專利名稱：含寡糖的14-氨基甾類化合物及非對映選擇性氨基甾類化合物的制造方法
背景技術：
本發(fā)明涉及新穎的含寡糖的14-氨基甾類化合物。本發(fā)明也涉及這些新穎化合物的藥物組合物及用本發(fā)明化合物治療充血性心力衰竭(CHF)的方法。本發(fā)明還涉及在甾核14位上引入氨基的新穎方法。
CHF是心臟日益不能提供足夠的心輸出量(CO)，所謂心輸出是心臟在一段時間內(nèi)泵出的血容量，以輸送氧合血到外周組織中。當心臟開始衰竭時，機體的其它部分代償喪失的CO，這種代償機制最終導致稱作CHF的綜合征。當CHF發(fā)展時，出現(xiàn)結構和血液動力學損害。這種結構損害宏觀上表現(xiàn)為心室心肌肥大，微觀上表現(xiàn)為間質(zhì)、血管周和心室壁替代纖維化，心肌毛細管密度減少，及心肌細胞死亡。當出現(xiàn)心肌組織纖維化時，使心臟功能受損，因為剩下的存活心肌細胞工作負荷更大。
在血液動力學方面，衰竭心臟在收縮期(心動周期中心室射血的時相)產(chǎn)生力的能力降低。因此，需要較大的舒張末期容量(在舒張期出現(xiàn)心室充盈)以進行任何給定水平的外部作功。在心力衰竭情況下，作功能力和負荷的不適配引起的射血減少導致舒張末期壓力和肺毛細壓力增大。隨后往往發(fā)生肺郁血和外周水腫。從患者的預后來看，在CHF發(fā)展過程中，患者發(fā)生進行性惡化的疲勞和呼吸困難綜合征。
如果可能的話，CHF的有效治療需要確定病因，因為某些CHF病因有其獨特的治療方式。CHF有各種病因，包括心臟疾病，如冠狀動脈疾病或心肌炎；瓣膜疾病，如二尖瓣脫出或主動脈狹窄；心包疾??；先天性心臟??；肺部疾病；心律失常；高血壓和糖尿病。例如，如果CHF的病因是心肌炎或心律失常。則分別用抗微生物或抗心律失常治療病人，可恢復正常的心功能。
但是，一旦排除不對其它治療起反應的病因，則介紹用如下三種療法中的一種或一種以上進行治療1)投予強心藥，如洋地黃，以改善心臟的泵功能；2)休息和/或給以血管舒張劑如卡托普利以減輕心臟的工作負荷；3)采用低鈉飲良或給予利尿劑如氯噻嗪控制水鈉潴留。根據(jù)患者的癥狀和對某些藥物的耐受程度，CHF的治療是劑量個體化的。例如，某些患者可能有較強的發(fā)生洋地黃毒性的傾向，而其它癥狀較微的患者可得益于利尿劑，該類藥物有較高的治療指數(shù)。另外，有識之士建議，利尿劑為合適的一線CHF治療藥，利尿治療應繼以血管擴張劑和洋地黃。人們還注意到，洋地黃對于患嚴重CHF的病人是最有效的。參見Braunwald，Heart diseaseA Text-book of Cardiovascular Medicine，Vol.(3rb de.1988)，Chung，E.K.，Quick Reference to Cardiovascular Disease，Chapter 27(2ded.1983)and Fowler，N.O.，Cardiac Diagnosis and Treatment，Chapter 12(2d ed.1976)。
洋地黃對于伴有血液動力學問題、以嚴重CHF為特征的癥狀的改善是有用的，但實際上其治療指數(shù)低，限制了其治療應用。參見Braunwald，Heart diseaseA Textbook of CardiovascularMedicine，Vol.(3rb de.1988)，Chung，E.K.，Quick Referenceto Cardiovascular Disease，Chapter 27(2d ed.1983) and Fowler，N.O.，Cardiac Diagnosis and Treatment，Chapter 12(2d ed.1976)and Goodman and Gilman，The Pharmacolpgical Basis ofTherapentics，Chappter 34(8th ed.，1990)。
洋地黃所伴有的毒性問題促使研究者力求開發(fā)較安全的心臟活性化合物。如下專利中描述了含甾核的心臟活性化合物出版于1987年7月16日的世界專利出版物WO 87/04167(Chiodini等)描述了3位上被氨基糖殘基取代、14位上被乙縮醛鍵取代的氨基糖苷甾族衍生物。該出版物闡述了這些化合物治療高血壓有效。出版于1990年8月17日、授予Guina的法國專利2,642,973描述了洋地黃樣化合物2，3-二氧甲基-6-甲基-3-β-D-葡萄糖-羊角拗定，它含有在3位上有葡萄糖基取代，17位上有內(nèi)酯基取代、14位上有羥基取代的甾核。該專利闡述該化合物用于預防心功能不全所致病理狀態(tài)(這種病狀是開洋地黃處方的)和預防因動脈鈣化所致高血壓引起的病理狀態(tài)。Guina的化合物還被說成是正性肌力劑、外周血管擴張劑和抗心律失常劑。1987年7月16日世界專利出版物WO 87/04168(Chiodini等)公開了在3位上具有烷基取代的氨基糖(如2-氨基或2-烷氨基-2-脫氧-己吡喃糖基、3-氨基或3-烷氨基-3-脫氧-己吡喃糖基、3-氨基或3-烷氨基-3，6-二脫氧-己吡喃糖基、3-氨基或3-烷氨基2，3，6-三脫氧-己吡喃糖基、4-氨基或4-烷氨基2，4，6-三脫氧-己吡喃糖殘基)，以及在17位上具有環(huán)酰胺(內(nèi)酰胺)的氨基糖苷甾類化合物。14位被H取代。該化合物據(jù)說用于抗高血壓。出版于1991年11月14日的世界專利出版物WO 91/17176(Kenny等)揭示了一種用作加壓劑的甾類糖苷，其3位上具有糖基團如戊糖、己糖或兼而有之，17位上有內(nèi)酯環(huán)，14位被OH、H或F、Cl、Br或NH2取代。1991年12月5日授權的DD 296,502 A5公開了用于治療心功能不全的甾類酰胺，其3位被磺酰氨基取代，17位被5元或6元內(nèi)酯環(huán)取代，14位被OH取代。1992年9月1日授予LaBella的U.S.5,144,017公開了據(jù)說作為心臟刺激劑有用的甾類化合物，其3位被糖苷殘基(如β-D-葡萄糖苷、α-L-鼠季糖苷、三毛地黃毒糖化物)取代，17位被乙酸基或氨基取代，14位上有OH基。1992年12月29日授予Nc-Call的U.S.5,175,281公開了用于治療脊柱損傷、頭外傷和繼發(fā)性腦血管痙攣，預防心肺復蘇和心肌梗塞后的損傷的嘧啶基哌嗪基甾類化合物，其中3位為OH、CH3O、COOH或苯甲酸基，14位為H，17位為雜環(huán)胺。1988年4月27日授予Wunderwald等的DD 256，134A1公開了一種制備心臟活性甾類化合物的方法，其中甾體分子的3位被嗎啡代甲酸基殘基取代，甾核的17位被內(nèi)酯環(huán)取代，14位被OH、H或烯烴取代。所述化合物據(jù)稱對增加心臟收縮力有用。1992年10月15日公開的Ichikawa的JP 4-290899公開了一種強心甾類化合物，其中甾核的3位被寡糖取代，所述寡糖可由3個吡喃葡萄糖基組成，14位被OH基取代，17位被內(nèi)酯環(huán)取代。Temple-ton，et al.，J.Med.Chem.36，43-45(1993)公開了14-羥基-21-去甲-5β，14β-孕烷和5β，14β-孕烷C-3 α-L-鼠李糖苷及三-β-D-毛地黃毒苷衍生物的合成。所述化合物據(jù)報告是有效的強心劑。具有C-17βCOCH2OH，CH2OH，CO2H，CO2Me，CH2NH2，或CH2NO2基的這些化合物結合在心肌的洋地黃受體識別部位。Templeton，etal.，1 J.Chem.Sci.Perkin.Trans.，2503-2517(1992)公開了14位羥基-5β，14β-孕烷的20α-和20β乙酰氨基-、氨基、硝基-和羥基-3β苷(α-L-鼠李吡喃糖苷和三-β-D-毛地黃素苷)和?；苌锛癈-20肟、腙和脒基腙的合成。這些化合物據(jù)稱是有效的強心劑。
此外，血管緊張肽轉化酶抑制劑(ACEI)被證明降低CHF病人的死亡率。見Nicklas，J.M.and Pitt，B.，et al.(The SOLVD In-vestigatirs)，“Effect of Enalapril on survival in Patients with Re-duced Left Ventricular Ejection Fractions and Congestive HeartFailure”，N.Engl.J.Med.325(5)293(1991)。
目前，4百萬人仍罹患CHF。診斷為CHF后五年死亡率男性為60％，女性為45％。這清楚地表明需要針對處理CHF的較好治療措施。見Parmley，W.W.，“Pathophysiology and Current Therapyof Congestive Heart Failure”，J.Am.Col.Cardiol.13771-785(1989)；Francis，G.S.et al.，“Congestive Heart FailurePatho-physiology and Therapy，”Cardiovascular Pharmacology，3rd Edi-tion(1990)。
14氨基化合物被證明通過增加心臟收縮力而在治療CHF上是有用的。這些化合物提供心臟收縮力增強的治療效益，而無洋地黃的副效應。這些14-氨基甾類化合物及其制備方法在下面四個專利中加以描述，本文均引為參考U.S.4,325,879，Jarreau，et al.1982年4月20日頒布(U.S.′879)(相應于法國專利申請2,464,270)；U.S.4,552,868，Jarreau，et al.，1985年11月12日頒布(U.S.′868)；U.S.4,584,289，Jarreau，et al.，1986年4月22日頒布(U.S.′289)和U.S.4,885,280，Jarreau，et al.，1989年12月5日頒布(U.S.′280)。這四個專利描述了具有強心活性的14-氨基甾類化合物及其制備方法，U.S.′879；′868；′289和′280均揭示用疊氮酸在14位上形成疊氮化物衍生物，再還原為氨基。Adeoti，S.B.，etal.，“Introduction of A 14β-Nitrated Function，Into The SteroidRing To Prepare The Cardioactive Molecule，14β-Amino-5β-Pergnane-3β(，20β-Diol，from Progesterone and DeoxycholicAcid，”45(12)Tetrahedron Letters，3717-3730(1989)公開了將14β氨基官能團引入甾類分子，涉及1)在N3H、BF3·Et2O或氨存在下的環(huán)化反應或2)用N3H、BF3·Et2O處理甾核。所述方法可制備心臟活性14β-氨基-5β-孕烷-3β，20β二醇。Naidoo，B.K.，et al.，“Cardiotonic Steroids IImportance of 14β-Hydroxy Group in Dig-itoxigenin，”63(9)Jnl Pharm Sci.，1391-1394(1974)公開了用異氰酸鹽制備14β-氨基甾類化合物的實驗設想。但是，研究者們并未成功地利用異氰酸鹽化學在甾核14位上引入氨基。異氰酸鹽化學應用于甾類化合物的合成在如下文獻中籠統(tǒng)地進行了描述。Ponsold，K.，et al.，“Gekoppelt Additionsreaktionen an 14，15-ungesat-tigten Androstanen EinfluB des positiven Halogens auf die Re-gioselektivitat，”Journal f.prakt.Chemie，Band 325，Heft 1，1983，S.123-132；Ponsold，K.，et al.“Synthese und Reaktivitatvon Estra-1，3，5(10)-trienen mit heterocyclischen Vierringen in14，15-Stellung”，Journal f.prakt.Chemie，Band 328，Heft 5/6，1986，S.673-681；and Bohl，M.，et al”，“Quantitative structure-activity relationships of estrogenic steroids substituted at C14，C15”，Steroid Biochem.Vol.26 No.5，pp.589-597，1987。
