml四氫呋喃及8ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入實(shí)施例15-2中所得的0.5g(0.67mmol)(E)-(5R，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲基磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯并攪拌到溶解。加入0.2g10%鈀/碳催化劑并在常壓氫氣下于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。濾掉提取出的雜質(zhì)后，濾液用乙酸乙酯洗滌，水層于10-20℃減壓濃縮以徹底蒸除殘留的有機(jī)溶劑。澄清的濾液進(jìn)行聚合物色譜處理(DiaionHP-20樹(shù)脂，預(yù)先用甲醇及水洗滌)。在色譜過(guò)程中，先用水洗脫以除去4-嗎啉丙磺酸，然后用5%含水丙酮溶液洗脫以收集含目的產(chǎn)物的餾份。合并餾份并于10-20℃減壓濃縮。殘留物凍干后得到0.12g(41.3%)(E)-(5R，6S，8R，2′S，4′S)-3-[(2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。NMR(DMSO-d6)δ1.05(d，2H，J＝6.0Hz)，1.62(m，1H)，2.40(m，1H)，2.65(m，1H)，2.91(s，3H)，2.92(m，1H)，3.04(s，3H)，3.22(m，3H)，3.60(m，1H)，3.82(m，2H)，4.03(m，1H)實(shí)施例15-4向8ml四氫呋喃和4ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中加入實(shí)施例15-2中所得的0.2g(0.26mmol)(Z)(5R，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯并攪拌到溶解。加入0.1g10%鈀/碳催化劑并在氫氣氣流中室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。過(guò)濾除去提取出的雜質(zhì)，濾液按實(shí)施例15-3同樣的操作處理，得到0.08g(35.6%)(Z)-(5R，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲磺酰基-N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。NMR(DMSO-d6)δ1.04(d，2H，J＝6.1Hz)，1.62(m，1H)，2.40(m，1H)，2.64(m，1H)，2.90(s，3H)，3.03(s，3H)，3.21(m，3H)，3.59(m，1H)，3.81(m，2H)，4.01(m，1H)實(shí)施例15-5向150ml四氫呋喃及50ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中，加入實(shí)施例15-2中所得的5.0g(6.7mmol)(5R，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯并攪拌到溶解。加入2.0g10%鈀/碳催化劑并在常壓氫氣中于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。過(guò)濾除去提取bm的雜質(zhì)后，濾液按實(shí)施例15-3同樣的操作處理，得到1.24g(42.7%)(5R，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲磺酰基-N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。NMR(DMSO-d6)δ1.05(d，2H，J＝6.0Hz)，1.62(m，1H)，2.39(m，1H)，2.64(m，1H)，2.90(s，3H)，3.00(s，3H)，3.25(m，3H)，3.59-3.83(m，3H)，4.02(m，1H)實(shí)施例16(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-[1-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基乙基)吡咯烷]-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例16-1把參考實(shí)施例中所得的1.520g(4.19mmol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯溶于180ml無(wú)水乙腈中，在室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣溫度下，滴加入0.737ml(4.23mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入0.877ml(4.23mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌2小時(shí)。然后在反應(yīng)混合物中加入0.737ml(4.23mmol)N，N-二異丙基乙胺，并滴加實(shí)施例32-5中所得的1.80g(4.18mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[1-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基)甲基]-4-巰基吡咯烷的25ml無(wú)水乙腈溶液。添加完后移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。反應(yīng)后，反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入乙酸乙酯以提取產(chǎn)物。提取物按實(shí)施例8-1同樣的操作處理得到3.25g粗品。粗品進(jìn)行硅膠柱色譜處理(用氯仿∶甲醇＝30∶1洗脫)和純化，得到1.74g(53.4%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(1-(N-甲磺酰基-N-甲基亞肼基乙基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物。NMR(CDCl3)δ1.18(d，3H)，1.30(d，3H)，2.02(s，3H)，2.03(m，1H)，2.65(m，1H)，2.83(m，3H)，3.29(dd，1H，J＝6.8Hz，J＝2.3Hz)，3.38(m，2H)，3.70(m，1H)，4.10(dd，1H，J＝6.8Hz，J＝2.6Hz)，4.15(m，1H)，4.60(t，1H)，5.05-5.50(m，4H)，7.52(d，2H，J＝8.7Hz)，7.60(d，2H，J＝8.7Hz)，8.20(m，4H)實(shí)施例16-2向20ml四氫呋喃及25ml0.1M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中加入實(shí)施例16-1中所得的0.68g(0.878mmol)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[1-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基乙基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯并攪拌到溶解。加入0.3g10%鈀/碳催化劑并在常壓氫氣下于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后，濾除催化劑，濾液用少量0.5M嗎啉丙磺酸洗滌并減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物用乙酸乙酯洗滌后分離，水層在低于20℃下減壓濃縮，然后濾除形成的雜質(zhì)。澄清的濾液按實(shí)施例8-5同樣的操作處理，得到0.218g(53.9%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(1-N-甲磺?；?N-甲基亞肼基乙基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的混合物。NMR(CDCl3)δ1.10(m，6H)，1.62(m，1H)，2.01(s，3H)，2.40(m，1H)，2.70(m，1H)，2.80(s，3H)，2.98(s，3H)，3.10(dd，1H，J＝6.4Hz，J＝2.5Hz)，3.12-3.64(m，3H)，3.80-4.02(m，2H)，4.10(dd，1H，J＝9.3Hz，J＝2.4Hz)實(shí)施例17(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-乙磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸實(shí)施例17-1把參考實(shí)施例1中所得的2.84g(7.83mmol)(4R，5R，6S，8R)-對(duì)硝基芐基-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-3，7-二酮-2-羧酸酯加到250ml無(wú)水乙腈中，在室溫下攪拌并用冰浴冷卻到0℃。在同樣溫度下，滴加入1.38ml(7.92mmol)N，N-二異丙基乙胺，加入1.64ml(7.91mmol)氯代磷酸二苯基酯并攪拌2小時(shí)。然后在混合物溶液中加入1.38ml(7.92mmol)N，N-二異丙基乙胺，并滴加實(shí)施例33-4中所得的3.3g(7.67mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-乙磺?；?N-甲基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷的50ml無(wú)水乙腈溶液。添加完后移去冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌48小時(shí)。反應(yīng)后，將反應(yīng)混合物減壓濃縮，向殘留物中加入二氯甲烷以提取產(chǎn)物。提取物按實(shí)施例8-1同樣的操作處理得到5.35g粗品。粗品用硅膠柱色譜分離(氯仿丙酮＝301洗脫)和純化，得到3.42g(57.5%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-乙磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸酯的混合物。NMR(CDCl3)δ1.30(m，9H)，2.10(m，1H)，2.70(m，1H)，3.10(m，1H)，3.50(dd，1H，J＝4.4Hz，J＝11Hz)，3.80(m，1H)，4.05(m，1H)，4.12(m，2H)，4.70(m，1H)，5.10-5.50(m，4H)，7.05(m，1H)，7.45(d，2H，J＝8.1Hz)，7.62(d，2H，J＝8.7Hz)，8.20(m，4H)實(shí)施例17-2向20ml四氫呋喃及20ml0.5M嗎啉丙磺酸緩沖液(pH7.0)的混合物中加入實(shí)施例17-1中所得的0.70g(0.90mmol)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-對(duì)硝基芐基-3-[1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-乙磺?；?N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸并攪拌到溶解。加入0.280g10%鈀/碳催化劑并在常壓氫氣下于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后濾除催化劑，濾液減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。殘留物用乙酸乙酯洗滌后分離，水層于20℃減壓濃縮，然后濾除提取出的雜質(zhì)。澄清的濾液按實(shí)施例8-5同樣的操作處理，得到0.227g(54.5%)(E)和(Z)(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-乙磺酰基-N-甲基亞肼基甲基)吡咯烷-4-基-硫基]-4-甲基-6-(1-羥基乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸的混合物。NMR(DMSO-d6)δ1.10(m，6H)，1.13(m，3H)，1.67(m，1H)，2.44(m，1H)，2.79(m，1H)，3.05(s，3H)，3.15(m，2H)，3.18(dd，1H，J＝2.3Hz，J＝6.3Hz)，3.52(m，2H)，4.10(dd，1H，J＝2.2Hz，J＝9.3Hz)，7.15(d，1H，J＝5.3Hz)實(shí)施例18(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧亞氨基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例18-12.6g(31.14mmol)甲氧基胺鹽酸鹽加到180ml水中并攪拌至溶解后，滴加入1.92g(18.12mmol)碳酸氫鈉并在室溫下攪拌1小時(shí)。反應(yīng)后，向反應(yīng)混合物溶液中滴加入10.56g(25.8mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲?；?4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-吡咯烷的360ml甲醇溶液。添加完后，將反應(yīng)混合物溶液攪拌過(guò)夜。反應(yīng)后，混合物溶液減壓濃縮以蒸除溶劑，然后用乙酸乙酯提取，提取液用水和飽和氯化鈉溶液洗滌幾次后，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥。過(guò)濾，然后把濾液減壓濃縮得到11.5g殘留物。殘留物用硅膠柱色譜分離(用正己烷乙酸乙酯＝51洗脫)和純化，得到7.45g(66.9%)(E)-(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷及1.7g(15%)Z-(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(Acetone-d6)(1)E型δ0.03(s，6H)，0.85(s，9H)，2.10(m，2H)，3.50(m，2H)，3.75(s，3H)，4.55(m，2H)，5.22(m，2H)，7.38(d，1H)，7.65(d，2H)，8.21(d，2H)(2)Z型δ0.03(s，6H)，0.85(s，9H)，2.10(m，2H)，3.65(m，2H)，3.85(s，3H)，4.60(m，2H)，5.30(dd，2H)，7.38(d，1H)，7.65(d，2H)，8.21(d，2H)實(shí)施例18-2向100ml四氫呋喃中加入實(shí)施例18-1中所得的4.85g(11.09mmol)(E)-(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷并在室溫下攪拌至溶解。然后滴加入13.2ml(13.2mmol)1M氟化四丁銨(四氫呋喃溶液)并在室溫下攪拌30分鐘。反應(yīng)后，把混合物溶液減壓濃縮以蒸除溶劑，殘留物溶于乙酸乙酯中并依次用水及氯化鈉洗滌。分離出有機(jī)層后，用無(wú)水硫酸鎂干燥、過(guò)濾，然后濃縮濾液得到5.5g殘留物。殘留物用硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝10∶1洗脫)和純化，得到3.36g(93.8%)(E)-(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧亞氨基-4-羥基吡咯烷。NMR(Acetone-d6)δ2.03-2.40(m，2H)，3.45-3.73(m，2H)，3.79(s，3H)，4.23(m，1H)，4.43(m，1H)，7.39(d，1H)，7.70(d，2H)，8.23(d，2H)實(shí)施例18-3向150ml二氯甲烷中加入由實(shí)施例18-2所得的3.36g(11.07mmol)(E)-(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧基亞氨基-4-羥基吡咯烷并攪拌溶解。