本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的14-氨基甾類化合物，其3位被寡糖基取代，更有效地影響心肌收縮力。所述含寡糖14-氨基甾類化合物更耐受代謝，因而比現(xiàn)有技術的14-氨基甾類化合物提供較長時間的變力性活性。本發(fā)明者還發(fā)現(xiàn)，可通過利用異氰酸鹽化學的方法在甾核14位上引入氨基，這是比現(xiàn)有技術方法更安全更有效的方法。
發(fā)明的概述如下通式所示的含寡糖的14-氨基甾類化合物及其藥學上可接受的酸式鹽或酯 其中a)R1為(i)COOR5，其中R5為H；C1-6烷基；氨基取代的C1-6低級烷基；芳烷基或雜芳基烷基或碳環(huán)；(ii)CHR6OH，其中R6為氫原子或C1-6低級烷基；或(iii)COR，其中R為H；C1-6低級烷基；氨基取代的C1-6低級烷基；氨基或二烷氨基；b)R2為-NR7R8，其中R7和R8可相同或不同，為氫原子或C1-6低級烷基c)R3為(i)具有如下結構的寡糖殘基 其中R9為H、甲基、羥基、羰基、乙酸基、芳烷氧基、雜芳基烷氧基或苯甲酸基；R10為H、甲基、羰基、乙酸基、芳烷氧基、雜芳基烷氧基、苯甲酸基或羥基；R11為O，當R11為末端單糖糖基上的取代基時，則為OH、甲基、乙酸基、雜芳基烷氧基、芳烷氧基，R12為H、甲基、甲基羥基甲基或乙酸基甲基；或(ii)具有如下結構的單糖殘基 其中R14和R15可相同或不同，為H、C1-6低級烷基、芳烷基、雜芳基烷基、雜芳基或芳基；R17可為H、羥基、乙酸基或苯甲酸基；R18和R19為羥基、乙酸基或苯甲酸基；或(iii)具有如下結構的寡糖殘基 其中R14或R15可相同或不同，為H、C1-6低級烷基、雜芳基烷基、芳烷基或芳基；R14a為O，當R14a為末端單糖殘基上的取代基時，則為羥基、甲基、乙酸基、芳烷氧基或雜芳基烷氧基；d)R4為(i)OH，或(ii)H，或(iii)OR13，其中R13為單糖殘基、乙酸基、苯甲酸基、芳烷基或雜芳基烷基e)Z為(i)-CH-，其中a和b為單鍵，或(ii)＝C，其中a和b為雙鍵。
本發(fā)明還包括在甾核14位上引入氨基的方法，其中所述氨基是通過包括如下步驟的碘代異氰酸鹽加成反應非對映選擇性地引到甾核14位上的a)將異氰酸鹽加成到甾核14-15位雙鍵上；b)脫鹵；c)異氰酸基轉化為甾核14位上的氨基。術語的定義和使用下面是本文所用術語的定義表。
“氨基甾類”是甾核上具有氨基的甾環(huán)化合物。
“烷基”是具有1-8個碳原子、除非另有指明，最好具有1-4個碳原子的未取代或取代的直鏈、環(huán)狀或支鏈飽和烴鏈。較佳的烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基和丁基；來自脂肪烴除去1個H的一價基團，如甲基。低級烷基含1-6個碳原子。
本文所用“雜烷基”是具有3-8個碳原子、包含碳原子和1個或2個雜原子的未取代或取代的飽和鏈。
“烯基”是具有2-8個碳原子、最好具有2-4個碳原子、并具有至少1個烯烴雙鍵的未取代或取代的直鏈或支鏈烴鏈。
“炔基”是具有2-8個碳原子、最好具有2-4個碳原子、并具有至少1個三鍵的未取代或取代的直鏈或支鏈烴鏈。
“乙酸鹽”含CH3COO-基團的乙酸的鹽。
“乙酸基”乙酰氧基CH3COO-。
“乙?；滨；鵆H3CO-。
“糖苷配基”糖苷的組分，例如植物顏料，不是糖。
本文所用的“碳環(huán)”是一般含有3-8個碳原子、最好含有5-7個碳原子的未取代或取代的飽和、不飽和或芳族烴環(huán)。
本文所用的“雜環(huán)”是環(huán)上含碳原子和一個或一個以上雜原子的未取代或取代的飽和、不飽和或芳香族的環(huán)。雜環(huán)一般含有3-8個碳原子、最好含有5-7個碳原子。除非另有指明，雜原子可各自選自N、S和O。
“芳基”是芳香族碳環(huán)。芳基包括，但不限于，苯基、甲苯基、二甲苯基、異丙苯基和萘基；從芳香烴除去一個氫原子得到的有機基團，例如從苯得到的苯基。
“雜芳基”是芳族雜環(huán)。較佳的雜芳基包括，但不限于，噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡嗪基、噁唑基、噻唑基、喹啉基、嘧啶基和四唑基。
“烷氧基”是具有烴鏈取代基的氧原子，其中烴鏈是烷基或烯基(如-O-烷基或-O-烯基)；“烷氧基”是通過氧連接于分子其余部分的烷基，如甲氧基。較佳的烷氧基包括，但不限于，甲氧基、乙氧基、丙氧基等。
“羥烷基”是具有羥基取代基(如-OH)并可具有其它取代基的取代烴鏈。較佳的羥烷基包括，但不限于，羥乙基、羥丙基、苯基羥烷基。
“羧烷基”是具有羧基取代基(如-COOH)并可具有其它取代基的取代烴鏈。較佳的羧烷基包括，但不限于，羧甲基、羧乙基及其酸和酯。
“氨基烷基”是由氨基取代烴鏈(如烷基)而成的基(如-NH-烷基-)，例如二甲氨基烷基。
“烷氨基”是具有一個或兩個烷基取代基(如-N-烷基)的氨基。
“烯氨基”是具有一個或兩個烯基取代基(如-N-烯基)的氨基。
“炔氨基”是具有一個或兩個炔基取代基(如-N-炔基)的氨基。
“烷基亞氨基”是具有一個或兩個烷基取代基(如-N-烷基)的亞氨基。
“芳烷基氧基”是具有一個芳烷基取代基的氧原子，如苯氧甲基、苯亞甲氧基。 “雜芳基烷氧基”是具有雜芳烷基取代基的氧原子，如 “芳烷基”是被芳基取代的烷基。較佳的芳烷基包括芐基和苯乙基。
“雜芳烷基”是被雜芳基取代的烷基。
“芳氨基”是被芳基取代的氨基(如-NH-芳基)。
“芳氧基”是具有芳基取代基的氧原子(如-O-芳基)。
“酰基”或“羰基”是從羧酸除去羥基而形成的基團(如R-C(＝O)-)。較佳的烷酰基包括，但不限于，乙?；?、丙?；投□；?。
“酰氧基”是具有?；〈难踉?如-O-酰基)，例如-O-C(＝O)-烷基。
“酰氨基”是具有酰基取代基的氨基(如-N-酰基)，例如-NH-(C＝O)-烷基。
“苯甲酰氧基”苯甲?；趸?。
“苯甲?；眮碜员郊姿岬姆蓟鵆6H5CO-。
“苯甲酰基氧基”苯甲酰氧基。來自苯甲酸的芳基C6H5COO-。
“氨基甲酸鹽(酯)”氨基甲酸的鹽；含-NCO2-基團，在本專業(yè)中也稱作脲烷。
“羧基”表示羧基基團的詞頭。
“酯”從醇(堿)和有機酸消除水而形成的有機鹽；羧酸的官能團衍生物是通過簡單的水解反應能轉化為羧酸的那些化合物。最普通的這種衍生物是羥基被烷氧基取代的酯，例如 “糖苷”糖和另一物質(zhì)所成的天然化合物，它水解出糖和一種要素(例如，松柏苷水解得到葡萄糖和作為要素的松柏醇；葡萄糖苷水解得到葡萄糖，果糖苷水解得到果糖，半乳糖苷水解得到半乳糖，等)；糖類的環(huán)狀縮醛。
“鹵”、“鹵素”或“鹵根”是氯、溴、氟或碘原子基團。氯、溴和氟是較佳的鹵根。
“內(nèi)酯”羥基羧酸從酸的羥基和羧基失去一分子水形成的各類內(nèi)酯，其特征在于環(huán)上的羰基氧基-OCO-，并按母酸的羥基位置定位；環(huán)狀酯。
“藥學上可接受的”鹽是在任何酸性基團(如羧基)上形成的陽離子鹽或在任何堿性基團上(如氨基)形成的陰離子鹽。很多這樣的鹽是現(xiàn)有技術中已知的，如1987年9月11日公開的Johnston等的世界專利申請87/05297中所述，現(xiàn)結合于此作為參考。較佳的陽離子鹽包括堿金屬鹽(如鈉和鉀)和堿土金屬鹽(如鎂和鈣)。較佳的陰離子鹽包括鹵化物(如氯化物)鹽。
“鹽”酸和堿反應產(chǎn)生的物質(zhì)；金屬(陽性)基團和非金屬(陰性)基團的化合物。
“甾核”一類脂類化合物的統(tǒng)稱，包括類固醇、膽酸、強心苷、皂草苷和性激素。 “取代基”取代母體化合物的氫原子的任何原子或基團。
“取代”由取代基替代化合物中的一個元素或基團。
“取代的”指已經(jīng)過取代反應的化合物。
“取代反應”一個分子(通常為有機分子)中的一個原子或原子團被另一個原子或原子團替換的反應。
取代基本身也可被取代。這樣的取代作用可取代上一個或一個以上取代基。這種取代基包括，但不限于，C.Hansch & A.Leo，Substituent Constants for Correlation Analysis in Chemistry andBiology(1979)所列出的那些取代基，現(xiàn)結合于此作為參考。較佳的取代基包括，但不限于，烷基、烯基、烷氧基、羥基、氧代、氨基、氨基烷基(例如氨甲基等)、氰基、鹵、羧基、烷氧乙?；?例如羰基乙氧基等)、巰基、芳基、環(huán)烷基、雜芳基、雜環(huán)烷基(如吡啶基、嗎啉基、吡嗪基、吡咯烷基等)、亞氨基、硫代、羥烷基、芳氧基、芳烷基以及它們的結合。
“單糖”是一個單一的糖基團；例如己糖、2-脫氧葡萄糖、6-脫氧己糖、2，6-二脫氧己糖等、鼠李糖、葡萄糖、阿拉伯糖、毛地黃毒素糖、果糖、半乳糖、鼠李吡喃糖、吡喃己糖、6-脫氧葡萄糖、4，6-二脫氧吡喃葡糖苷、甘露糖、磁麻糖、木糖、來蘇糖、核糖、毛地黃糖、4-氨基-2，4，6-三脫氧來蘇吡喃己糖、4-氨基-4，6-二脫氧吡喃葡萄糖、2，3-二脫氧鼠李吡喃糖、4-甲氧基-4，6-二脫氧鼠李吡喃糖。
“寡糖”是具有2-8個(較佳為2-3個)單糖殘基的糖。寡糖的最后一個單糖殘基被稱作“末端”單糖殘基。組成寡糖的單糖殘基可以是相同或不同的。所述單糖殘基通過一個單糖殘基的OH基與其它單糖殘基的異頭碳相連接。
“單糖”或“寡糖”殘基可以環(huán)式或椅式構型表示。例如，葡萄糖(單糖)可表示為 發(fā)明的詳述本發(fā)明包括某些含寡糖的14-氨基甾類化合物、其藥物組合物，以及用所述新型化合物及其組合物治療人或其它哺乳動物充血性心力衰竭的治療方法。因此，本發(fā)明所用的具體化合物和組合物必須是藥學上可接受的。如本文中所用的，這種“藥學上可接受的”成分是適用于人和/或哺乳動物而無過度不良反應(例如毒性、刺激性和變態(tài)反應)、具有相當合理的利益/危險比的成分。
活性物質(zhì)如下通式所示含寡糖的14-氨基甾類化合物及其藥學上可接受的酸式鹽或酯 其中a)R1為(i)COOR5，其中R5為H；C1-6烷基；氨基取代的C1-6低級烷基；芳烷基或雜芳基烷基或碳環(huán)；(ii)CHR6OH，其中R6為氫原子或C1-6低級烷基；或(iii)COR，其中R為H；C1-6低級烷基；氨基取代的C1-6低級烷基；氨基或二烷氨基；b)R2為-NR7R8，其中R7和R8可相同或不同，為氫原子或C1-6低級烷基c)R3為(1)具有如下結構的寡糖殘基 其中R9為H、甲基、羥基、羧基、乙酸基、芳烷氧基、雜芳基烷氧基或芐氧基；R10為H、甲基、羧基、乙酸基、芳烷氧基、雜芳基烷氧基、芐氧基或羥基；R11為O，當R11為末端單糖糖基上的取代基時，則為OH、甲基、乙酸基、雜芳基烷氧基、芳烷氧基，R12為H、甲基、甲基羥基甲基或乙酸基甲基；或(ii)具有如下結構的單糖殘基 其中R14和R15可相同或不同，為H、C1-6低級烷基、芳烷基、雜芳基烷基、雜芳基或芳基；R17可為H、羥基、乙酸基或芐氧基；R18和R19為羥基、乙酸基或芐氧基；或(iii)具有如下結構的寡糖殘基 其中R14或R15可相同或不同，為H、C1-6低級烷基、雜芳基烷基、芳烷基或芳基；R14a為O，當R14a為末端單糖殘基上的取代基時，則必須為羥基、甲基、乙酸基、芳烷氧基或雜芳基烷氧基；d)R4為(i)OH，或(ii)H，或(iii)OR13，其中R13為單糖殘基、乙酸基、芐氧基、芳烷基或雜芳基烷基e)Z為(i)-CH-，其中a和b為單鍵，或(ii)＝C，其中a和b為雙鍵。
本文中所用的“～”符號表示立體化學未定，甾核上的取代基可以是α或β構型的。甾核上的取代基以β構型為較佳。而且，包括寡糖殘基的單糖單位既可以是α構型也可以是β構型的。糖化學領域的技術人員明白，在某個給定的糖殘基上的取代基的構型可由具體命名的糖來表明。
本發(fā)明還包括在甾核的14位上引入氨基的方法，其中所述氨基通過包括如下步驟的碘代異氰酸酯加成反應非對映選擇性地被引到甾核14位上a)將異氰酸酯加成到甾核14-15位雙鍵上；b)脫鹵；c)甾核14位上異氰酸酯轉化為氨基。
本發(fā)明的含寡糖的14-氨基甾類化合物甾核本發(fā)明的新穎的含寡糖的14-氨基甾類化合物包括一個甾核，所述甾核被各種取代基取代。
甾核上的取代基R1取代基R1取代基是甾核17位上的取代基。有三種可能的R1取代基。R1可能是羧酸酯，COOR5，其中R5為H、C1-6低級烷基、被氨基取代的C1-6低級烷基、芳烷基或雜芳基烷基或碳環(huán)。較佳的R5取代基為C1-6低級烷基、芳烷基或碳環(huán)，最佳的R5為甲基；因此，R1為COOCH3(羧甲酯)。
R1可為CHR6OH，其中R6為氫原子或含1-6個碳原子的低級烷基；較佳的R6為H或CH3；因此，R1為CH2OH或CH(CH3)OH。
最后，R1可為COR″，其中R為H、C1-6低級烷基、甲氨基、氨基或二烷氨基。較佳的R為氨基或甲氨基。最佳的R為氨基；因此，R1為CONH2。
甾核上最佳的R1取代基為羧酸酯，COOR5，其中R5為甲基(COOCH3)。
R2取代基R2取代基在甾核的14位上。有一個R2取代基。R2為-NR7R8，其中R7和R8可相同或不同，為氫原子或含1-6個碳原子的低級烷基。R7和R8最好為H因此，R2為NH2。
R3取代基R3取代基在甾核的3位上。有三種R3取代基。R3可為具有如下結構的含寡糖的殘基 其中，R9為H、甲基、羥基、羧基、乙酸基、芳烷氧基或苯甲酸基；R10為H、甲基、羧基、乙酸基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、苯甲酸基或羥基；R11為O、芳烷氧基、雜芳烷氧基；R12為H、甲基、甲基羥甲基或乙酸基甲基。在本發(fā)明的化合物中，當R11為O時，所述O通過苷鍵連接單糖殘基。
寡糖殘基可包含2或3個單糖單位。所述單糖單位可以是相同或不同的。較佳的單糖單位為二脫氧吡喃核己糖和吡喃鼠李糖。
較佳的R9取代基為H、甲基和羥基。最佳的R9為H。較佳的R10取代基為H、甲基和羥基。最佳的R9為羥基。除了R11為寡糖殘基的末端單糖殘基上的取代基外，R11為O。末端單糖殘基上的較佳R11取代基為羥基。
較佳的R12取代基為H和甲基。最佳的R12取代基為甲基。
R3也是具有如下結構的含寡糖的殘基 其中，R14和R15可以相同或不同，為H、C1-6低級烷基、芳烷基、雜芳烷基、雜芳基或芳基；R17可為H、羥基、乙酸基或苯甲酸基；R18為羥基、乙酸基或苯甲酸基。
寡糖殘基可包含2或3個單糖單位，以3個單糖單位為佳。所述單糖單位可以是相同或不同的。較佳的單糖單位為二脫氧吡喃核己糖和吡喃鼠李糖。
較佳的R14取代基為H和C1-6低級烷基，更佳的R14取代基為C1-6低級烷基，最佳的R14取代基為甲基。較佳的R15取代基為H和C1-6低級烷基，更佳的R15取代基為C1-6低級烷基，最佳的R15取代基為甲基。較佳的R17取代基為H、乙酸基和羥基，最佳的R17取代基為H。
較佳的R18取代基為羥基和乙酸基，最佳的R18取代基為羥基。較佳的R19取代基為羥基和乙酸基，最佳的R19取代基為羥基。
最后，R3是具有如下結構的寡糖殘基 其中，R14和R15可以相同或不同，為H、C1-6低級烷基、芳烷基、雜芳烷基、雜芳基或芳基；R14a為O，當R14a為末端單糖殘基上的取代基時，則必須為羥基、甲基、乙酸基、芳烷氧基或雜芳基烷氧基。在本發(fā)明的化合物中，當R14a為O時，所述O以糖苷鍵連接單糖殘基。
寡糖殘基可包含2或3個單糖單位，以3個單糖單位為佳。所述單糖單位可以是相同或不同的。較佳的單糖單位為二脫氧吡喃核己糖和吡喃鼠李糖。
較佳的R14和R15為C1-6低級烷基，最佳的R14和R15為甲基。當R14a為末端單糖殘基上的取代基時，較佳的R14a為羥基。
R4取代基R4取代基在甾核的12位上。當R13為單糖糖基、乙酸基、芐氧基、芳烷基或雜芳基烷基時，R4可為OH、H或OR13。所述單糖殘基選自己糖、2-脫氧葡萄糖、6-脫氧己糖、2，6-二脫氧己糖、鼠李糖、葡萄糖和阿拉伯糖、毛地黃毒素糖、果糖、半乳糖、鼠李吡喃糖、己吡喃糖、6-脫氧葡萄糖、4，6-二脫氧吡喃葡糖苷、甘露糖、磁麻糖、木糖、來蘇糖、核糖、毛地黃糖、葡糖胺、4-氨基-2，4，6-三脫氧來蘇己吡喃糖、4-氨基-4，6-二脫氧吡喃葡糖苷、2，3-二脫氧鼠李吡喃糖、4-甲氧基-4，6-二脫氧鼠李吡喃糖。以它們的β-D或α-L異頭物為佳。
最佳的R4取代基為H。
Z為-CH-，其中a和b為單鍵；或＝C，其中a和b均為雙鍵。較佳的Z為-CH-，其中a和b為單鍵。
較佳的本發(fā)明的含寡糖的14-氨基甾族化合物為 (3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-N-甲基雄烷-17-甲酰胺 (3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-6-脫氧-2，3-O-(1-甲基亞乙基)-α-L-吡喃甘露糖基〕氧〕雄烷-17-羧酸甲酯
(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-甲酰胺 (3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-羧酸甲酯 (3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-羧酸甲酯
14β-氨基-3β-〔α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯 14β-氨基-3β-〔α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯 14β-氨基-3β-〔2″，3″-O-異亞丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-異亞丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯
14β-氨基-3β-〔2″，3″，4″-O-乙?；?α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-異亞丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯 14β-氨基-3β-〔4″-O-乙?；?2″，3″-O-異亞丙基-β-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-異亞丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯 (3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-α-L-甘露吡喃糖基)-氧〕-雄烷-17-羧酸甲酯本發(fā)明的含寡糖的14-氨基甾類化合物的制備本發(fā)明還包括在甾核14位上引入氨基的方法。按U.S.4,325,879；U.S.4,552,868；U.S.4,584,289和U.S.4,885,280(本文引作參考)的現(xiàn)有化學技術利用疊氮酸在甾核的14位引入疊氮基。然后將疊氮基還原成甾核14位上的氨基。涉及利用碘代異氰酸鹽的本發(fā)明方法是對本領域的技術改進，因為它消除了有害的疊氮酸，更易適用于大規(guī)模制備操作，提供了更好的14-氨基甾類化合物的得率，并在甾核上存在其它對酸敏感的官能度時使14位氨基能被引入。甾核3位上的寡糖殘基是對酸敏感的基團，特別易被疊氮酸所斷裂。因此，碘代異氰酸鹽的使用消除了寡糖殘基從甾核上斷裂下來的問題。
本發(fā)明方法通過將碘代異氰酸鹽加成到甾核的14-15位雙鍵上，然后脫鹵，并將異氰酸基轉化為氨基，而非對映選擇性地在甾核14位上引入氨基。在將碘代異氰酸鹽加成到甾核的14-15位雙鍵上后，經(jīng)脫鹵反應除去碘基，然后將異氰酸基轉化為氨基。