然后加入3.4ml(24.4mmol)三乙胺和1.12ml(14.4mmol)甲磺酰氯并于室溫?cái)嚢?0分鐘。反應(yīng)后，減壓濃縮混合物溶液以蒸去溶劑，并用乙酸乙酯萃取殘留物，再依次用水和氯化鈉洗滌。分離出有機(jī)層后，將其用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到5.7g殘留物。將殘留物進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝1.5∶1洗脫)并純化，得到3.96g(94.9%)(E)-(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧基亞氨基-4-甲磺酰氧基吡咯烷。NMR(Acetone-d6)δ2.39-2.64(m，2H)，3.19(s，3H)，3.74(m，3H)，3.75-4.05(m，2H)，4.62(m，1H)，5.25(m，3H)，7.41(d，1H)，7.64(d，2H)，8.22(d，2H)實(shí)施例18-4將從實(shí)施例18-3中得到的3.13g(8.68mmol)(E)-(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧基亞氨基-4-甲磺酰氧基吡咯烷溶于200ml二甲基甲酰胺和甲苯(二甲基甲酰胺∶甲苯＝1∶1)的溶液中。加入16.2g(14.2mmol)乙酸鉀后回流3小時(shí)，減壓濃縮反應(yīng)溶液并將殘留物用乙酸乙酯萃取。用水和氯化鈉洗滌有機(jī)層并用無(wú)水硫酸鎂干燥分離出的有機(jī)層并過(guò)濾。減壓濃縮濾液，得到3.51g殘留物。將殘留物進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝1.5∶1洗脫)并純化，得到2.4g(72.5%，E∶Z＝3∶2)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧基亞氨基-4-乙?；虼量┩?。NMR(Acetone-d6)δ2.32(s，3H)，2.52-2.82(m，2H)，3.14(m，1H)，3.75(s，3Hx3/5)，3.81(s，3Hx2/5)，3.94-4.10(m，2H)，4.40(m，1H)，5.22(m，2H)，6.82(dd，1Hx2/5)，7.41(d，1Hx3/5)，7.62(d，2H)，8.21(d，2H)實(shí)施例18-5將實(shí)施例18-4中所得的2.4g(6.29mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧基亞氨基-4-乙?；量┩槿苡?0ml甲醇中。用冰浴將反應(yīng)溶液冷至0℃后，滴加入8.4ml2N氫氧化鈉水溶液并攪拌3分鐘。就在此之后，于同一溫度下，用飽和檸檬酸將反應(yīng)溶液的pH調(diào)至4.5并減壓濃縮以蒸去有機(jī)溶劑。向殘留物中加入乙酸乙酯以從溶液中萃取產(chǎn)物，用水和飽和氯化鈉洗滌，分離有機(jī)層并用無(wú)水硫酸鎂干燥。過(guò)濾后，濃縮濾液，得到3.0g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1洗脫)并純化，得到1.4g(65.6%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧基亞氨基-4-巰基吡咯烷。NMR(Acetone-d6)δ2.01(m，1H)，2.65(m，1H)，3.19-3.62(m，2H)，3.76(s，3Hx3/5)，3.81(s，3Hx2/5)，3.85-4.20(m，1H)，4.40-5.02(m，1H)，5.23(m，2H)，6.90(dd，1Hx2/5)，7.44(d，1Hx3/5)，7.65(d，2H)，8.22(d，2H)實(shí)施例19(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-乙氧羰基甲氧基亞氨基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例19-1當(dāng)將1.97g(18.58mmol)碳酸氫鈉和2.46g(34.4mmol)羥胺氫氯化物鹽加入380ml水中后，攪拌溶解(反應(yīng)液A)。在另一容器中將14g(34.2mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲酰基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷加入400ml甲醇中并溶解(反應(yīng)液B)。將溶液A加入溶液B中后，將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?0小時(shí)，過(guò)濾沉淀物，并減壓濃縮濾液。向殘留物中加入30%甲醇(aq)后，攪拌20分鐘，過(guò)濾沉淀物。合并上述兩種沉淀物并真空干燥，得到14.18g(98.9%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羥基亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(Acetone-d6)δ0.10(d，6H)，0.89(m，9H)，2.15-2.40(m，1H)，2.82(m，1H)，3.52(m，2H)，4.55(m，2H)，5.23(m，2H)，6.78(m，1Hx1/3)，7.40(m，1Hx2/3)，7.68(d，2H)，8.21(d，2H)實(shí)施例19-2向450ml丙酮中加入由實(shí)施例19-1得到的9.38g(22.16mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羥基亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷并攪拌溶解。然后加入15.31g(110.8mmol)碳酸鉀和4.91ml(44.32mmol)溴乙酸乙酯并于室溫回流3天。反應(yīng)后，減壓濃縮混合物溶液以蒸除溶劑，將殘留物溶于水和乙酸乙酯并用飽和檸檬酸溶液將反應(yīng)液調(diào)至pH5.5。之后，過(guò)量乙酸乙酯加入反應(yīng)液并搖振，依次用水和氯化鈉洗滌混合物溶液，用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層，過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到13.5g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝2.5∶1洗脫)并純化，得到8.83g(78.2%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-乙氧羰基甲氧基亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(Acetone-d6)δ0.03(d，6H)，0.83(s，9H)，1.12(t，3H)，2.07(m，2H)，3.38-3.60(m，2H)，4.20(q，2H)，4.30-4.65(m，3H)，5.22(m，2H)，6.79(m，1Hx1/3)，7.41(d，1Hx2/3)，7.50(m，2H)，8.20(d，2H)實(shí)施例19-3向120ml四氫呋喃中加入由實(shí)施例19-2所得的8.08g(15.86mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-乙氧羰基甲氧基亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷并攪拌至溶解。然后滴加入19.8ml(19.8mmol)1M氟化四丁銨(四氫呋喃溶液)并于室溫?cái)嚢?0分鐘。反應(yīng)后，減壓濃縮混合物溶液以蒸除溶劑，用乙酸乙酯萃取殘留物并用無(wú)水硫酸鎂干燥。向反應(yīng)溶液中滴加5.27ml(39.65mmol)三乙胺和1.85ml(23.9mmol)甲磺酰氯，移去冰浴后，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后，減壓濃縮混合物溶液以蒸除溶劑，并用乙酸乙酯萃取殘留物。依次用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層，過(guò)濾，然后減壓濃縮，得到8.4g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1.5洗脫)。過(guò)濾后，減壓濃縮濾液并將殘留物溶于160ml二氯甲烷，用冰浴冷至0℃并純化，得到5.84g(77.8%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-乙氧羰基甲氧基亞氨基-4-甲磺酰氧基吡咯烷。NMR(Acetone-d6)δ1.10(m，3H)，2.44(m，2H)，2.80(m，2H)，3.20(s，3H)，3.64-4.01(m，2H)，4.12(q，2H)，4.51-4.72(m，3H)，5.21-5.42(m，3H)，7.01(dd，1Hx1/3)，7.58(d，1Hx2/3)，7.63(d，2H)，8.21(d，2H)實(shí)施例19-4在300ml乙腈溶液中溶解由實(shí)施例19-3得到的3.31g(8.68mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-乙氧羰基甲氧基亞氨基-4-甲磺酰吡咯烷。加入5.64g(49.4mmol)乙酸鉀后，回流3小時(shí)，減壓濃縮反應(yīng)液并用乙酸乙酯萃取殘留物。用水和氯化鈉洗滌有機(jī)層并用無(wú)水硫酸鎂干燥分離的有機(jī)層并過(guò)濾。減壓濃縮濾液，得到3.51g殘留物。將此殘留物進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝1.5∶1洗脫)并純化，得到4.16g(72.8%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-乙氧羰基甲氧基亞氨基-4-乙?；虼量┩椤MR(Acetone-d6)δ1.10(m，3H)，2.01(m，1H)，2.30(s，3H)，2.70(m，1H)，3.20-3.62(m，2H)，3.92-4.22(m，4H)，4.50-4.62(m，2H)，5.25(s，2H)，6.92(dd，1Hx1/3)，7.54(d，1Hx2/3)，7.64(d，2H)，8.23(d，2H)實(shí)施例19-5將由實(shí)施例19-4得到的4.16g(9.18mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-乙氧羰基甲氧基亞氨基-4-乙酰基硫代吡咯烷溶于50ml乙醇中。用冰浴將反應(yīng)溶液冷至0℃后，滴加入6ml2N氫氧化鈉水溶液并于0℃攪拌3分鐘。之后，用飽和檸檬酸將反應(yīng)液的pH調(diào)至3.5并減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。用乙酸乙酯萃取殘留物，用水和飽和氯化鈉洗滌有機(jī)層，并用無(wú)水硫酸鎂干燥。過(guò)濾后，減壓濃縮濾液，得到5.78g殘留物。將殘留物進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1洗脫)并純化，得到3.83g(75%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-乙氧羰基甲氧基亞氨基-4-巰基吡咯烷。NMR(Acetone-d6)δ1.12(m，3H)，2.03(m，1H)，2.65(m，1H)，3.25-3.75(m，2H)，3.95-4.25(m，2H)，4.43-4.70(m，2H)，5.30(s，2H)，6.98(dd，1Hx1/3)，7.51(d，1Hx2/3)，7.65(d，2H)，8.21(d，2H)實(shí)施例20(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲基氨基羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例20-1將1.85g(3.63mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-乙氧羰基甲氧基亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷加入30ml丙酮中并攪拌溶解。于室溫下，滴加入2.8ml2N氫氧化鈉水溶液并攪拌3小時(shí)，并于同一溫度下，用飽和檸檬酸將溶液的pH值調(diào)至2.0。分離后用水和飽和氯化鈉洗滌該層數(shù)次，用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層，過(guò)濾，然后減壓濃縮濾液。減壓干燥所生成的固體物質(zhì)1.73g(99%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羧基甲氧基亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ0.03(d，6H)，0.81(s，9H)，2.10(m，2H)，3.50(m，2H)，4.38(m，1H)，4.58(m，3H)，5.20(m，2H)，6.80(m，1Hx1/3)，7.40(d，1Hx2/3)，7.50(d，2H)，8.19(d，2H)實(shí)施例20-2將實(shí)施例20-1所得的4.13g(8.58mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羧基甲氧基亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷加入70ml四氫呋喃中并用冰浴冷至0℃。然后滴加入1.56ml(11.19mmol)三乙胺和0.93ml(10.35mmol)氯甲酸乙酯并于同一溫度攪拌30分鐘。滴加入0.93ml(10.3mmol)50%二甲胺水溶液，移去冰浴并于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后，減壓濃縮反應(yīng)混合物，并用乙酸乙酯萃取。依次用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)層。分離后，用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層，過(guò)濾并濃縮，得到4.14g(95%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲氨基羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷粗品。此粗品不需純化就可用于下一個(gè)反應(yīng)。NMR(CDCl3)δ0.03(s，6H)，0.80(s，9H)，2.03(m，2H)，2.95(d，6H)，3.50(m，2H)，4.30-4.75(m，4H)，5.20(m，2H)，6.80(m，1Hx1/3)，7.50(d，1Hx2/3)，8.19(d，2H)實(shí)施例20-3將從實(shí)施例20-2所得的4.3g(8.46mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲氨基羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷加入70ml四氫呋喃中，并滴加入10.5ml(10.5mmol)1M氟化四丁銨(四氫呋喃溶液)于室溫?cái)嚢?0分鐘。反應(yīng)后，減壓濃縮反應(yīng)混合物，并用乙酸乙酯萃取。用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層并過(guò)濾，減壓濃縮，得到3.29g粗品。將此粗品溶于70ml二氯甲烷中。用冰浴將反應(yīng)液溫度調(diào)至0℃后，滴加入2.9ml(21.02mmol)三乙胺和0.98ml(12.66mmol)甲磺酰氯，移去冰浴，升溫至室溫。在同一溫度下，攪拌1小時(shí)后，減壓濃縮反應(yīng)混合物，并用乙酸乙酯萃取。依次用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)層。分離后用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層，并過(guò)濾和濃縮，得到5.6g殘留物。