本發(fā)明方法具體包括以下步驟a)在合適的溶劑中，用(最好，但不限于)氰酸銀和碘就地生成異氰酸鹽。所述溶劑包括，但不限于，諸如乙酸乙酯或乙酸丙酯的酯類，諸如乙腈或丙腈的腈類，諸如二氯甲烷、氯仿或二氯乙烷的鹵代烴類、諸如四氫呋喃或叔丁基甲基醚的醚類，或它們的混合物。較佳的溶劑包括腈類(更佳為乙腈)與酯類或醚類(最佳為乙酸乙酯或叔丁基甲基醚)的混合物。異氰酸鹽加成反應的溫度可從-30℃-100℃，最佳為-10℃-5℃。異氰酸鹽加成反應的反應時間可從1-6小時，較佳為1-3小時。試劑可以任何次序、任何速度一起加入，最好是將碘放在溶劑中，加到甾類及氰酸銀在溶劑中的混合物中，歷時30-60分鐘；b)脫鹵反應的進行以在合適的溶劑中用有機錫氫化物試劑和自由基引發(fā)劑為佳。有機錫氫化物試劑包括但不限于氫化三正丁基錫之類烷基錫氫化物或氫化二苯基錫或氫化三苯基錫之類芳基錫氫化物。自由基引發(fā)劑包括但不限于2，2′-偶氮二異丁氰(AIBN)或過氧化苯甲?；蜻^氧化三月桂酰之類過氧化物。所述溶劑包括，但不限于，諸如乙酸乙酯、乙酸異丙酯或乙酸丙酯的酯類，諸如乙腈或丙腈的腈類，諸如二氯甲烷、氯仿或二氯乙烷的鹵代烴類、諸如乙醚、四氫呋喃或叔丁基甲基醚的醚類，諸如己烷或庚烷的烴類，諸如苯或甲苯的芳烴類，或它們的混合物。較佳的溶劑包括芳香烴類(更佳的為甲苯)和鹵代烴類(最佳的為二氯甲烷)。脫鹵反應的反應溫度可在0℃-100℃，最佳為15℃-30℃。反應時間可為1-6小時，最佳為2-4小時；c)異氰酸鹽水解成氨基采用強酸(包括但不限于鹽酸、硫酸、氫溴酸或三氟乙酸)，或采用堿(包括但不限于氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀或其它能在水介質(zhì)中產(chǎn)生氫氧根離子的堿，如三乙胺或吡啶。合適的水解反應助溶劑包括，但不限于，可與水混溶的腈類如乙腈或丙腈，可與水混溶的醚類如四氫呋喃、二甲氧乙烷或二噁烷，或其它可與水混溶的溶劑，如N，N-二甲基甲酰胺或二甲亞砜，或它們的混合物。較佳的溶劑包括可與水混溶的腈類，更佳的為乙腈，以及可與水混溶的醚類，最佳的為四氫呋喃、二甲氧乙烷或二噁烷。水解反應的溫度，對于酸催化的水解來說，可從0℃-60℃，最佳為15℃-30℃，對于堿催化的水解來說，可從室溫到100℃。酸催化水解的反應時間可從4-72小時，最佳為12-36小時，堿催化水解的反應時間可從32-48小時，最佳為2-12小時。
下面列舉非限制性的實施例以說明在甾核的14位上引入氨基的異氰酸鹽方法。
實施例1(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-羧酸甲酯
A.(3β，5β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙酰基-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-14-羥基-卡-20(22)-烯內(nèi)酯將毛地黃毒苷(2.0克，0.0026摩爾)溶于無水吡啶(50毫升)。加入乙酐(25毫升)，將溶液加熱到80℃，3小時。冷卻到室溫后，將反應液傾入冰/水(500毫升)，形成琥珀色固體。合并有機層，用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×100毫升)、飽和氯化鈉水溶液(1×100毫升)洗滌，干燥(硫酸鎂)，用活性炭處理并過濾。將濾液減壓濃縮成固體。用二氯甲烷(2×100ml)抽提混合物。通過與甲苯(2×20毫升)、然后與甲醇(2×20毫升)共沸蒸餾除去痕量吡啶，得到1.8克(74％)1，為白色固體。
B.(3β，5β，14β，17β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-14，21-二羥基-孕-20-酮將化合物1(0.93克，0.001摩爾)溶于二氯甲烷(100毫升)并冷卻至-78℃。用臭氧處理該冷卻的溶液8分鐘，產(chǎn)生持久的藍色。這時，臭氧加成不再進行，將反應液再攪拌0.5小時。然后，以中等速度通入氧氣氣泡15分鐘。再通入氮氣直至藍色消失。使反應液達到室溫，加入飽和碳酸鉀水溶液(50毫升)，將所得的反應液攪拌20小時。兩相分離，有機層用水(1×50毫升)、飽和氯化鈉水溶液(1×50毫升)洗滌，干燥(硫酸鎂)并過濾。濾液減壓濃縮，得到白色泡沫狀固體。將此固體進行硅膠層析(230-400目)，用97∶3二氯甲烷∶甲醇作為洗脫劑。合并含純產(chǎn)品的流出分，減壓濃縮并真空干燥24小時，得到0.6克(62％)2，為白色固體。NMR和質(zhì)譜和結構一致。此化合物繼續(xù)進行下一步。
C.(3β，5β，14β，17β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙酰基-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-14-羥基雄烷-17-羧酸向化合物2(17克，0.187摩爾)的丙酮(200毫升)溶液中加入碳酸鉀(3.88克，0.028摩爾)水(25毫升)溶液，再加入高碘酸鈉(12克，0.056摩爾)水(50毫升)溶液。將所得的混合物于室溫下攪拌24小時。用水(250毫升)稀釋反應液，然后用1N鹽酸將其酸化為pH1。溶液酸化后很快用二氯甲烷提取(2×300毫升)。合并有機層，用5％鹽酸水溶液(1×200毫升)、水(1×200毫升)洗滌，干燥(硫酸鎂)和過濾。濾液減壓濃縮得一白色固體。將此固體進行硅膠層析，用97.5∶2.5二氯甲烷∶甲醇為洗脫劑。合并含純產(chǎn)品的流出分，減壓濃縮，得16.2克(97％)3，為一白色固體。此化合物繼續(xù)進行下一步。
D.(3β，5β，14β，17β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙酰基-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-14-羥基雄烷-17-羧酸甲酯向化合物3(15克，0.017摩爾)的無水乙腈(100毫升)溶液中加入1，8-二氮雜二環(huán)〔5.4.0〕十一碳-7-烯(DBU，2.4毫升，2.89克，0.019摩爾)，再加入碘甲烷(1.18毫升，2.7克，0.019摩爾)。將所得的溶液于室溫下攪拌20小時。反應液用水(1升)稀釋，并用二氯甲烷(5×200毫升)提取。合并提取液，用飽和氯化鈉水溶液(2×200毫升)洗滌，干燥(硫酸鎂)并過濾。濾液減壓濃縮成一固體。將此固體進行硅膠(230-400目)層析，用99∶1二氯甲烷∶甲醇為洗脫劑。將含純產(chǎn)品的流出分減壓濃縮，得一固體，真空干燥得13.68克(90％)4，為一白色固體。此化合物繼續(xù)進行下一步。
E.(3β，5β，17β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-雄-14-烯-17-羧酸甲酯將化合物4(4.02克，0.0044摩爾)溶于無水吡啶(20毫升)，溶液在冰/甲醇浴上冷卻至-5℃。經(jīng)25分鐘時間滴加亞硫酰氯(5毫升)的無水吡啶(5毫升)溶液。然后將反應液傾入冰水(400毫升)直至冰熔化(10分鐘)。所得的混合物用乙酸乙酯(3×150毫升)提取。合并提取液，依次用1N鹽酸(1×100毫升)、水(2×100毫升)、飽和碳酸氫鈉水溶液(2×100毫升)、飽和氯化鈉水溶液(1×100毫升)洗滌，干燥(硫酸鎂)并過濾。濾液減壓濃縮成一泡沫狀固體。將此固體進行硅膠(230-400目)層析，用30∶70乙酸乙酯∶己烷為洗脫劑。合并含純產(chǎn)品的流出分，減壓濃縮，得得3.26克(83％)5，為一白色固體。此化合物繼續(xù)進行下一步。
F.(3β，5β，14β，17β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙酰基-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-15-碘-14-異氰酸根雄烷-17-羧酸甲酯將化合物5(0.27克，0.3毫摩爾)溶于乙酸乙酯(1.35毫升)和乙腈(2.7毫升)，溶液在冰/甲醇浴上冷卻至1℃。加入氰酸銀(0.054克，0.36毫摩爾)，再滴加碘(0.081克，0.32毫摩爾)在乙酸乙酯(4毫升)中的溶液。加碘完畢后(20分鐘)再繼續(xù)攪拌1.5小時。然后，用乙酸乙酯(20毫升)稀釋反應液，經(jīng)硅藻土過濾，濾液用1％亞硫酸鈉水溶液(1×10毫升)洗滌，然后將有機層減壓濃縮，得0.32克(99％)6，為一泡沫狀固體。此化合物再進行下一步。
G.(3β，5β，14β，17β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙酰基-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-14-異氰酸根-雄烷-17-羧酸甲酯在用火焰干燥過的儀器中，在氮氣氛圍下，將6(0.32克，0.3毫摩爾)溶于無水二氯甲烷(10毫升)中。向此溶液中加入催化劑2，2′-偶氮二異丁氰(AIBN，0.003克)。將所得溶液在室溫下攪拌1小時，然后減壓濃縮成一油狀物。將此油狀物與己烷一起研磨，得一白色固體。濾集此白色固體，空氣干燥，得0.25克(89％)。此化合物繼續(xù)進行下一步。
H.(3β，5β，14β，17β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-14-氨基雄烷-17-羧酸甲酯向化合物7(0.3克，0.32毫摩爾)的乙腈(15毫升)溶液中，加入碳酸鉀(0.66克，4.8毫摩爾，15當量)水(10毫升)溶液。反應液在回流溫度下攪拌4小時。冷卻至室溫后，將反應液減壓濃縮除去乙腈。向留下的水性殘留物中加入水(20毫升)，用1N鹽酸將混合物酸化為pH1，然后用濃氫氧化銨迅速調(diào)至堿性(pH9)。用二氯甲烷(2×30毫升)提取水性混合物，合并有機層并干燥(硫酸鎂)和過濾。濾液減壓濃縮成固體，此固體真空干燥得0.23克(79％)粗品8。此化合物直接用于下一步。
I.(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-雄烷-17-羧酸甲酯在用火焰干燥過的儀器中，在氮氣氛圍下，將化合物8(0.23克，0.3毫摩爾)溶于無水甲醇(9毫升)中。加入甲醇鈉(0.063克，1.2毫摩爾，4當量)的無水甲醇(2毫升)溶液。將反應液在室溫下攪拌3小時，再減壓濃縮反應液，得到白色殘渣。將此殘渣溶于水(30毫升)并冷卻于冰/水浴中。用1N鹽酸將溶液酸化為pH1，然后用濃氫氧化銨迅速調(diào)至堿性(pH9)。用二氯甲烷(2×30毫升)提取水性混合物，合并有機層并干燥(硫酸鎂)和過濾。濾液減壓濃縮成固體，此固體經(jīng)硅膠(230-400目)層析，用二氯甲烷∶含0.5％濃氫氧化銨的甲醇(9∶1)作為洗脫劑。合并含純產(chǎn)品的流出分，減壓濃縮成固體，將此固體真空干燥得終產(chǎn)品(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-羧酸甲酯。
實施例2(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-羧酸甲酯
A.(3β，5β，17β)-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄-14-烯-17-羧酸甲酯為制備(3β，5β，17β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙酰基-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙酰基-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-雄-14-烯-17-羧酸甲酯，參考以上之實施例2的制備。
在用火焰干燥過的儀器中，在氮氣氛圍下，將(3β，5β，17β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-雄-14-烯-17-羧酸甲酯(2.29克，0.0025摩爾)溶于無水甲醇(50毫升)中。加入甲醇鈉(0.72克，0.014摩爾)的無水甲醇(10毫升)溶液，將溶液在室溫下攪拌3小時。減壓濃縮反應液，得一固體。將此固體溶于水(50毫升)。用1N鹽酸將溶液酸化為pH1，然后用濃氫氧化銨迅速調(diào)至堿性(pH9)。用二氯甲烷(2×50毫升)提取所得的混合物，合并提取物并干燥(硫酸鎂)和過濾。濾液減壓濃縮成固體，該固體真空干燥得到1.9克(100％)1。NMR和質(zhì)譜與結構一致。該化合物繼續(xù)進行下一步。
B.(3β，5β，17β)-3-〔(O-2，6-二脫氧-4-O-〔1-(1-甲基-2-氧乙基)-3-氧丙基〕-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄-14-烯-17-羧酸甲酯向化合物1(1.9克，0.0012摩爾)的95∶5乙醇∶水(100毫升)溶液中加入高碘酸鈉(1.9克，0.009摩爾)的水溶液(20毫升)。將反應液于室溫下攪拌20小時。將反應液過濾，濾液減壓濃縮得一固體。將此固體溶于水(100毫升)，用二氯甲烷(3×50毫升)提取。合并提取液，用1％硫酸氫鈉水溶液(1×50毫升)、水(2×50毫升)洗滌，干燥(硫酸鎂)并過濾。濾液減壓濃縮成泡沫狀白色固體，此固體真空干燥得1.81克(96％)2。此化合物繼續(xù)進行下一步。
C.(3β，5β，17β)-3-〔(O-2，6-二脫氧-4-O-〔3-羥丙基-1-(2-羥基-1-甲基乙氧基)〕-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄-14-烯-17-羧酸甲酯-向化合物2(1.81克，0.0025摩爾)的95∶5甲醇∶水(100毫升)溶液中加入硼氫化鈉(0.94克，0.025摩爾)。將溶液于室溫下攪拌1小時。滴加乙酸到反應液中，使pH為7。將反應液減壓濃縮得一固體。將此固體溶于水(30毫升)，用二氯甲烷(3×25毫升)提取，干燥(硫酸鎂)并過濾。濾液減壓濃縮成固體，此固體真空干燥得1.31克(72％)3。此化合物繼續(xù)進行下一步。
D.(3β，5β，17β)-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄-14-烯-17-羧酸甲酯向化合物3(1.3克，0.0018摩爾)的甲醇(100毫升)溶液中加入0.05N鹽酸(22.1毫升)。將反應液于室溫下攪拌3小時。然后用飽和碳酸氫鈉水溶液中和反應液，減壓濃縮得一固體。將此固體溶于水(50毫升)，用二氯甲烷(3×25毫升)提取，合并提取液并干燥(硫酸鎂)和過濾。濾液減壓濃縮成泡沫狀固體，此固體真空干燥得1.0克(94％)4。此化合物繼續(xù)進行下一步。
E.(3β，5β，17β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄-14-烯-17-羧酸甲酯將化合物4(1.0g，0.0017摩爾)溶于無水吡啶(15毫升)中。加入乙酐(15毫升)，將反應液在80℃攪拌3小時。然后將反應液逐漸冷卻至室溫并攪拌18小時。將反應液傾入水(200毫升)中并攪拌10分鐘。用二氯甲烷(2×75毫升)提取水混合物。合并提取物，用飽和碳酸氫鈉水溶液(3×100毫升)、水(1×100毫升)洗滌，干燥(硫酸鎂)和過濾。濾液減壓濃縮成泡沫狀固體，此固體真空干燥得0.78克(64％)5。此化合物繼續(xù)進行下一步。
F.(3β，5β，14β，17β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙酰基-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-15-碘-14-異氰酸根合-雄烷-17-羧酸甲酯將化合物5(0.76克，0.001摩爾)溶于乙酸乙酯(4.5毫升)和乙腈(9毫升)，將溶液在冰/甲醇浴上冷卻至1℃。加入氰酸銀(0.19克，0.0013摩爾)，再滴加碘(0.30克，0.0012摩爾)的乙酸乙酯(13.5毫升)溶液。加碘完畢(20分鐘)后再繼續(xù)攪拌1小時。然后，用乙酸乙酯(50毫升)稀釋反應液，經(jīng)硅藻土過濾，濾液。用1％亞硫酸鈉水溶液(1×50毫升)洗滌，然后將有機層減壓濃縮，得0.9克(96％)6，為一泡沫狀固體。此化合物再進行下一步。
G.(3β，5β，14β，17β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙?；?2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-14-異氰酸根-雄烷-17-羧酸甲酯在用火焰干燥過的儀器中，在氮氣氛圍下，將6(0.9克，0.001摩爾)溶于無水二氯甲烷(18毫升)中。向此溶液中加入催化劑2，2′-偶氮二異丁氰(AIBN，0.001克)，再加入三丁基氫化錫(0.3毫升，0.32克，0.001摩爾)。將所得溶液在室溫下攪拌3小時，然后減壓濃縮成一油狀物。將此油狀物與己烷一起研磨，得一白色固體。濾集此白色固體，空氣干燥，得0.65克(84％)7。此化合物繼續(xù)進行下一步。
H.(3β，5β，14β，17β)-3-〔(O-3，4-二-O-乙酰基-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-3-O-乙酰基-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-14-氨基-雄烷-17-羧酸甲酯向化合物7(0.65克，0.00085摩爾)的乙腈(25毫升)懸浮液中，加入碳酸鉀(1.8克，0.013摩爾，15當量)水(10毫升)溶液。反應液在回流溫度下攪拌3小時。冷卻至室溫后，將反應液減壓濃縮除去乙腈。向留下的水性殘留物中加入水(10毫升)，用1N鹽酸將混合物酸化為pH1，然后用濃氫氧化銨迅速調(diào)至堿性(pH9)。用二氯甲烷(2×50毫升)提取水混合物，合并有機層并干燥(硫酸鎂)和過濾。濾液減壓濃縮成固體，此固體真空干燥得0.6克(96％)粗品8。此化合物直接用于下一步。
I.(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-雄烷-17-羧酸甲酯在火焰干燥過的儀器中，在氮氣氛圍下，將化合物8(0.60克，0.0082摩爾)溶于無水甲醇(25亳升)中。加入甲醇鈉(0.35克，0.007摩爾)的無水甲醇(10毫升)溶液。將反應液在室溫下攪拌1小時，再減壓濃縮反應液，得到白色殘渣。將此殘渣溶于水(50毫升)并冷卻于冰/水浴中。用1N鹽酸將溶液酸化為pH1，然后用濃氫氧化銨迅速調(diào)至堿性(pH9)。用二氯甲烷(3×25毫升)提取水性混合物，合并提取物并干燥(硫酸鎂)和過濾。濾液減壓濃縮成固體，此固體經(jīng)硅膠(230-400目)層析，用二氯甲烷∶含0.5％濃氫氧化銨的甲醇(9∶1)作為洗脫劑。合并含純產(chǎn)品的流出分，減壓濃縮成固體，將此固體真空干燥得終產(chǎn)品(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-羧酸甲酯。
實施例3(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-羥基-雄烷-17-羧酸甲酯 A.(3β，5β，14β，17β)-3-乙酸基-15-碘-14-異氰酸根-雄烷-17-羧酸甲酯(3β，5β，14β，17β)-3-乙酸基-雄-14-烯-17-羧酸甲酯的制備在U.S.4,855,280；U.S.4,584,289；U.S.4,325,879中有描述，現(xiàn)結合于此作為參考。
將(3β，5β，17β)-3-乙酸基-雄-14-烯-17-羧酸甲酯(50克，0.134摩爾)溶于乙酸乙酯(160毫升)和乙腈(320毫升)，將溶液在冰/甲醇浴上冷卻至1℃。加入氰酸銀(23.7克，0.158摩爾)，再滴加碘(37.2克，0.147摩爾)的乙酸乙酯(480毫升)溶液。加碘完畢(20分鐘)后再將反應液繼續(xù)攪拌1小時。然后，將反應液過濾，濾液用1％亞硫酸鈉水溶液(1×500毫升)洗滌，然后將有機層減壓濃縮，得70克(96％)1，為一油狀物。此化合物再進行下一步。
B.(3β，5β，14β，17β)-3-乙酸基-14-異氰酸根合-雄烷-17-羧酸甲酯將化合物2(65克，0.121摩爾)溶于二氯甲烷(325毫升)中。向此溶液中加入催化劑2，2′-偶氮二異丁氰(AIBN，0.005克)，再加入三丁基氫化錫(33.3毫升，36克，0.126摩爾)。將所得溶液在29℃下攪拌2.5小時，然后減壓濃縮成一油狀物。將此油狀物與己烷一起研磨，得一白色固體。濾集此白色固體，空氣干燥，得38.3克(77％)。此化合物繼續(xù)進行下一步。
C.(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-羥基-雄烷-17-羧酸甲酯將化合物2與乙腈(247毫升)和濃鹽酸(133毫升)合并在一起并攪拌。3小時后，加水(133毫升)并使反應液在室溫下繼續(xù)攪拌48小時。然后將反應液冷卻于冰/水浴中，滴加濃氫氧化銨使溶液為堿性(pH9)而反應液溫度維持于25℃以下。然后，用二氯甲烷提取所得的混合物(4×200毫升)，合并提取液并有水洗滌(1×250毫升)，干燥(硫酸鎂)，減壓濃縮，得終產(chǎn)物(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-羥基-雄烷-17-羧酸甲酯。
進一步可將實施例1、2和3中所述按碘代異氰酸鹽化學所制得的17位羧酸酯化合物轉化為實施例4、5、6和7所述的17位甲酰胺衍生物。
實施例4(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-N-甲基-雄烷-17-甲酰胺 終產(chǎn)物在不銹鋼高壓氣體儲罐中，將A，(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-雄烷-17-羧酸甲酯，(0.61克，0.001摩爾)溶于甲醇(15毫升)中，將溶液冷卻于冰/水浴中。然后通入甲胺氣體以飽和該溶液(15分鐘)，密封反應罐，90℃加熱10天。冷卻至室溫后，打開反應罐，將內(nèi)容物減壓濃縮成固體。此固體經(jīng)硅膠層析提純，用80∶20二氯甲烷∶含1％濃氫氧化銨的甲醇作為洗脫劑。合并含純產(chǎn)品的流出分，減壓濃縮并真空干燥得純產(chǎn)物。
實施例5(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-雄烷-17-甲酰胺 終產(chǎn)物在不銹鋼高壓氣體儲罐中，將A，(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-雄烷-17-羧酸甲酯(0.61克，0.001摩爾)溶于甲醇(15毫升)中，將溶液冷卻于冰/水浴中。然后通入氨氣以飽和該溶液(15分鐘)，密封反應罐，90℃加熱10天。冷卻至室溫后，打開反應罐，將內(nèi)容物減壓濃縮成固體。此固體經(jīng)硅膠層析提純，用75∶25二氯甲烷∶含1％濃氫氧化銨的甲醇作為洗脫劑。合并含純產(chǎn)品的流分，減壓濃縮并真空干燥得純的終產(chǎn)物。