將此殘留物進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝20∶1洗脫)并純化，得到3.4g(85%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲氨基羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-甲磺酰氧基吡咯烷。NMR(Acetone-d6)δ1.80-2.20(m，2H)，2.80-3.05(d，6H)，3.09(s，3H)，3.50-3.70(m，2H)，4.50-4.80(m，3H)，5.10(m，1H)，5.20(m，2H)，6.90(dd，1Hx1/3)，7.50(d，1Hx2/3)，7.65(d，2H)，8.21(d，2H)實(shí)施例20-4將從實(shí)施例20-3中所得的1.55g(32.84mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲氨基羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-甲磺酰氧基吡咯烷溶于100ml乙腈中。加入1.1g(96.3mmol)硫代乙酸鉀并回流4小時(shí)后，進(jìn)行如實(shí)施例19-4的同樣操作，得到1.2g粗品。減壓濃縮此粗品溶液得到3.51g殘留物。將殘留物進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用丙酮∶乙酸乙酯＝1∶9洗脫)并純化，得到0.82g(55%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲氨基羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-乙?；虼量┩椤MR(CDCl3)δ2.05(m，2H)，2.12(s，3H)，2.90(d，6H)，3.55(m，1H)，3.95(m，2H)，4.50-4.80(m，3H)，5.19(s，2H)，6.80(d，1Hx1/3)，7.50(d，1Hx8/3)，8.18(d，2H)實(shí)施例20-5將實(shí)施例20-4所得的0.68g(0.503mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲氨基羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-乙?；量┩槿苡?0ml甲醇中并用冰浴冷至0℃。滴加入1.5ml2N氫氧化鈉水溶液并攪拌3分鐘。就在此之后，于同一溫度下，用飽和檸檬酸將反應(yīng)溶液的pH值調(diào)至4.2。減壓濃縮反應(yīng)混合物，進(jìn)行如實(shí)施例18-5的同樣操作，得到0.82g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝30∶1洗脫)并純化，得到0.524g(85%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲氨基羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-巰基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.0(m，2H)，2.40-2.60(m，2H)，2.82(s，6H)，3.32(m，1H)，3.95(m，2H)，4.44(m，1H)，4.62(m，2H)，5.10(m，2H)，7.42(d，2H，J＝8.6Hz)，8.59(d，2H，J＝8.1Hz)實(shí)施例21(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(對(duì)甲氧基芐氧羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例21-1將6.6g(13.7mmol)實(shí)施例20-1所得的(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(羧基甲氧基亞氨基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷的150mlN，N-二甲基甲酰胺溶液加入反應(yīng)混合物中，劇烈攪拌下加入4.9g(35.45mmol)碳酸鉀和2.3g(14.7mmol)對(duì)甲氧基芐基氯。對(duì)同一溫度下將反應(yīng)混合物攪拌1天后，用高真空泵減壓濃縮，然后用乙酸乙酯萃取。用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌該萃取溶液后，用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層并過(guò)濾，然后減壓濃縮濾液，得到6.04g(73.3%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(對(duì)甲氧基芐氧羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ0.03(d，6H)，0.80(s，9H)，2.00(m，2H)，3.50(m，2H)，3.80(s，3H)，4.40(m，1H)，4.60(m，3H)，5.10(m，2H)，5.20(m，2H)，6.83(d，1Hx7/3)，7.23(d，2H)，7.50(m，1Hx8/3)，8.19(d，2H)實(shí)施例21-2用實(shí)施例20的同樣操作處理實(shí)施例21-1所得的(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(對(duì)甲氧基芐氧羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷，得到期望的產(chǎn)物(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(對(duì)甲氧基芐氧羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-巰基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ1.80(t，1H)，2.02(m，2H)，2.39-2.90(m，1H)，3.30-3.70(m，2H)，3.78(s，3H)，4.00(m，1H)，4.42-4.64(m，2H)，4.70-5.05(m，1H)，5.15(m，4H)，7.00(d，1Hx2/3)，7.56(d，1Hx1/3)，8.22(d，4H)實(shí)施例22(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-氨基羰基甲氧基亞氨基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例22-1將實(shí)施例20-1中所得的4.29g(8.91mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羧基甲氧基亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷溶于100ml四氫呋喃中并用冰浴冷至0℃。然后滴加入1.61ml(11.6mmol)三乙胺和1.02ml(10.7mmol)氯甲酸乙酯并于同一溫度攪拌1小時(shí)。加入2ml28%氨水，移去冰浴并于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后，減壓濃縮反應(yīng)混合物，然后用乙酸乙酯萃取，依次用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌萃取液后，用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層并過(guò)濾，然后減壓濃縮濾液，得到6.7g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝20∶1洗脫)并純化，得到3.25g(76%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-氨基羰基甲氧基亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ0.03(d，6H)，0.83(s，9H)，1.70-2.15(m，2H)，3.46(m，2H)，4.35-4.65(m，4H)，5.20(m，2H)，6.60(d，1Hx1/3)，7.49(d，1Hx8/3)，4.35-8.20(d，2H)實(shí)施例22-2將實(shí)施例22-1中所得的2.52g(5.26mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-氨基羰基甲氧基亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷溶于80ml四氫呋喃。然后滴加入6.29ml(6.29mmol)1M氟化四丁銨(四氫呋喃溶液)并于室溫?cái)嚢?0分鐘。反應(yīng)后減壓濃縮反應(yīng)混合物，將殘留物溶于乙酸乙酯(100ml×3)并用無(wú)水硫酸鎂干燥。然后減壓濃縮。將殘留物溶于80ml二氯甲烷并用冰浴冷至0℃，滴加入1.46ml(10.84mmol)三乙胺和0.53ml(6.81mmol)甲磺酰氯，除去冰浴并于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后減壓濃縮混合物溶液，用乙酸乙酯萃取并依次用水和鹽水洗滌。分離出有機(jī)層后，將其用無(wú)水硫酸鎂干燥并過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到2.8g殘留物。將殘留物進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝25∶1洗脫)并純化，得到1.56g(66.9%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-氨基羰基甲氧基亞氨基-4-甲磺酰氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.01-2.80(m，2H)，3.03(s，3H)，3.70(m，1H)，4.01(m，1H)，4.42-4.70(m，3H)，5.20(m，3H)，6.62(d，1Hx1/3)，7.49(d，1Hx8/3)，8.20(d，2H)實(shí)施例22-3將實(shí)施例22-2中所得的1.28g(2.89mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-氨基羰基甲氧基亞氨基-4-甲磺酰氧基吡咯烷溶于100ml乙腈。然后加入0.825g(7.23mmol)乙酸鉀并回流4小時(shí)。反應(yīng)后，減壓濃縮混合物溶液，并用實(shí)施例19-4的同樣操作處理殘留物，得到2.2g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝25∶1洗脫)并純化，得到1.0g(81.7%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-氨基羰基甲氧基亞氨基-4-乙?；虼量┩?。NMR(CDCl3)δ2.03(m，1H)，2.28(s，3H)，2.60(m，1H)，3.34(m，1H)，3.98(m，2H)，4.43(m，H)，5.19(s，2H)，6.01-6.43(m，2H)，6.70(d，1Hx1/3)，7.50(d，1Hx8/3)，8.19(d，2H)實(shí)施例22-4將實(shí)施例22-3中所得1g(2.36mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-氨基羰基甲氧基亞氨基-4-乙酰基硫代吡咯烷溶于50ml甲醇和10ml四氫呋喃的混合物中并用冰浴冷至0℃。滴加入2.4ml2N氫氧化鈉后攪拌3分鐘。用飽和檸檬酸水溶液將反應(yīng)液的pH調(diào)至3.5。減壓濃縮反應(yīng)溶液，用乙酸乙酯萃取殘留物，然后用實(shí)施例19-1的同樣操作處理，得到0.95g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝18∶1洗脫)并純化，得到0.77g(85.6%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-氨基羰基甲氧基亞氨基-4-巰基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ1.60-2.00(m，2H)，2.40(m，2H)，3.20-3.60(m，2H)，3.90(m，2H)，4.40(m，2H)，5.09(m，1H)，5.12(s，2H)，5.85-6.80(m，2H)，6.80(d，1Hx1/3)，7.42(d，1Hx8/3)，8.05(d，2H)實(shí)施例23(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲基氨基羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例23-1向用冰浴冷至0℃的90ml四氫呋喃中加入5.31g(11.03mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羰基甲氧基亞氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷并攪拌溶解。加入2ml(14.36mmol)三乙胺和1.27ml(13.28mmol)氯甲酸乙酯并將反應(yīng)混合物溶液于同一溫度攪拌30分鐘。然后移去冰浴加入1.07ml(14.3mmol)40%甲胺水溶液并攪拌1小時(shí)。反應(yīng)后，減壓濃縮該混合物溶液，然后用乙酸乙酯萃取。用實(shí)施例20-2的同樣操作處理萃取液，得到5.3g(97.2%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲基氨基羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。此產(chǎn)物無(wú)需純化即可用于下一個(gè)反應(yīng)。NMR(CDCl3)δ0.03(s，6H)，0.80(s，9H)，2.05(m，2H)，2.92(d，3H)，3.48(m，2H)，4.29-4.72(m，4H)，5.21(m，2H)，6.80(m，1Hx1/3)，7.51(m，1Hx8/3)，8.20(d，2H)實(shí)施例23-2用實(shí)施例20的同樣操作處理實(shí)施例23-1所得的(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲基氨基羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷，得到(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲基氨基羰基甲氧基亞氨基)甲基-4-巰基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.10(m，1H)，2.55(m，1H)，2.60(d，3H)，3.20-3.70(m，2H)，4.05(m，1H)，4.42(d，2H)，4.50-4.80(m，1H)，5.32(d，2H)，7.01-7.50(m，1H)，7.70(d，2H)，8.22(d，2H)實(shí)施例24(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羥基亞氨基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例24-1在用冰浴冷至0℃的200ml二氯甲烷中溶解19.9g(61.36mmol)(E)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-4-羥基-L-脯氨酸甲基酯。加入11.12ml(79.78mmol)三乙胺和4.99ml(64.45mmol)甲磺酰氯并移去冰浴，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后，加入200ml水，劇烈振動(dòng)，從有機(jī)層分離出水層。向水層中加入250ml二氯甲烷并劇烈攪拌以萃取產(chǎn)物。將此有機(jī)層與先前的有機(jī)層合并并依次用水和鹽水洗滌。再分離出有機(jī)層，用無(wú)水硫酸鎂干燥并過(guò)濾，然后減壓濃縮濾液，得到24.45g(99%)粗品(E)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-4-甲磺酰-L-脯氨酸甲酯。此物質(zhì)無(wú)需純化即可用于下一個(gè)反應(yīng)。