實施例6(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-雄烷-17-甲酰胺 終產(chǎn)物在不銹鋼高壓氣體儲罐中，加入298毫克(0.0004摩爾)1，(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-雄烷-17-羧酸甲酯和10毫升MeOH，然后，在冰/水浴冷卻下通入NH3氣體直至飽和(15分鐘)。將此澄清的溶液密封于高壓氣體儲罐中，90℃加熱10天。根據(jù)TLC結果，若反應完成，則在旋轉蒸發(fā)器上減壓濃縮此淡黃色反應混合物，得一米色固體殘渣。用快速色譜法提純該物質(zhì)，用25％MeOH/CH2Cl2+NH4OH作為移動相。收集各流出分，用TLC檢測。根據(jù)TLC，合并在TLC上顯示Rf0.23斑點的流出分(43-81)，在旋轉蒸發(fā)器上減壓濃縮，得一米色固體。將此固體55℃真空干燥過夜，得到純的終產(chǎn)物。
實施例7(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-N-甲基雄烷-17-甲酰胺 終產(chǎn)物在不銹鋼高壓氣體儲罐中，加入298毫克(0.0004摩爾)1，(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-雄烷-17-羧酸甲酯和10毫升MeOH，然后，在冰/水浴冷卻下通入甲胺氣泡直至飽和(15分鐘)。將此澄清的溶液密封于高壓氣體儲罐中，90℃加熱10天。
從烘箱中取出高壓罐，冷卻，打開并用TLC檢測。如果TLC顯示無起始物質(zhì)，則在旋轉蒸發(fā)器上減壓濃縮此淡黃色反應混合物，得一半固體殘渣。用快速色譜法提純該半固體殘渣，用20％ MeOH/CH2Cl2+NH4OH作為移動相(初始比20/80/0.9；最終比20/80/1.8)。根據(jù)TLC檢測結果，合并在TLC上顯示Rf0.43斑點的流出分(20％ MeOH/CH2Cl2+NH4OH)，在旋轉蒸發(fā)器上減壓濃縮，得一米色固體。將此固體與冷乙醚一起研磨，過濾收集得到米色固體終產(chǎn)物，將其55℃真空干燥48小時，得到純的終產(chǎn)物。
本發(fā)明的新化合物還可按現(xiàn)有技術U.S.4,325,879；U.S.4,552,868；U.S.4,552,868；U.S.4,584,289；和U.S.4,885,280所描述的化學方法進行制備，在此均引作參考。下面的非限制性實施例列舉了本發(fā)明的化合物可如何按現(xiàn)有技術進行制備。
實施例8(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-6-脫氧-2，3-O-(1-甲基亞乙基)-α-L-吡喃甘露糖基〕氧〕雄烷-17-羧酸甲酯 終產(chǎn)物向1.125克(2.1毫摩爾)A，(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(6-脫氧-2，3-O-(1-甲基亞乙基)-α-L-吡喃甘露糖基〕氧〕雄烷-17-羧酸甲酯(按U.S.4,885,280所述方法制備的，結合于此作為參考)和1.250克(2.1毫摩爾)2，6-二脫氧-1，3，4-D-(4-硝基苯甲?；?-D-己吡喃核糖苷在60毫升CH2Cl2中的混合物中，加入3.0克分子篩，4埃，8-12目。將混合物室溫攪拌15分鐘，然后冷卻在干冰/丙酮浴中；再滴加2.0毫升三氟甲磺酸三甲基甲硅烷酯(Lancaster公司)的10.0毫升CH2Cl2溶液。混合物在約-80℃攪拌6小時后，加8.0毫升三乙胺于冷混合物中，繼續(xù)攪拌10分鐘。將混合物放在冰箱中緩溫過夜。
真空除去溶劑，殘渣作硅膠層析。將沾污的物質(zhì)用CH2Cl2洗脫，然后用EtOAc/CH2Cl2(1∶4)洗脫需要的流分，得到1.98克。
在400毫克(0.415毫摩爾)上述對硝基苯甲?；p糖的1.0毫升無水甲醇(Aldrich，無水)溶液中，經(jīng)注射器加入NaOCH3的無水甲醇(Alreich)液7.2毫升，0.1217mM?；旌衔镉?℃攪拌6小時，所得產(chǎn)物從反應混合物中沉淀出來，得到終產(chǎn)物(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-6-脫氧-2，3-O-(1-甲基亞乙基)-α-L-吡喃甘露糖基〕氧〕雄烷-17-羧酸甲酯。
實施例914β-氨基-3β-〔α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯 將260毫克14β-疊氮基-3β-〔2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯(按U.S.4,885,280和U.S.4,325,879所述方法制備，結合于此作為參考)溶于12毫升乙腈，在分子篩(130毫克，3埃)和325毫克三-O-乙?；?鼠李糖基溴存在下，將溶液攪拌15分鐘。加入232毫克氰化汞，將反應混合物在室溫下攪拌3小時。
加入飽和碳酸氫鈉溶液后，過濾，用甲苯提取，在壓力(500mb)下經(jīng)硅膠柱層析提純，用乙酸乙酯/己烷混合物(1∶2)洗脫，得14β-疊氮基-3β-〔三-2″，3″，4″-O-乙?；?α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-(1→4)-2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯。
此二-鼠李糖基-14-疊氮基衍生物可在乙醚/石油醚混合物中結晶。
將含250毫克上述二-鼠李糖基-14-疊氮基衍生物的8.5毫升用氬脫氧的無水乙醇、99.5毫克碲粉和74毫克硼氫化鈉的混合物在室溫下攪拌24小時。
在硅藻土上過濾后，蒸發(fā)，用乙酸乙酯提取并用水洗，殘渣在壓力下在硅膠柱上層析提純，用氯仿/乙醇/氫氧化銨(89∶10∶1)混合物洗脫，得到14β-氨基-3β-〔α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯。
實施例1014β-氨基-3β-〔三-2″，3″，4″-O-乙?；?α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯
將5.8克如實施例8所示得到的三-羥基衍生物溶于37毫升二氯甲烷，溶液冷卻于冰浴上。將乙酸酐(2.4毫升)和二甲基氨基吡啶(313毫克)加到溶液中，將反應混合物于室溫攪拌過夜。
將氫氧化鈉水溶液傾入反應混合物中，繼續(xù)攪拌5分鐘，接著用二氯乙烷提取。
有機層用H2O+NH4OH洗滌，用硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)至干。將這樣得到的粗三乙?；a(chǎn)物用快速硅膠柱層析提純，用二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨混合物(97∶2.7∶0.27)洗脫，得到14β-氨基-3β-〔三-2″，3″，4″-O-乙?；?α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯。
實施例1114β-氨基-3β-〔2″，3″-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯
向如實施例8所述獲得的11.2克三-羥基衍生物的77毫升丙酮溶液中，加入97毫升二甲氧基丙烷和3.5克對甲苯磺酸·H2O。將反應混合物室溫攪拌1小時，將氫氧化鈉水溶液在攪拌下經(jīng)數(shù)分鐘傾入反應混合物中，然后用二氯甲烷/甲醇混合物提取。有機層用H2O+NH4OH洗滌，用硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)至干。將這樣得到的粗產(chǎn)物用異丙醚結晶提純，得到14β-氨基-3β-〔2″，3″-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯。
實施例1214β-氨基-3β-〔α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯 在0.2毫升三氟乙酸和一些水(1％)存在下，將如實施例8所述得到的三-羥基衍生物(103毫克)溶于2毫升氯仿中。反應在室溫下進行1小時。
用二氯甲烷/甲醇混合物(85∶15)提取后，用飽和碳酸氫鹽溶液、水洗滌，蒸發(fā)至干，將殘渣用加壓硅膠柱層析提純，用二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨混合物(85∶15∶1)洗脫，得到14β-氨基-3β-〔α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯。
藥理活性評價有人假設，強心甾類化合物的正性變力性效應是由于對心肌細胞肌漿網(wǎng)Na+、K+泵的作用。具體地說，強心甾類抑制Na+、K+-激活的三磷酸腺苷酶，繼而導致細胞內(nèi)Ca++的增加。從而，有更多的Ca++激活收縮機制。參見Goodman and Gilman，The Pharmacolog-ical Nasis of Therapeutics，Chapter 34(8th，Ed.，1990)。
在離體心臟組織和整體動物模型上對一新的化學實體的正性變力性活性進行了評價。離體組織提供化合物變力性潛能的直接測量，因為系統(tǒng)實際上不受代謝、神經(jīng)激素的吸收的干擾，這些因素可影響組織反應。體內(nèi)試驗則提供考慮在離體組織試驗中所缺乏的生理參數(shù)的一種評價。
在變力性活性試驗中，利用從豚鼠心臟取下的乳頭肌條。雖然乳頭肌與瓣膜功能更為有關，但這種肌肉所顯示的基本收縮反應卻與心室肌相似。這種試驗是將從豚鼠心臟切下的乳頭肌片段懸浮于器官浴中，該器官浴給組織提供控制的溫度、含細胞功能所需底物的水環(huán)境。將壓力傳感器接在肌條游離端使肌肉懸于固定基點和傳感器中間，施加電刺激，即可測定對各種濃度受試化合物的縮短或收縮反應。在典型的條件下，正性變力性定義為由未知藥物引起的收縮力的增加，數(shù)據(jù)通常表示了引起收縮力從基線增加50％所需的藥物濃度(EC50)。
體內(nèi)正性變力性評價按兩種方法進行。第一種是和在體外方法中所述很相似的測定，即將一種測量器縫合到心臟外面以測定收縮力。第二種方案是將壓力傳感器插入左心室以檢測壓力變化。心肌收縮力與左心室內(nèi)壓力增長速率相關，表示為+dp/dt。這兩種情況下，按獲得一定水平的活性，如收縮力或+dp/dt增加30％，所需的藥物量(即ED30)報告數(shù)據(jù)，并表示為mg藥物/動物的kg體重。
藥物組合物本發(fā)明的新穎的含寡糖14-氨基甾類化合物可從各種途徑投予人或其他哺乳動物，包括但不限于口服劑型和注射(靜脈、肌肉、腹腔和皮下)。本領域技術人員利用如下所述賦形劑可容易地將本發(fā)明的新穎的含寡糖的14-氨基甾類化合物制成制劑?？紤]到病人易接受，通常最好的是口服劑型。
本說明書所用的術語“藥物組合物”指安全有效量的含寡糖的14-氨基甾類化合物活性成分或其混合物和藥學上可接受的賦形劑的組合。
本說明書所用的術語“安全有效量”指在正確的醫(yī)學判斷范圍內(nèi)，化合物或組合物的量大到足以顯著改善癥狀和/或治療的病情，但小到足以避免嚴重的副反應(合理的利益/危險比)。用于本發(fā)明方法的藥物組合物中所用的活性成分的安全有效量根據(jù)接受治療的特定病情，患者的年齡、生理狀況、病情的嚴重程度、療程、合并治療和種類、采用的特定活性成分、特定的藥學上可接受的賦形劑等因素，可在醫(yī)生的知識、技能的范圍內(nèi)進行變動。
本說明書所用的術語“藥學上可接受的賦形劑”包括本領域技術人員知道的任何生理學上惰性的、藥理學上無活性的物質(zhì)，它與選用的特定含寡糖的14-氨基甾類化合物的理化性質(zhì)相適合。藥學上可接受的賦形劑包括，但不限于，聚合物、樹脂、增塑劑、填充劑、粘合劑、潤滑劑、助流劑、崩解劑、溶劑、助溶劑、緩沖系統(tǒng)、表面活性劑、防腐劑、增甜劑、調(diào)味劑、藥品級染料或色素及粘滯劑。
本說明書所用的術語“口服劑型”指經(jīng)個體的口將所述組合物輸送到個體的胃腸道而全身給藥的任何藥物組合物。為本發(fā)明的目的，給藥形式可以是片劑，包衣或不包衣的；溶液劑；混懸劑；或膠囊，包衣或不包衣的。
本說明書所用的術語“注射劑”指為了用靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹腔內(nèi)或皮下注射將溶液劑或乳劑輸送到個體循環(huán)中而通過針刺所述個體的皮膚輸送含活性成分的溶液劑或乳劑，給人或其它哺乳動物全身給藥的任何藥物組合物。
本領域技術人員可通過控制以下任何一個或幾個因素，滿意地控制全身給藥的速率(a)活性成分本身；(b)藥學上可接受的賦形劑；只要其變異體不干擾選定的活性成分和活性；(c)賦形劑的類型；所述賦形劑所伴隨的合乎需要的厚度和滲透性(膨脹性)；(d)賦形劑本身和/或在賦形劑中時間依賴性的情況；(e)顆粒性活性成分的顆粒大??；(f)賦形劑的pH依賴性情況。
如上文所述，藥學上可接受的賦形劑包括，但不限于，樹脂、填充劑、粘合劑、潤滑劑、溶劑、助流劑、崩解劑、助溶劑、表面活性劑、防腐劑、增甜劑、調(diào)味劑、緩沖系統(tǒng)、藥品級染料或色素及粘滯劑。
較佳的溶劑為水。
此處有用的賦形劑中的調(diào)味劑包括Remington′s Pharmaceuti-cal Sciences，18th Edition，Mack Publishing Company，1990，pp.1288-1300中所述的那些，結合于本文中作為參考。此處適用的藥物組合物通常含0-2％調(diào)味劑。
此處有用的賦形劑中的染料或色素包括Handbook of Pharma-ceutical Excipients，pp.81-90，1986 by the American Pharma-ceutical Association & the Pharmaceutical Soeiety of Great Britain中所述的那些，結合于本文中作為參考。此處適用的藥物組合物通常含0-2％染料或色素。
較佳的助溶劑包括，但不限于，乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇。本發(fā)明的藥物組合物包括0-50％助溶劑。
較佳的緩沖系統(tǒng)包括，但不限于，乙酸、硼酸、碳酸、磷酸、琥珀酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、乙酸、苯甲酸、乳酸、甘油酸、葡糖酸、戊二酸和谷氨酸及它們的鈉、鉀和銨鹽。特佳的為磷酸、酒石酸、檸檬酸和乙酸及它們的鹽。本發(fā)明的藥物組合物通常包含0-5％緩沖系統(tǒng)。
較佳的表面活性劑包括，但不限于，聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯一烷基醚、蔗糖單酯和羊毛脂醇酯和醚類、硫酸烷酯鹽、脂肪酸鈉、鉀和銨鹽。本發(fā)明的藥物組合物包括0-2％表面活性劑。
較佳的防腐劑包括，但不限于，苯酚、對羥基苯甲酸烷酯、O-苯基苯酚、苯甲酸及其鹽、硼酸及其鹽、山梨酸及其鹽、氯代丁醇、芐醇、乙基汞硫代水楊酸鈉、乙酸苯汞和硝酸苯汞、硝甲酚汞、氯化烷基芐基二甲銨、氯化十六烷基吡啶鎓、羥苯甲酸甲酯和羥苯甲酸丙酯。特佳的是苯甲酸鹽、氯化十六烷基吡啶鎓、羥苯甲酸甲酯和羥苯甲酸丙酯。本發(fā)明的組合物一般包含0-2％防腐劑。
較佳的增甜劑包括，但不限于，蔗糖、葡萄糖、糖精、山梨醇、甘露醇和天冬酰苯丙氨酸甲酯。特佳的為蔗糖和糖精。本發(fā)明的藥物組合物包含0-5％增甜劑。
較佳的粘滯劑包括，但不限于，甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、藻酸鈉、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、金合歡、瓜耳膠、黃原膠和黃蓍膠。特佳的為甲基纖維素、卡波姆、黃原膠、瓜耳膠、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素鈉，以及硅酸鎂鋁。本發(fā)明的組合物包含0-5％粘滯劑。
較佳的填充劑包括，但不限于，乳糖、甘露糖、山梨糖、三價磷酸鈣、二價磷酸鈣、可壓縮糖、淀糖、硫酸鈣、右旋糖和微晶纖維素。本發(fā)明的組合物包含0-75％填充劑。
較佳的潤滑劑包括，但不限于，硬脂酸鎂、硬脂酸和滑石。本發(fā)明的藥物組合物包含0.5-2％潤滑劑。
較佳的助流劑包括，但不限于，滑石和膠體二氧化硅。本發(fā)明的組合物包含1-5％助流劑。
較佳的崩解劑包括，但不限于，淀粉、淀粉羥基乙酸鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮(Crospovidone)、交聯(lián)羧甲醚纖維素鈉(croscarmelosesodium)和微晶纖維素。本發(fā)明的藥物組合物包含4-15％崩解劑。
較佳的粘合劑包括，但不限于，金合歡、黃蓍膠、預膠凝淀粉、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素，糖溶液，如蔗糖和山梨醇，及乙基纖維素。本發(fā)明組合物包含1-10％粘合劑。
本發(fā)明化合物可構成本發(fā)明組合物重量的約0.1％至約99.9％，較佳的是本發(fā)明化合物構成本發(fā)明組合物重量的約20％至約80％。
本發(fā)明的藥物組合物包含15-95％含寡糖的14-氨基甾類化合物活性成分或其混合物；0-2％調(diào)味劑；0-50％助溶劑；0-5％緩沖系統(tǒng)；0-2％表面活性劑；0-2％防腐劑；0-5％增粘劑；0-5％粘滯劑；0-75％填充劑；0.5-2％潤滑劑；1-5％助流劑；4-155崩解劑和1-10％粘合劑。
此處描述的合適的藥物組合物。在本領域技術人員的能力之內(nèi)可改變此處描述的非限制性實施例以獲得寬范圍的藥物組合物。
與本發(fā)明的含寡糖的14-氨基甾類化合物的藥學上可接受的賦形劑的選擇基本上根據(jù)化合物給藥方式而定。如果化合物是注射的，則較佳藥物載體為滅菌生理鹽水，其pH已調(diào)節(jié)為約7.4。局部施用所用的藥學上可接受的載體包括適用于乳油、凝膠、膠帶等的載體。
本發(fā)明的含寡糖的14-氨基甾類化合物的較佳給藥方式為口服。因此，較佳單位劑量形式(劑型)為包含安全有效量的含寡糖的14-氨基甾類化合物的片劑、膠囊劑等。適于制備口服給藥劑型的藥學上可接受的載體在本領域是熟知的。它們的選擇依賴于第二考慮，如味道、成本和貨架穩(wěn)定性，它們對于本發(fā)明的目的來說不是很嚴格，本領域技術人員可并無困難地進行。
可以使用各種口服劑型，包括固體形式，如片劑、膠囊劑、顆粒劑和松粉劑。這些口服劑型包含安全有效量，較佳為0.25-5.0mg，含寡糖的14-氨基甾類化合物。更佳的是這些口服劑型包含0.5-1mg含寡糖的14-氨基甾類化合物。片劑可以壓制，片劑研制，包腸衣、包糖衣、薄膜包衣或多層包衣，含合適的粘合劑、潤滑劑、稀釋劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑、助流劑和熔融劑。液體口服劑型包括水溶液，乳劑，混懸液，從非泡騰顆粒重建的溶液和/或混懸液，及從含合適的溶劑、防腐劑、乳化劑、混懸劑、稀釋劑、增甜劑、熔融劑、著色劑和調(diào)味劑的泡騰顆粒重建的泡騰制劑。較佳的口服給藥用載體包括明膠、丙二醇、棉子油和芝麻油。
本發(fā)明的組合物也可局部給予受試者，即通過直接放在或涂布在受試者皮膚或上皮組織上而給藥。這樣的組合物包括，例如，洗液、乳油、溶液、凝膠和固體。這些局部用組合物包含安全有效量，較佳為約0.5-2.0mg含寡糖的14-氨基甾類化合物。這些組合物更佳地包含1.0mg含寡糖的14-氨基甾類化合物。局部給藥的合適載體較好為以連續(xù)薄膜保留在皮膚上，并能抵抗因出汗或浸水而脫落，一般而言，載體的本質(zhì)是有機物質(zhì)，其中能分散或溶解含寡糖的14-氨基甾類化合物。載體可包括藥學上可接受的潤滑劑、乳化劑、增稠劑和溶劑。
本發(fā)明的組合物還可經(jīng)吸入途徑給藥。這種組合物在包含溶劑(如水或1，2-乙二醇)、防腐劑(如羥苯甲酸甲酯或羥苯甲酸乙酯)和氣霧基質(zhì)(如氮氣或二氧化碳)的基質(zhì)中制成。
此外，本發(fā)明的組合物可經(jīng)硅氧烷彈性體、乙烯乙酸乙烯酯共聚物或乳酸-乙醇酸共聚物形成的皮下移植物給藥。
為了闡述如何制備含本發(fā)明的新穎化合物的藥物組合物，提供如下非限制性藥物組合物。
藥物組合物實施例實施例1含(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-N-甲基雄烷-17-甲酰胺的快釋口服劑型(片劑)具有如組成活性成分 量(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-1.0mg3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-N-甲基雄烷-17-甲酰胺賦形劑微晶纖維素28.5mg乳糖(水合)67.2mg交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮 3.0mg硬脂酸鎂 0.3mg