NMR(CDCl3)δ2.02(m，1H)，2.35(m，1H)，3.01(s，3H)，3.50-3.70(m，2H)，3.60(s，3H)，4.10(m，1H)，5.20(s，2H)，5.22(m，1H)，7.43(d，2H)，8.15(d，2H)實(shí)施例24-2將2.16g(19.46mmol)無(wú)水氯化鈣加入30ml無(wú)水乙醇后，攪拌并分散該混合物溶液，用冰浴冷至0℃，并加入1.07g(28.28mmol)氫硼化鈉(溶液A)。在同一溫度攪拌后，將實(shí)施例24-1所得2.85g(7.08mmol)(E)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-4-甲磺?；?L-脯氨酸甲酯的11ml無(wú)水乙醇溶液滴加入溶液A中。移去冰浴后加入此反應(yīng)混合物溶液并于室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入飽和檸檬酸溶液以除去過(guò)量的氫硼化鈉并減壓濃縮。用乙酸乙酯萃取殘留物并依次用水和鹽水洗滌。分離出有機(jī)層后，將其用無(wú)水硫酸鎂干燥和過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到2.59g(7.7%)幾乎是純的物質(zhì)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羥甲基-4-甲磺酰氧吡咯烷。此物質(zhì)無(wú)需純化即可用于下一個(gè)反應(yīng)。NMR(CDCl3)δ2.03(m，1H)，2.32(m，1H)，3.02(s，3H)，3.50-4.20(m，5H)，5.19(s，2H)，5.21(m，1H)，7.22(d，2H)，8.15(d，2H)實(shí)施例24-3將298μl(3.49mmol)草酰氯溶解在用于冰浴冷至-10℃的10ml無(wú)水二氯甲烷中，將反應(yīng)混合物浴液冷至-78℃。然后滴加入454μl(6.40mmol)無(wú)水二甲基亞砜，并于同一溫度攪拌10分鐘，再滴加入實(shí)施例24-2所得的1.09g(2.91mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羥甲基-4-甲磺酰氧基吡咯烷的5ml無(wú)水二氯甲烷溶液。加入后，將溶液于-60℃攪拌30分鐘，并加入2.03ml(11.64mmol)二異丙基乙胺，移去干冰浴使自然升溫至室溫。于室溫，將此溶液攪拌1小時(shí)，減壓濃縮，用乙酸乙酯萃取殘留物，依次用水和鹽水洗滌。分離有機(jī)層后，將其用無(wú)水硫酸鎂干燥并過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到1.3g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝40∶1洗脫)并純化，得到0.95g(87.7%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲酰基-4-甲磺酰氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.10-2.60(m，2H)，3.01(d，3H)，3.60-4.01(m，2H)，4.45(m，1H)，5.19(m，1H)，5.22(s，2H)，7.43(d，2H)，8.15(d，2H)，9.50(d，1H)實(shí)施例24-4向10ml水中加入86.8ml(1.25mmol)碳酸氫鈉和164mg(1.55mmol)羥胺氫氯化物鹽后，再加入實(shí)施例24-3所得442mg(1.19mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲?；?4-甲磺酰吡咯烷的10ml乙醇溶液，然后于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。減壓濃縮反應(yīng)溶液并用乙酸乙酯萃取殘留物。用水和鹽水洗滌有機(jī)層并用無(wú)水硫酸鎂干燥分離的有機(jī)層并過(guò)濾。減壓濃縮640mg所得粗品，得到350mg殘留物。將殘留物進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝25∶1洗脫)并純化，得到350mg(75.9%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羥基-4-甲磺酰氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.01-2.90(m，2H)，3.00(d，3H)，3.65(m，1H)，3.95(m，1H)，4.63(m，1H)，5.20(m，3H)，6.80(d，1Hx1/3)，7.15(d，1Hx2/3)，7.50(d，2H)，8.15(d，2H)實(shí)施例24-5在10ml乙腈中溶解實(shí)施例24-4所得的255mg(0.66mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羥基亞氨基-4-甲磺酰氧基吡咯烷。當(dāng)加入188mg(1.65mmol)硫代乙酸鉀并于室溫回流2小時(shí)后，減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。用乙酸乙酯萃取殘留物，用水和鹽水洗滌，分離有機(jī)溶劑并用無(wú)水硫酸鎂干燥。過(guò)濾后，濃縮濾液，得到118mg粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝50∶1洗脫)并純化，得到87.1mg(36%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羥基亞氨基-4-乙?；虼量┩?。NMR(CDCl3)δ1.80(m，1H)，2.60(m，1H)，3.30(m，1H)，4.0(m，2H)，4.5-5.0(s，1H)，5.20(s，2H)，6.75，7.30(d，dd，1H)，7.60(d，2H)，8.20(d，2H)，10.8-11.0(m，1H)實(shí)施例24-6用冰浴將甲醇和2ml四氫呋喃溶液冷至0℃后，將實(shí)施例24-5所得100mg(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羥基亞氨基-4-乙?；虼量┩榧尤肫渲胁嚢枞芙?，將0.32ml2N氫氧化鈉溶液加入并于同一溫度攪拌3分鐘，并用飽和檸檬酸將溶液的pH值調(diào)至3.5。減壓濃縮反應(yīng)溶液并將殘留物用乙酸乙酯萃取。依次用水和鹽水洗滌有機(jī)層，用無(wú)水硫酸鎂干燥分離的有機(jī)層并過(guò)濾。減壓濃縮濾液，得到101mg粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶乙酸甲酯＝30∶1洗脫)并純化，得到79mg(89.3%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-羥基亞氨基-4-巰基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.01(m，1H)，2.30(d，2H)，2.71(m，2H)，3.21-3.59(m，2H)，4.01(m，1H)，4.91-5.01(m，1H)，5.31(s，2H)，7.71(d，2H)，8.20(d，2H)，10.01(m，1H)實(shí)施例25(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺酰-N-甲基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例25-1向200ml二氯甲烷加入8.16g(19.97mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲?；?4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷后，加入1.5ml(28.20mmol)甲基肼并攪拌2小時(shí)。反應(yīng)后，用200ml水洗滌混合物溶液并用無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)層并過(guò)濾，然后減壓濃縮濾液并進(jìn)行真空干燥，得到8.7g(99.7%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲基亞肼基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ0.02(d，6H)，0.81(s，9H)，1.95-2.10(m，2H)，2.75(s，3H)，3.5(m，2H)，4.39(br，s，1H)，4.59(m，1H)，5.20(m，2H)，7.49(d，2H)，8.16(d，2H)實(shí)施例25-2向用冰浴冷至0℃的150ml四氫呋喃中加入由實(shí)施例25-1所得的8.7g(19.93mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲基亞肼基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。然后滴加入27ml(27.0mmol)1M氟化四丁基銨(四氫呋喃溶液)并攪拌30分鐘。移去冰浴后于室溫?cái)嚢?小時(shí)，減壓濃縮混合物溶液，并將200ml二氯甲烷加入殘留物中，再用水和鹽水洗滌。分離出有機(jī)層后，將其用無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到7.5g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝10∶1洗脫)并純化，得到5.8g(90.2%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲基亞肼基)甲基-4-羥基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.10(m，1H)，2.56(m，1H)，2.73(s，3H)，3.58(m，2H)，4.44(brs，1H)，4.62(m，1H)，5.19(m，2H)，7.49(d，2H)，8.18(d，2H)實(shí)施例25-3向100ml二氯甲烷中加入實(shí)施例25-2所得的5.8g(17.97mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲基亞肼基)甲基-4-羥基吡咯烷并加入5.5ml(39.5mmol)三乙胺和3.17ml(40.96mmol)甲磺酰氯并于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后，用水洗滌混合物溶液并用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后減壓濃縮濾液，得到7.6g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝20∶1洗脫)并純化，得到6.12g(71%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基)甲基-4-甲磺酰氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.40(m，2H)，2.83(s，3H)，2.94(s，3H)，3.04(m，3H)，3.63(m，1H)，3.89(m，1H)，4.70(m，2H)，5.19(s，2H)，5.21(m，1H)，7.40(d，2H)，8.16(d，2H)實(shí)施例25-4在150ml無(wú)水乙腈中溶解實(shí)施例25-3所得的5g(10.44mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基)甲基-4-甲磺酰吡咯烷。加入1.67g(4.62mmol)乙酸鉀后，回流4小時(shí)，減壓濃縮反應(yīng)混合物，加入二氯甲烷并溶解，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓濃縮濾液，得到7.7g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1.5洗脫)并純化，得到3.0g(62.6%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基)甲基-4-乙酰基硫代吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.10(m，1H)，2.64(m，1H)，2.98(s，3H)，3.16(s，3H)，3.42(m，1H)，4.04(m，1H)，4.62(m，2H)，5.23(s，2H)，7.10(m，1H)，7.52(d，2H)，8.11(d，2H)實(shí)施例25-5在用冰浴冷至0℃的80ml甲醇中加入實(shí)施例25-4所得的1.5g(3.27mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺酰-N-甲基亞肼基)甲基-4-乙?；虼量┩椴嚢柚寥芙?，滴加入3.3ml2N氫氧化鈉并攪拌2分鐘。然后于同一溫度下，用飽和檸檬酸將反應(yīng)溶液的pH值調(diào)至4.0，減壓濃縮以蒸出有機(jī)溶劑。將殘留物溶于二氯甲烷并萃取，用水洗滌萃取液。用無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)層。過(guò)濾后，減壓濃縮濾液，真空干燥產(chǎn)出的結(jié)晶，得到1.0g(73.4%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲磺酰-N-甲基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.05(m，1H)，2.81-3.03(m，6H)，3.41-3.75(m，3H)，4.60-4.80(m，2H)，5.10(m，2H)，7.52(dd，2H)，8.20(m，2H)實(shí)施例26(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(2-吡啶基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例26-1將4.9g(11.99mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲?；?4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷加入100ml二氯甲烷后，加入1.37g(12.55mmol)2-亞肼基吡啶并攪拌4小時(shí)。反應(yīng)后，用水洗滌所得的有機(jī)層并用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后減壓濃縮濾液，得到6.8g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1洗脫)并純化，得到4.9g(81.8%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(2-吡啶基亞肼基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ0.03(d，6H)，0.83(s，9H)，2.19(m，2H)，3.52(m，2H)，4.42(m，1H)，4.63(m，1H)，5.19(m，2H)，6.72(m，1H)，7.01-7.30(m，2H)，7.31-7.60(m，3H)，7.90-8.20(m，2H)，9.20(brs，1H)實(shí)施例26-2向100ml用冰浴冷至0℃的四氫呋喃中加入在實(shí)施例26-1中所得的4.9g(9.8mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(2-吡啶基亞肼基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷并于室溫?cái)嚢柚寥芙?。然后滴加?3.01ml(13.0mmol)1M氟化四丁基銨(四氫呋喃溶液)并攪拌30分鐘。移去冰浴后，將混合物溶液于室溫?cái)嚢?小時(shí)。減壓濃縮混合物溶液，加入100ml二氯甲烷并攪拌溶解，然后用實(shí)施例25-2的同一操作處理，得到7.1g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝10∶1洗脫)并純化，得到3.67g(97.1%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(2-吡啶基亞肼基)甲基-4-羥基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.20(m，2H)，3.64(m，2H)，4.39(m，1H)，4.75(m，1H)，5.20(m，2H)，6.72(m，1H)，6.90-7.19(m，2H)，7.15-7.60(m，3H)，7.89-8.14(m，3H)，9.01(br，s，1H)實(shí)施例26-3向100ml二氯甲烷中加入由實(shí)施例26-2所得的3.67g(9.52mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(2-吡啶基亞肼基)甲基-4-羥基吡咯烷并攪拌溶解。然后加入2.9ml(20.9mmol)三乙胺和0.9ml(11.63mmol)甲磺酰氯并于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后，用水洗滌混合物溶液并用無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)層并過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到5.1g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝20∶1洗脫)并純化，得到3.9g(88.4%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(2-吡啶基亞肼基)甲基-4-甲磺酰氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.35-2.80(m，2H)，3.75(m，1H)，4.02(m，1H)，4.80(m，1H)，5.22(m，3H)，6.80(m，1H)，7.05(m，2H)，7.40-7.60(m，3H)，7.90-8.42(m，4H)實(shí)施例26-4向100ml無(wú)水乙腈和5ml二甲基甲酰胺的溶液中加入由實(shí)施例26-3中所得的3.9g(8.4mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(2-吡啶基亞肼基)甲基-4-甲磺?；量┩椴嚢枞芙狻＜尤?.11g(18.5mmol)硫代乙酸鉀后，回流7小時(shí)，減壓濃縮反應(yīng)溶液并加入二氯甲烷至溶解，用無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。減壓濃縮濾液，得到5.3g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1洗脫)并純化，得到2.87g(76.9%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(2-吡啶基亞肼基)甲基-4-乙?；虼量┩?。NMR(CDCl3)δ2.05(m，1H)，2.32(s，3H)，3.41(m，1H)，4.05(m，2H)，4.62(m，1H)，5.20(m，2H)，6.74(m，1H)，7.12(m，2H)，7.38-7.62(m，3H)，7.89-8.23(m，3H)，8.98(m，1H)實(shí)施例26-5向用冰浴冷至0℃的100ml甲醇中加入由實(shí)施例26-4所得的2.8g(6.31mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(2-吡啶基亞肼基)甲基-4-乙?；虼量┩椴嚢枞芙狻５渭尤?.31ml2N氫氧化鈉并攪拌3分鐘。在同一溫度下，用飽和檸檬酸將反應(yīng)液的pH值調(diào)至4.2并減壓濃縮以蒸除有機(jī)溶劑。將殘留物溶于二氯甲烷并用水洗滌，分離有機(jī)溶劑并用無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾后，減壓濃縮濾液，得到4.3g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝30∶1洗脫)并純化得到1.9g(75%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(2-吡啶基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ1.70-2.20(m，3H)，3.30-3.90(m，2H)，4.52-5.40(m，4H)，6.59-7.15(m，3H)，7.20-7.62(m，3H)，7.80-8.40(m，4H)實(shí)施例27(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(對(duì)甲氧基芐氧基羰基苯基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例27-1將5.16g(12.63mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲酰基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷加入100ml二氯甲烷中并攪拌溶解后，加入2.092g(13.75mmol)4-亞肼基苯甲酸和3.5ml(25.1mmol)三乙胺并于室溫?cái)嚢?5小時(shí)。反應(yīng)后，用100ml水洗滌混合物溶液，用飽和檸檬酸將有機(jī)層的pH值調(diào)至5.0。用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌該混合溶液后，用無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)層并過(guò)濾，然后減壓濃縮濾液。干燥混合物溶液直至產(chǎn)出結(jié)晶，再真空干燥，得到5.0g(73.0%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(4-羧基苯基亞肼基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ0.03(d，6H)，0.82(s，9H)，2.01(m，2H)，3.21(m，2H)，4.39(m，1H)，4.45(m，1H)，5.05(m，2H)，6.75(d，2H)，7.30(m，2H)，7.70(m，3H)，7.98(d，1H)，9.10(d，1H)實(shí)施例27-2將由實(shí)施例27-1所得的5.0g(9.21mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(4-羧基苯基亞肼基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷加入30ml二甲基甲酰胺中并攪拌溶解。然后加入2.54g(18.4mmol)1M碳酸鉀和1.729g(11.04mmol)對(duì)甲氧基芐基氯并升溫至50℃。在同一溫度下攪拌混合物溶液4小時(shí)，加入150ml二氯甲烷并劇烈振動(dòng)，用水(100ml×3)洗滌此混合物溶液。分離有機(jī)層后，將其用無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到6.7g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1洗脫)并純化，得到3.8g(62.3%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(4-甲氧基芐氧基羰基苯基亞肼基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ0.03(d，6H)，0.82(s，9H)，2.01-2.40(m，2H)，3.50(m，2H)，3.80(s，3H)，4.43(m，1H)，4.64(m，1H)，5.20(m，4H)，6.90(dd，4H)，7.40(dd，4H)，7.90(m，2H)，8.20(m，1H)實(shí)施例27-3用實(shí)施例25中的同樣操作處理由實(shí)施例27-2所得酯化合物，得到所要的產(chǎn)物(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-N-(4-甲氧基芐氧基羰基苯基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ1.95-2.10(m，2H)，3.20-3.80(m，2H)，3.80(s，3H)，4.50-4.90(m，2H)，5.20(m，4H)，6.90(m，4H)，7.25-7.50(m，4H)，7.90(m，3H)，8.19(m，2H)實(shí)施例28(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-(對(duì)硝基芐氧羰基)-N-甲基亞肼基]甲基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例28-1當(dāng)實(shí)施例25-1所得的8.7g(19.93mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲基亞肼基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷加入200ml二氯甲烷中后，再加入4.72g(21.89mmol)氯甲酸4-硝基芐基酯和3.9ml(27.96mmol)三乙胺并于室溫?cái)嚢?4小時(shí)。用水洗滌反應(yīng)混合物，用無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)層并過(guò)濾，然后減壓濃縮濾液。將殘留物進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1洗脫)并純化，得到6.62g(54%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲氧基亞氨基甲基-4-叔丁基甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ0.03(d，6H)，0.82(s，9H)，2.07(m，2H)，3.11(d，3H)，3.52(m，2H)，4.40(m，1H)，4.75(m，1H)，5.10-5.40(m，4H)，7.50(m，4H)，8.10(m，4H)實(shí)施例28-2向用冰浴冷至0℃的50ml四氫呋喃中加入實(shí)施例28-1所得的5.31g(8.62mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-(對(duì)硝基芐氧羰基)-N-甲基亞肼基]甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷并攪拌溶解。然后滴加入11.5ml(11.5mmol)1M氟化四丁銨(四氫呋喃溶液)并攪拌30分鐘。移去冰浴后，于室溫將混合物溶液攪拌1小時(shí)。反應(yīng)后，減壓濃縮混合物溶液，并向殘留物中加入二氯甲烷。用實(shí)施例25-2的同樣操作處理反應(yīng)混合物溶液，得到5.8g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶丙酮＝20∶1洗脫)并純化，得到2.3g(53.2%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-(對(duì)硝基芐氧羰基)-N-甲基亞肼基]甲基-4-羥基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.20(m，2H)，3.29(d，3H)，3.60(m，2H)，4.50(m，1H)，4.80(m，1H)，5.10-5.30(m，4H)，7.20(m，4H)，8.10(m，4H)實(shí)施例28-3向100ml二氯甲烷中加入由實(shí)施例28-2所得的2.3g(4.58mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-(對(duì)硝基芐氧羰基)-N-甲基亞肼基]甲基-4-羥基吡咯烷并攪拌溶解。然后加入1.4ml(10.1mmol)三乙胺和0.4ml(5.55mmol)甲磺酰氯并于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后，用實(shí)施例25-3的同樣操作處理此混合物溶液，得到2.7g粗品。將此粗品溶于100ml無(wú)水乙腈中并加入0.732g(6.43mmol)硫代乙酸鉀，并回流5小時(shí)。反應(yīng)后，減壓濃縮該混合物溶液并加入100ml二氯甲烷，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到2.6g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2洗脫)并純化，得到1.8g(70.3%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-(對(duì)硝基芐氧羰基)-N-甲基亞肼基]甲基-4-乙酰基硫代吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.10(m，1H)，2.30(s，3H)，2.62(m，1H)，3.20(s，3H)，3.40(m，1H)，4.03(m，2H)，4.63(m，1H)，5.20(m，2H)，5.30(s，2H)，7.01(m，1H)，7.44(m，4H)，8.14(m，4H)實(shí)施例28-4用冰浴將70ml甲醇和30ml四氫呋喃的混合溶劑冷至0℃并加入由實(shí)施例28-3所得的1.8g(3.21mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-(對(duì)硝基芐氧羰基)-N-甲基亞肼基]甲基-4-乙?；虼量┩椴嚢枞芙?，再加入3.2ml2N氫氧化鈉溶液并攪拌3分鐘。然后將反應(yīng)混合物的pH值調(diào)至4.0并減壓濃縮。將殘留物溶于100ml二氯甲烷中并用水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層并過(guò)濾。減壓濃縮濾液并真空干燥產(chǎn)出的結(jié)晶，得到1.51g(90.7%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-(對(duì)硝基芐氧羰基)-N-甲基亞肼基]甲基-4-巰基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.03(m，2H)，3.12(d，3H)，3.30(m，2H)，4.54(m，2H)，5.20(m，4H)，7.54(m，4H)，8.19(m，4H)實(shí)施例29(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例29-1室溫下，當(dāng)5.72g(14.0mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲?；?4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷加入150ml二氯甲烷中后，再將4.31ml(30.8mmol)三乙胺和1.22g(16.8mmol)二甲基肼-氫氯化物加入并攪拌3小時(shí)。反應(yīng)后，用水洗滌混合物溶液并用無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)層，過(guò)濾、然后減壓濃縮濾液，得到3.2g殘留物。向殘留物中加入用冰浴冷至0℃的150ml四氫呋喃，再滴加入12.14ml(12.14mmol)1M氟化四丁銨(四氫呋喃溶液)并攪拌40分鐘。移去冰浴后，將混合物溶液于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，用水和飽和氯化鈉洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)層。過(guò)濾后，減壓濃縮濾液，得到6.8g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶丙酮＝2∶1洗脫)并純化得到4.21g(89.5%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲基亞肼基)甲基-4-羥基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ1.92-2.60(m，2H)，2.70(s，6H)，3.58(m，2H)，4.42(br，s，1H)，4.62(m，1H)，5.19(m，2H)，7.42(d，2H，J＝8.6HZ)，7.17(d，2H，J＝8.5Hz)實(shí)施例29-2用實(shí)施例26的同一操作處理實(shí)施例29-1所得的(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲基亞肼基)甲基-4-羥基吡咯烷，得到產(chǎn)物(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二甲基亞肼基)甲基-4-羥基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.01(m，1H)，2.61(m，1H)，2.75(s，6H)，3.40(m，2H)，4.50(m，1H)，5.20(m，3H)，7.40(d，2H，J＝8.7Hz)，8.19(m，2H)實(shí)施例30(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二乙基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例30-1將5.72g(14.00mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲酰基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷加入150ml二氯甲烷中并于室溫下攪拌，再加入4.3ml(30.8mol)三乙胺和2.09g(16.8mmol)二乙基肼氫氯化物，攪拌4小時(shí)。反應(yīng)后，減壓濃縮混合物溶液，然后用乙酸乙酯萃取。用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌萃取液數(shù)次后，用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層并過(guò)濾，然后減壓濃縮濾液，得到7.2g殘留物。將殘留物進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1洗脫)并純化，得到5.6g(83.3%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二乙基亞肼基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ0.03(s，6H)，0.80(s，9H)，1.01(t，6H)，1.85-2.15(2，2H)，3.05(q，4H)，3.23(m，2H)，4.40(m，1H)，4.55(m，1H)，5.18(m，2H)，7.44(d，2H，J＝8.9Hz)，8.15(d.2H，J＝8.1Hz)實(shí)施例30-2用實(shí)施例26的同樣分離操作處理由實(shí)施例30-1所得的(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二乙基亞肼基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷，得到所要的產(chǎn)物(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N，N-二乙基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ1.00(m，6H)，2.01(m，1H)，2.50(m，2H)，3.08(q，4H)，3.20-3.60(m，2H)，4.50(m，1H)，5.20(m，1H)，7.44(m，2H)，8.17(m，2H)實(shí)施例31(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺酰)亞肼基]甲基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例31-1將6.4g(14.66mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-甲基亞肼基)甲基-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷加入80ml二氯甲烷中后，再滴加入5.1ml(36.59mmol)三乙胺和2.3ml(21.42mmol)二甲基氨磺酰氯并回流6小時(shí)。反應(yīng)后，減壓濃縮混合物溶液，然后用乙酸乙酯萃取。用水和飽和氯化鈉洗滌萃取液后，用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層并過(guò)濾，然后減壓濃縮濾液，得到8.4g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝5∶1洗脫)并純化，得到7.35g(92.2%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺酰)亞肼基]甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ0.02(d，6H)，0.82(5，9H)，2.02(m，1H)，2.85(s.3H)，2.90(5，6H)，3.01(m，1H)，3.41(m，2H)，4.40(m，1H)，4.60(m，1H)，5.20(m，2H)，7.44(d，2H，J＝8.7Hz)，8.20(d，2H，J＝8.6Hz)實(shí)施例31-2向120ml四氫呋喃中加入由實(shí)施例31-1所得的7.3g(13.43mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺酰亞肼基]甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷，并攪拌溶解，用冰浴冰至0℃。然后滴加入16ml(16.0mmol)1M氟化四丁銨(四氫呋喃溶液)并攪拌20分鐘。移去冰浴后，將混合物溶液攪拌30分鐘并減壓濃縮，將殘留物溶于乙酸乙酯中并依次用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌。分離出有機(jī)層后，用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層并過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到7.5g粗品。將此粗品溶于120ml二氯甲烷中，并加入4.7ml(33.60mmol)三乙胺和1.6ml(20.67mmol)甲磺酰氯并于室溫?cái)嚢?0分鐘。反應(yīng)后，用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌反應(yīng)混合物溶液，用無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)層并過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到5.7g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝300∶1洗脫)并純化，得到4.2g(61.6%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺酰)亞肼基]甲基-4-甲磺酰氧基羥基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.30(m，2H)，2.84(s，6H)，3.02(s，3H)，3.13(s，3H)，3.60-4.01(m，2H)，4.75(m，1H)，5.20(m，3H)，7.50(d，2，J＝8.6Hz)，8.20(d，2H，J＝8.7Hz)實(shí)施例31-3向80ml無(wú)水乙腈中加入由實(shí)施例31-2所得的2.0g(3.94mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺酰)亞肼基]甲基-4-甲磺酰氧基羥基吡咯烷并攪拌溶解。然后加入1.37g(12.0mmol)硫代乙酸鉀并回流3小時(shí)。反應(yīng)后，減壓濃縮混合物溶液，將殘留物溶于乙酸乙酯并依次用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌。分離出有機(jī)層后，將其用無(wú)水硫酸鎂干燥并過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到2.5g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝50∶1洗脫)并純化，得到1.39g(72.4%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺酰)亞肼基]甲基-4-乙酰基硫代吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.10(m，1H)，2.30(s，3H)，2.60(m，1H)，2.90(s，6H)，3.12(s，3H)，3.40(m，H)，4.00(m，2H)，4.60(m，1H)，5.20(brs，2H)，7.48(d，2H，J＝8.3Hz)，8.20(d，2H，J＝8.7Hz)實(shí)施例31-4向50ml甲醇和5ml四氫呋喃的混合溶劑中加入由實(shí)施例31-3所得的1.39g(2.85mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺酰)亞肼基]甲基-4-乙?；虼量┩椴嚢枞芙?。然后滴加入3.0ml2N氫氧化鈉溶液并攪拌3分鐘。反應(yīng)后，用飽和檸檬酸將溶液的pH調(diào)至4.2，并用實(shí)施例19-5的同樣操作處理所得反應(yīng)混合物，得到1.1g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1.5洗脫)并純化，得到0.69g(54.3%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺酰)亞肼基]甲基-4-巰基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ2.05(m，2H)，2.50-2.79(m，2H)，2.83(s，3H)，2.93(s，3H)，3.10(s，3H)，3.30-3.90(m，2H)，5.20(m，2H)，7.40(m，2H)，8.20(m，2H)實(shí)施例32(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[1-(N-甲磺酰-N-甲基亞肼基)乙基]-4-巰基吡咯烷實(shí)施例32-1將6.91g(16.35mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-乙?；?4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷于室溫加入100ml二烷甲烷中。并將1.92ml(36.09mmol)甲基肼，2g無(wú)水硫酸鎂加入并回流5小時(shí)。反應(yīng)后，將混合物溶液冷卻并過(guò)濾，然后減壓濃縮濾液，得到8.47g殘留物。將殘留物進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝30∶1洗脫)并純化，得到7.15g(97.0%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(1-N-甲基亞肼基)乙基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ0.02(s，6H)，0.82(s，9H)，1.52(s，1.75H)，1.63(s，1.25H)，1.70-2.10(m，2H)，2.90(s，2H)，3.40-3.80(m，2H)，4.40(m，1H)，4.60(m，1H)，5.03-5.30(m，2H)，7.43(d，2H，J＝8.9Hz)，8.19(d，2H，J＝8.4Hz)實(shí)施例32-2向80ml二氯甲烷中加入由實(shí)施例32-1所得的6.8g(15.09mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(1-N-甲基亞肼基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷并攪拌溶解。冷至0℃。然后加入13.2ml(22.8mmol)三乙胺和1.41ml(18.2mmol)甲磺酰氯并攪拌30分鐘。反應(yīng)后，將反應(yīng)混合物溶液用飽和檸檬酸和飽和氯化鈉水溶液洗滌。用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層并過(guò)濾。減壓濃縮濾液，并向殘留物中加入100ml四氫呋喃并攪拌溶解。然后滴加18ml(18mmol)1M氟化四丁銨(四氫呋喃溶液)并于室溫?cái)嚢?0分鐘。反應(yīng)后，減壓濃縮混合物溶液并將殘留物溶于乙酸乙酯并依次地用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌。分離出有機(jī)層后，將其用無(wú)水硫酸鎂干燥并過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到6.4g殘留物。將殘留物進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶丙酮＝2∶1洗脫)并純化，得到4.56g(72.9%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[1-(N-甲磺酰-N-甲基亞肼基)乙基]-4-羥基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ1.95(s，1.8H)，1.98(m，1，2H)，2.10-2，64(m，2H)，2.74-2.76(s，s，3H)，2.79-2.83(s，s，3H)，3.50-3.80(m，2H)，4.50(s，1H)，4.63(m，1H)，5.10(m，2H)，7.44(d，2H，J＝8.7Hz)，8.18(dd，2H，J＝8.6Hz，J＝8.6Hz)實(shí)施例32-3向70ml二氯甲烷中加入由實(shí)施例32-2所得的4.5g(10.86mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[1-(N-甲磺酰-N-甲基亞肼基)乙基]-4-羥基吡咯烷并攪拌溶解。用冰浴將反應(yīng)混合物溶液冷至0℃，并加入2.23ml(16.0mmol)三乙胺和0.95ml(12.3mmol)甲磺酰氯，于同樣溫度攪拌30分鐘。反應(yīng)后，用水洗滌有機(jī)層，并依次用檸檬酸溶液和氯化鈉溶液洗滌。過(guò)濾后，濃縮濾液，得到4.94g(92.4%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[1-(N-甲磺酰-N-甲基亞肼基)乙基]-4-甲磺酰氧基吡咯烷粗品。此物質(zhì)本身用于下一個(gè)反應(yīng)。NMR(CDCl3)δ1.99(s，1.6H)，2.05(s，1.4H)，2.20(m，1H)，2.60(m，1H)，2.78-2.79(s，s，3H)，2.80-2.87(s，s，3H)，3.73(m，1H)，4.01(m，1H)，4.68(t，1H)，5.05-9.32(m，3H)，7.42(d，2H，J＝8.2Hz)，8.20(dd，2H，J＝7.2，8.5Hz)實(shí)施例32-4向80ml乙腈中加入由實(shí)施例32-3所得的4.9g(9.95mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[1-(N-甲磺酰-N-甲基亞肼基)乙基]-4-甲磺酰氧基吡咯烷。加入2.8g(24.52mmol)硫代乙酸鉀后，回流5小時(shí)，減壓濃縮反應(yīng)溶液并將殘留物溶于乙酸乙酯。用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)層并用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾。減壓濃縮濾液，得到5.1g粗品。將殘留物進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1洗脫)并純化，得到3.21g(68.3%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[1-(N-甲磺酰-N-甲基亞肼基)乙基]-4-乙?；虼量┩?。NMR(CDCl3)δ1.99-2.02(s，s，3H)，2.30(s，3H)，2.70(m，1H)，2.80-3.01(m，6H)，2.90(m，1H)，3.30(m，1H)，3.95(m，1H)，4.16(m，1H)，4.52(t，3H)，5.12(m，2H)，7.43(d，2H，J＝8.3Hz)8.18(d，2H，J＝5.4Hz)，實(shí)施例32-5向60ml甲醇中加入由實(shí)施例32-4所得的3.21g(6.79mmol)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[1-(N-甲磺酰-N-甲基亞肼基)乙基]-4-乙?；虼量┩椴嚢枞芙狻Ｓ帽±鋮s反應(yīng)溶液后，滴加入5ml2N氫氧化鈉水溶液并攪拌4分鐘。此后，用飽和檸檬酸溶液將反應(yīng)溶液的pH調(diào)至3.5并減壓濃縮以蒸發(fā)有機(jī)溶劑。向殘留物中加入乙酸乙酯以溶解并依次用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，并用無(wú)水硫酸鎂干燥。過(guò)濾后，濃縮濾液，得到3.7g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用正己烷∶乙酸乙酯＝1∶3洗脫)并純化，得到2.31g(79%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[1-(N-甲磺酰-N-甲基亞肼基)乙基]-4-巰基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ1.75(d，1H)，2.01(s，1.5H)，2.03(s，1.5H)，2.70(m，2H)，2.80-2.90(m，6H)，3.30(m，1H)，3.70(m，1H)，4.10(m，1H)，4.50(m，1H)，5.09(m，2H)，7.42(d，2H，J＝8.6Hz)，8.19(m，2H)實(shí)施例33(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-乙磺酰-N-甲基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷實(shí)施例33-1向120ml二氯甲烷中加入12.26g(30.01mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-甲酰基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷并攪拌溶解。加入2.4ml(45.11mmol)甲基肼和3g無(wú)水硫酸鎂并于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，再用冰浴冷至0℃。將8.4ml(60.22mmol)三甲胺和4ml(35.3mmol)乙磺酰氯加入并攪拌2小時(shí)，再依次用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌并用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層和過(guò)濾，然后減壓濃縮濾液，得到15.8g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝30∶1洗脫)并純化，得到14.7g(92.7%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-[N-乙磺酰-N-甲基亞肼基)乙基]-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ0.03(d，6H)，1.83(s，9H)，1.13(t，3H)，2.10(m，2H)，3.10(m，5H)，3.50(m，2H)，4.40(m，1H)，4.70(m，1H)，5.10(m，2H)，7.48(d，2H，J＝8.5Hz)，8.20(d，2H，J＝8.6Hz)實(shí)施例33-2向160ml四氫呋喃中加入實(shí)施例33-1中所得的14.7g(27.80mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-乙磺酰-N-甲基亞肼基)甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基吡咯烷并攪拌溶解。然后滴加入37ml(3.7mmol)1M氟化四丁銨(四氫呋喃溶液)并于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)后，減壓濃縮混合物溶液，并將殘留物溶于二氯甲烷中，依次用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌。用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層并過(guò)濾。減壓濃縮濾液并向產(chǎn)出的粗品中加入160ml二氯甲烷，用冰浴冷至0℃，然后滴加入8.53ml(61.2mmol)三乙胺和2.58ml(33.3mmol)甲磺酰氯，并于0℃攪拌1小時(shí)。用檸檬酸溶液和飽和氯化鈉水溶液依次洗滌反應(yīng)混合物溶液。分離有機(jī)層后，將其用無(wú)水硫酸鎂干燥并過(guò)濾，然后濃縮濾液，得到13.7g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝20∶1洗脫)并純化，得到12.6g(92.0%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-乙磺酰-N-甲基亞肼基)甲基-4-甲磺酰氧基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ1.14(t，3H)，2.50(m，2H)，3.03(s，3H)，3.10-3.25(m，5H)，3.80(m，2H)，4.80(m，1H)，5.10(m，3H)，7.50(d，2H，J＝8.5Hz)，8.20(d，2H，J＝8.3Hz)實(shí)施例33-3向400ml乙腈中加入由實(shí)施例33-2所得的12.6g(11.07mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-乙磺酰-N-甲基亞肼基)甲基-4-甲磺酰氧基吡咯烷并攪拌溶解。然后加入4.73g(41.4mmol)硫代乙酸鉀并回流5小時(shí)。待反應(yīng)混合物溶液冷至室溫后，減壓濃縮混合物溶液以蒸去溶劑，將殘留物溶于300ml二氯甲烷中，并依次用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌。分離出有機(jī)層后，將其用無(wú)水硫酸鎂干燥并過(guò)濾，然后將濾液濃縮，得到9.8g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝20∶1洗脫)并純化，得到8.2g(62.9%)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-乙磺酰-N-甲基亞肼基)甲基-4-乙?；虼量┩椤MR(CDCl3)δ1.30(m，3H)，2.10(m，1H)，2.30(s，3H)，2.60(m，14)，3.10(m，5H)，4.05(m，2H)，4.65(m，1H)，5.10(s，2H)，7.44(d，2H，J＝8.4Hz)，8.19(d，2H，J＝8.6Hz)實(shí)施例33-4向120ml甲醇中加入由實(shí)施例33-3所得的7.4g(15.66mmol)(2S，4R)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-乙磺酰-N-甲基亞肼基)甲基-4-乙?；虼量┩椴嚢枞芙?，用冰浴冷卻至0℃。當(dāng)加入11.7ml2N氫氧化鈉溶液并攪拌3分鐘后，用檸檬酸溶液將反應(yīng)溶液的pH值調(diào)至3.7。減壓濃縮該反應(yīng)溶液并加入200ml乙酸乙酯，再依次用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥分離出的有機(jī)層并過(guò)濾。減壓濃縮濾液，得到5.7g粗品。將此粗品進(jìn)行硅膠柱色譜分離(用氯仿∶甲醇＝20∶1洗脫)并純化，得到4.1g(60.8%)(2S，4S)-1-(對(duì)硝基芐氧羰基)-2-(N-乙磺酰-N-甲基亞肼基)甲基-4-巰基吡咯烷。NMR(CDCl3)δ1.14(m，3H)，2.10(m，2H)，3.01(s，3H)，3.10(m，5H)，3.50(m，3H)，3.70(m，1H)，4.65(m，1H)，5.10(m，2H)，7.50(m，2H)，8.20(m，2H)權(quán)利要求1.式(Ⅰ)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯其中R1是氫原子或甲基，R2是氫原子、金屬或非金屬鹽基團(tuán)、或者是羧基保護(hù)基，R3是氫原子或亞氨基保護(hù)基，以及R4是氫原子、低級(jí)烷基、羥基、氰基或鹵原子，R5是羥基、低級(jí)烷氧基、保護(hù)或未保護(hù)的氨基，或者是下述式(1)-(4)之一其中R6和R7各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基，R8是羥基、氰基、鹵原子、由適當(dāng)?shù)娜〈芜x性取代的含有1-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基、保護(hù)或未保護(hù)的氨基或下面通式的基團(tuán)(其中R9是低級(jí)烷基磺?；?、鹵代低級(jí)烷基磺?；?、苯基(C1-C4)烷基磺?；騈，N-二低級(jí)烷基氨磺?；?，n是0至4的整數(shù)其中R6是氫原子或低級(jí)烷基，n是0至4的整數(shù)其中R6和R7獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基，n是0至4的整數(shù)其中R6是氫原子或低級(jí)烷基，R10是低級(jí)烷基、低級(jí)烷基磺?；?、鹵代低級(jí)烷基磺酰基、苯基(C1-C4)烷基磺酰基、N-(低級(jí))烷基氨磺?；，N-二(低級(jí))烷基氨磺?；⒂蛇m當(dāng)取代基任選性取代的含1-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基，或下面通式的基團(tuán)(其中R11是鹵原子、羥基、氰基，R6和R7各自獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基)。2.按照權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R1是甲基，R2是氫原子。3.按照權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R1和R2是氫原子。4.按照權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R1是甲基，和R2和R3都是氫原子。5.按照權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R1、R2和R3都是氫原子。6.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是氫原子，R5是羥基或低級(jí)烷氧基。7.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是氫原子，R5是氨甲酰基或低級(jí)烷氧基氨基甲?；?。8.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是氫原子，R5是氨基、低級(jí)烷基氨基、低級(jí)烷基磺酰氨基，或低級(jí)烷基氨磺酰氨基。9.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是氫原子，R5是咪唑基氨基、嘧啶基氨基或吡啶基氨基。10.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是甲基，R5是羥基或低級(jí)烷氧基。11.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是甲基，R5是氨基甲?；虻图?jí)烷基氨基甲?；?2.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是甲基、R5是氨基、低級(jí)烷氨基、低級(jí)烷基磺酰氨基或低級(jí)氨磺酰氨基。13.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是甲基，R5是咪唑基氨基、嘧啶基氨基或吡啶基氨基。14.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是羥基，R5是氨基甲酰基或低級(jí)烷基氨基甲?；?5.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是羥基，R5是氨基、低級(jí)烷氨基、低級(jí)烷基磺酰氨基或低級(jí)烷基氨磺?；?。16.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是羥基，R5是咪唑基氨基、嘧啶基氨基或吡啶基氨基。17.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是鹵原子，R5是氨基甲?；虻图?jí)烷基氨基甲酰基。18.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是鹵原子，R5是氨基、低級(jí)烷氨基、低級(jí)烷基磺酰氨基、低級(jí)烷基氨磺酰氨基。19.按照權(quán)利要求4的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是鹵原子，R5是咪唑基氨基、嘧啶基氨基或吡啶基氨基。20.按照權(quán)利要求5的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是氫原子，R5是羥基或低級(jí)烷氧基。21.按照權(quán)利要求5的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是氫原子，R5是氨基甲?；虻图?jí)烷基氨基甲?；?2.按照權(quán)利要求5的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是氫原子，R5是氨基、低級(jí)烷氨基、低級(jí)烷基磺酰氨基或低級(jí)烷基氨磺?；被?。23.按照權(quán)利要求5的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是氫原子，R5是咪唑基氨基或嘧啶基氨基。24.按照權(quán)利要求5的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是羥基，R5是氨基甲?；虻图?jí)烷基氨基甲酰基。25.按照權(quán)利要求5的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是羥基，R5是氨基、低級(jí)烷氨基、低級(jí)烷基磺酰氨基或低級(jí)烷基氨磺?；?。26.按照權(quán)利要求5的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是羥基，R5是咪唑基氨基、嘧啶基氨基或吡啶基氨基。27.按照權(quán)利要求5的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是鹵原子，R5是氨基甲?；虻图?jí)烷基氨基甲?；?。28.按照權(quán)利要求5的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是鹵原子，R5是氨基、低級(jí)烷氨基、低級(jí)烷基磺酰氨基或低級(jí)烷基氨磺酰氨基。29.按照權(quán)利要求5的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是鹵原子，R5是咪唑基氨基、嘧啶基氨基或吡啶基氨基。30.按照權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中的三維結(jié)構(gòu)是(5R，6S，8R，2′S，4′S)或(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)。31.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-(2-(甲氧亞氨基吡咯烷-4-基硫基)-4-甲基-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。32.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N，N-二甲氨基羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。33.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-(2-氨基羰基甲氧亞氨基吡咯烷-4-基硫基)-4-甲基-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。34.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲氨基羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。35.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲磺?；?N-甲基亞肼基)-吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。36.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲磺?；谆鶃嗠禄?-吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。37.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(2-咪唑基亞肼基甲基)-吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。38.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(2-嘧啶基亞肼基甲基)-吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。39.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-[N-甲基-N-(N′，N′-二甲基氨磺?；?亞肼基甲基]-吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。40.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-[N-(N′，N′-二甲基氨磺?；?亞肼基甲基]-吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。41.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲基-N-甲基氨磺酰基)亞肼基甲基]-吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。42.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(1-N-甲磺?；?N-甲基亞肼基乙基]-吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。43.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(4R，5S，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-[1-N-(N′，N′-二甲基氨磺?；?-N-甲基亞肼基乙基]吡咯烷-4-基硫基]-4-甲基-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。44.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(5R，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(1-N-甲基磺酰基-N-甲基亞肼基)吡咯烷-4-基硫基]-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。45.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(5R，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲基磺?；鶃嗠禄谆?吡咯烷-4-基硫基]-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。46.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(5R，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲基-N-(N′，N′-二甲氨磺酰基)亞肼基)吡咯烷-4-基硫基]-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。47.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(5R，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-[N-(N′，N′-二甲氨磺酰基)亞肼基甲基]吡咯烷-4-基硫基]-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。48.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(5R，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-甲氧亞氨吡咯烷-4-基硫基]-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。49.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(5R，6S，8R，2′S，4′S)-3-(2-氨基羰基甲氧亞氨基吡咯烷-4-基硫基]-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。50.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(5R，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N-甲氨基羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。51.按照權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是(5R，6S，8R，2′S，4′S)-3-[2-(N，N-二甲氨基羰基甲氧亞氨基)吡咯烷-4-基硫基]-6-(1-羥乙基)-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]-庚-2-烯-7-酮-2-羧酸。52.制備下式(Ⅳ)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和酯的方法(其中R1、R2、R3、R4、R5和R14與下面定義相同);該方法包括以下步驟使式(Ⅱ)化合物或其活性衍生物(其中R1是氫原子或甲基，R2是氫原子、金屬或非金屬鹽基團(tuán)、或羧基保護(hù)基，R14是氫原子或羥基保護(hù)基，)與式(Ⅲ)化合物反應(yīng)(其中R2是氫原子、亞氨基保護(hù)基，R4是氫原子或低級(jí)烷基、羥基、氰基、鹵原子，R5是羥基、低級(jí)烷氧基、保護(hù)或未保護(hù)氨基、或下面式(1)-(4)之一;其中R6和R7各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基，R6是羥基、氰基、鹵原子、由適當(dāng)?shù)娜〈芜x性取代的含有1-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基、保護(hù)或未保護(hù)的氨基、或下面通式(其中R9是低級(jí)烷基磺?；Ⅺu代低級(jí)烷基磺?；?、苯基(C1-C4)烷基磺酰基或N，N-二低級(jí)烷基氨磺?；?，n是0至4的整數(shù)其中R6是氫原子或低級(jí)烷基，n是0至4的整數(shù)其中R6和R7各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基，n是0至4的整數(shù)其中R6是氫原子或低級(jí)烷基，R10是低級(jí)烷基、低級(jí)烷基磺酰基、鹵代低級(jí)烷基磺?；?、苯基(C1-C4)烷基磺酰基、N-(低級(jí))烷基氨磺酰基、N，N-二(低級(jí))烷基氨磺酰基或由適當(dāng)取代基任選性取代的含1-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基，或下式基團(tuán)(其中R11是鹵原子、羥基或氰基、R6和R7各自獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基);以及必要時(shí)消除或引入任意保護(hù)基團(tuán)。53.抗菌劑，含有抗菌有效量的式(Ⅰ)化合物，其藥學(xué)上可接受的鹽或酯以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，其中R1是氫原子或甲基，R2是氫原子、金屬或非金屬鹽基團(tuán)、或羧基保護(hù)基，R3是氫原子或亞氨基保護(hù)基，R4是氫原子、低級(jí)烷基、羥基、氰基或鹵原子，R5是羥基、低級(jí)烷氧基、保護(hù)或未保護(hù)的氨基，或下式(1)-(4)之一的基團(tuán);其中R6和R7各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基，R6是羥基、氰基、鹵原子、由適當(dāng)?shù)娜〈芜x性取代的含有1-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基、保護(hù)或未保護(hù)的氨基、或下面通式基團(tuán)(其中R9是低級(jí)烷基磺?；?、鹵代低級(jí)烷基磺?；?、苯基(C1-C4)烷基磺?；騈，N-二低級(jí)烷基氨磺酰基)，n是0至4的整數(shù)其中R是氫原子或低級(jí)烷基，n是0至4的整數(shù)其中R6和R7各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基，n是0至4的整數(shù)其中R6是氫原子或低級(jí)烷基，R10是低級(jí)烷基、低級(jí)烷基磺?；?、鹵代低級(jí)烷基磺?；?、苯基(C1-C4)烷基磺酰基、N-(低級(jí))烷基氨磺?；?、N，N-二(低級(jí))烷基氨磺?；蛴蛇m當(dāng)取代基任選性取代的含1-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基，或下式基團(tuán)(其中R11是鹵原子、羥基、氰基、R6和R7各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基)。54.制備式(Ⅲ)化合物的方法(其是R是氫原子、亞氨基保護(hù)基，R4是氫原子或低級(jí)烷基、羥基、氰基或鹵原子，R5是羥基、低級(jí)烷氧基、保護(hù)或未保護(hù)的氨基，或下式(1)-(4)之一的基團(tuán)其中R6和R7各自獨(dú)立地是氫原子、低級(jí)烷基，R8是羥基、氰基、鹵原子、由適當(dāng)?shù)娜〈芜x性取代的含有1-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基、保護(hù)或未保護(hù)的氨基、或下面通式(其中R9是低級(jí)烷基磺?；?、鹵代低級(jí)烷基磺?；?、苯基(C1-C4)烷基磺?；騈，N-二低級(jí)烷基氨磺酰基)，n是0至4的整數(shù)其中R6是氫原子或低級(jí)烷基，n是0至4的整數(shù)其中R6和R7各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基，n是0至4的整數(shù)其中R6是氫原子或低級(jí)烷基，R10是低級(jí)烷基，低級(jí)烷基磺?；?、鹵代低級(jí)烷基磺酰基、苯基(C1-C4)烷基磺?；?、N-(低級(jí))烷基氨磺?；，N-二(低級(jí))烷基氨磺酰基或由適當(dāng)取代基任選性取代的含1-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基，或下式基團(tuán)(其中R11是鹵原子、羥基、氰基、R6和R7各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基)，該方法包括以下步驟使式(Ⅴ)化合物(其中R3、R4、R5與上文定義相同，R15是R16SO2，其中R16是C1-C4低級(jí)烷基)，與下式(Ⅵ)化合物反應(yīng)(其中R16與上文定義相同，M是堿金屬、堿土金屬)生成下式(Ⅶ)化合物用堿溶液處理得到的產(chǎn)品。55.式(Ⅲ)化合物其中R3選自是氫原子、亞氨基保護(hù)基的基團(tuán)，R4選自氫原子或低級(jí)烷基、羥基、氰基或鹵原子，R5選自羥基、低級(jí)烷氧基、保護(hù)或未保護(hù)的氨基，或下式(1)-(4)之一;其中R6和R7各選自氫原子、低級(jí)烷基，R8選自是羥基、氰基、鹵原子、含有1-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基、保護(hù)或未保護(hù)的氨基、或下式基團(tuán)其中R選自低級(jí)烷基磺?；?、鹵代低級(jí)烷基磺?；⒈交?C1-C4)烷基磺?；騈，N-二低級(jí)烷基氨磺?；?，n是0至4的整數(shù)其中R6選自氫原子或低級(jí)烷基，n是0至4的整數(shù)其中R6和R7各選自氫原子或低級(jí)烷基，n是0至4的整數(shù)其中R6選自氫原子或低級(jí)烷基，R10是低級(jí)烷基、低級(jí)烷基磺?；?、鹵代低級(jí)烷基磺?；?、苯基(C1-C4)烷基磺?；-(低級(jí))烷基氨磺?；?、N，N-二(低級(jí))烷基氨磺?；蚝?-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基，或下式基團(tuán)其中R11是鹵原子、羥基、氰基、R6和R7各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基。56.式(Ⅶ)化合物其中R3選自氫原子、亞氨基保護(hù)基的基團(tuán)，R4選自氫原子或低級(jí)烷基、羥基、氰基或鹵原子，R5選自羥基、低級(jí)烷氧基、保護(hù)或未保護(hù)的氨基，或下式(1)-(4)之一;其中R6和R7各選自獨(dú)立地是氫原子、低級(jí)烷基、R選自羥基、氰基、鹵原子、含有1-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基、保護(hù)或未保護(hù)的氨基、或下式基團(tuán)其中R9選自低級(jí)烷基磺?；?、鹵代低級(jí)烷基磺酰基、苯基(C1-C4)烷基磺酰基或N，N-二低級(jí)烷基氨磺?；?，n是0至4的整數(shù)其中R是氫原子或低級(jí)烷基，n是0至4的整數(shù)其中R6和R7各選自氫原子或低級(jí)烷基，n是0至4的整數(shù)其中R6選自氫原子或低級(jí)烷基，R10是低級(jí)烷基、低級(jí)烷基磺?；?、鹵代低級(jí)烷基磺酰基、苯基(C1-C4)烷基磺酰基、N-(低級(jí))烷基氨磺酰基、N，N-二(低級(jí))烷基氨磺?；蚝?-4個(gè)雜原子的5或6節(jié)雜環(huán)基，或下式基團(tuán)其中R11選自鹵原子、羥基、氰基、R6和R7各自獨(dú)立地是氫原子或低級(jí)烷基，R16是C1-C6低級(jí)烷基。全文摘要本發(fā)明涉及式(Ⅰ)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯。式(Ⅰ)中各符號(hào)的定義見(jiàn)說(shuō)明。本發(fā)明化合物對(duì)各種革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌具有良好的抗菌活性，可用作治療和預(yù)防由這些細(xì)菌引起的人類(lèi)傳染病的抗菌劑。文檔編號(hào)A61K31/397GK1090283SQ93119060公開(kāi)日1994年8月3日申請(qǐng)日期1993年9月2日優(yōu)先權(quán)日1992年9月2日發(fā)明者張民善,林重仁,金南植,申熙贊,金啟源,金枝永,李在杰,李春宇,任元彬,金東成申請(qǐng)人:東亞制藥株式會(huì)社