制備說明(供制10,000片)(1)在Patterson-Kelley(PK)或其他合適的混合器中，將10.0g藥物、285.0g微晶纖維素、672.0g乳糖和30.0g交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮混合，(2)在PK或合適的混合器中，將上述混合物與3.0g硬脂酸鎂混合，(3)將上述最終混合物在合適的壓片機上壓成100.0mg的片劑。
實施例2含(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-6-脫氧-2，3-O-(1-甲基亞乙基)-α-L-吡喃甘露糖基〕氧〕雄烷-17-羧酸甲酯適用于靜脈(i.v.)注射的非胃腸道劑型具有如下組成活性成分 量(3β，5β，14β，17β)-14-氨基- 1.0mg3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-6-脫氧-2，3-O-(1-甲基亞乙基)-α-L-吡喃甘露糖基〕氧〕雄烷-17-羧酸甲酯賦形劑甘露醇 200mg檸檬酸/檸檬酸鈉 足以使pH調(diào)節(jié)至5.5-6.5的量制備說明(供制1000管(瓶))(1)將1.0g藥物，200.0g甘露醇和足量檸檬酸鈉和檸檬酸溶于2200.0ml注射用滅菌去離子水，(2)上述溶液經(jīng)0.22μ滅菌濾膜過濾，(3)將上述滅菌溶液2.2ml注入I型玻璃管(瓶)，然后在合適的冷凍干燥器中冷卻干燥，(4)冷卻干燥后，用溴丁基或其它合適的塞子塞住管(瓶)并密封。臨用時用2.0ml滅菌注射用水重配凍干產(chǎn)品。
實施例3含(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-甲酰胺的緩釋口服劑型(片劑)具有如下組成活性成分 量(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-5.0mg3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-甲酰胺賦形劑羥丙基甲基纖維素 120.0mg乳糖(水合) 120.0mg硬脂酸鎂 12.0mg膠體二氧化硅 4.0mg
制備說明(供制10,000片)(1)在雙套Patterson-Kelley或合適的混合器中，緊密地混合50.0g藥物、1.2kg羥丙基甲基纖維素和1.2kg乳糖，(2)向上述混合物中加入120g硬脂酸鎂和40g膠體二氧化硅，在一混合器中將其輕輕混合，(3)在合適的壓片機上將上述混合物壓成重261.0mg的片劑。
其它實施例除了上述三個實施例外，將藥物活性成分配制成很多不同的劑型1)含溶劑(如水、乙二醇類)、防腐劑(羥基甲酸甲酯或丙酯)和氣霧劑基質(zhì)(氮氣、二氧化碳)或其它合適的賦形劑的藥物氣溶膠，2)含可可油或聚乙二醇的直腸栓劑，3)含硅氧烷彈性體、乙烯乙酸乙烯酯共聚物或乳酸-乙醇酸共聚物和水凝膠或其它合適的聚合物的皮下移植物，4)市售可移植裝置，5)借助或不借助離子電滲療法轉運藥物的在乙烯乙酸乙烯酯共聚物膜上或其它合適的成分上的含硅氧烷液的經(jīng)皮系統(tǒng)，6)含水膠體聚合物(羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮)和其它合適的聚合物的頰粘膜貼片。
治療方法本說明書所用的術語“充血性心力衰竭”(“CHF”)指一種進行性疾病，其血液動力學能力及心臟本身的結構完整進行性地、不可逆地遭致?lián)p害。CHF的進程按患者癥狀，根據(jù)紐約心臟協(xié)會(NYHA)的功能分類可分為四種。
紐約心臟協(xié)會功能分級分級I.患者有心臟病，但不導致對體力活動的限制。正常體力活動不引起過度疲勞、心悸、呼吸困難或心絞痛。
II.患者的心臟病導致體力活動輕度受限。休息時舒服，正常體力活動導致疲勞、心悸、呼吸困難或心絞痛。
III.患者的心臟病導致體力活動明顯受限。休息時舒服，低于正常的體力活動就引起疲勞、心悸、呼吸困難或心絞痛。
IV.患者的心臟病導致不能無不舒服地進行任何體力活動。即使休息時也存在心功能不全或心絞痛癥狀。進行任何體力活動時，不適加劇。
NYHA第III、IV類也被歸屬于明顯的充血性心力衰竭，常通過給予顯示正性變力性效應而增加心收縮力的化合物來進行治療。增加心收縮力的參比化合物為口服地高辛。通過給予強心藥增加CO以滿足機體代謝需要的明顯CHF的癥狀治療對CHF患者可改善其生命的質(zhì)量，因為心臟可較好地供應機體的代謝需要。但常識表明，強心藥(如洋地黃)可能增加死亡率，因為變力性作用對心臟來說產(chǎn)生了額外的工作負荷。此外，洋地黃的治療/毒性劑量比窄，在早于NYHA功能分類III類時使用洋地黃可能不是慎重的。
此外，聯(lián)吡啶強心藥米力農(nóng)已證明會加重室性心律不齊，可能增加死亡率。見DiBianco，R.，et al.“A Comparison of Oral Milri-none，Digoxinm，and Their Combination in the Treatment of Pa-tients with Chronic Heart Failure”，N.Engl.J.Med.320677(1989)。
本說明書所用的術語“血液動力學”指心臟的力學能力。心力衰竭的初始血液動力學意義是搏出量減少，這是每次心臟搏動射血量的量度。然后，心臟代償性增加CO以維持生命器官的血流。當心力衰竭加劇時，心臟內(nèi)灌注壓及肺和靜脈壓力升高。心臟日益不能提供所需的CO。
本說明書所用的術語“結構損害”指CHF患者心臟的微觀和宏觀的變化。在微觀水平，結構上出現(xiàn)如下變化心臟肥大早期的形態(tài)特征是肌原纖維體積增大，以及線粒體和核擴大。肌細胞大于正常細胞，但細胞組織大量保持。肥大再發(fā)展時，特殊細胞器如線粒體的大小或數(shù)目大大增加，以及細胞局部區(qū)域新的收縮單元不規(guī)則增加，導致細胞組織和外形微細的異常。鄰近細胞在其擴大程度上可有變化。
長期肥大的細胞在細胞組織上呈現(xiàn)更明顯的紊亂，例如顯著擴大的核和高度分成小葉的膜，它們?nèi)〈肃徑募≡w維，引起正常Z線記錄受損。早期線粒體的大量增加被肌原纖維體積優(yōu)勢所替代。肥大后期的特征是細胞死亡，失去收縮單元和明顯的Z線受損，肌節(jié)的正常平行排列嚴重破壞、T管膨脹及彎曲增加，收縮單元被纖維化組織替代。見Braunwald，Heart DiseaseA Textbook of Cardio-vascular Medicine，Vol.1(3rd ed.1988)。這些微觀的變化在宏觀上表現(xiàn)為心臟肥大或心臟擴大。在患者經(jīng)歷每一NYHA功能分類期過程中，由于產(chǎn)生收縮單元缺失和纖維沉積的微觀變化，肥大的心臟效能變小，患者的臨床癥狀惡化。
本發(fā)明的化合物增加心臟收縮力。劑量范圍由床位醫(yī)生根據(jù)給藥方式、CHF的嚴重程度和療程確定，可在0.001-5mg/kg/天之間。
為了闡述這些新穎的含寡糖的14-氨基甾類化合物對于治療CHF的特殊應用，給出下面的非限制性臨床實例。
臨床實例實例1一65歲肥胖白人女性患者，有20年非胰島素依賴性糖尿病和高血壓史，兩年前心肌梗塞。在急性低位心肌梗塞癥狀發(fā)生12小時后收入冠狀監(jiān)護單元。在其住院過程中并發(fā)急性肺水腫，癥狀為休息時嚴重呼吸困難、端坐呼吸、頸靜脈擴張、雙側羅音至肩胛中部；在CXR上見心臟擴大和雙側浸潤。其肺毛細管楔壓為35mmHg。用嗎啡、氧氣、靜脈內(nèi)硝酸甘油、環(huán)狀利尿劑治療，及0.25g(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-N-甲基雄烷-17-甲酰胺每4小時靜脈給藥一次，共三天，然后口服0.25mg(3β，5β，14β，17β)-1 4-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-N-甲基雄烷-17-甲酰胺，每天一次。用這種療法，她的病情改善，10天后出院，在輕度用力時有呼吸困難(輕度充血性心力衰竭，NYHA II級)，作為門診病人，服用利尿劑、ACE抑制劑、硝酸甘油，及每天口服0.25mg(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-N-甲基雄烷-17-甲酰胺。
實例2一44歲黑人男性患者，有長時間未控制的高血壓史和一年中度(NYHA III級)充血壓心力衰竭史，前兩周中數(shù)次發(fā)作暈厥前兆。穿衣時也有疲勞和呼吸困難。藥物包括地高辛(0.25mg/天)、lasix和ACE抑制劑。他有S3奔馬律，踝部凹陷性水腫、左心室肥大，ECG上偶見PVCs。在Holter監(jiān)測上顯示頻繁的多位點室性異位節(jié)律和非持續(xù)性的一系列室性心動過速，用放射性核素心室造影術測得射血分數(shù)為30％，血清地高辛水平為2.2ng/ml。猜測心律失常和暈厥前兆是洋地黃毒性的結果，故停藥。每天以口服劑量0.25mg投予(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-6-脫氧-2，3-O-(1-甲基亞乙基)-α-L-吡喃甘露糖基〕氧〕雄烷-17-羧酸甲酯。因為疲勞和呼吸困難持續(xù)，故在以后6周中劑量增至每天1mg，不再有暈厥前兆發(fā)生，重復Holter，PVs減少，未見非持續(xù)性室性心動過速，射血分數(shù)增至38％。其自我護理活動如穿衣時的呼吸困難不再出現(xiàn)，能在自己的花園中工作僅偶見輕度呼吸困難(NYHA II級)。一年隨訪，其病情無變化。
實例3一24歲以往健康的華人女性患者，有兩個月用力時呼吸困難史。無心臟病家史；不吸煙，不飲酒。除了心動過速和最大沖動點側移外，體力測驗正常。ECG上見心率為105和非特異性T波低平，CXR顯示心臟擴大。心電圖顯示兩心室擴大，總的運動機能減退，射血分數(shù)為40％。瓣膜正常。癥狀限制性踏旋器運動試驗顯示無心肌缺血證據(jù)。作出自發(fā)性擴張性心肌病，NYHA I級，的診斷。起初用ACE抑制劑治療，產(chǎn)生不可耐受性咳嗽，故停藥。以后一個月內(nèi)以1mg劑量，每天兩次口服給予(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-甲酰胺，耐運動試驗能力改善。射血分數(shù)(根據(jù)ECG)也增至55％，在踏旋器運動試驗中運動時間增加200秒。
實例4一55歲的白人男性患者，既往有兩次心肌梗塞史，其父50歲時猝死，該患者用硝酸異山梨酯和β-阻斷劑維持治療兩年，仍有穩(wěn)定的用力時心絞痛。然而，前一個月，在步行一段樓梯時發(fā)生呼吸困難，晚上踝部腫脹，偶有突發(fā)性夜間呼吸困難。
心率90，踝部凹陷性水腫+，S3奔馬律，心臟擴大和CXR見Kerly B線。診斷為因缺血性心臟病所致輕度(NYHA II級)充血性心力衰竭。通過逐漸減量而停用β-阻斷劑，加用ACE抑制劑和利尿劑，但用此新方案，充血性心力衰竭加劇。以4mg劑量，每天一次，給予(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-羧酸甲酯。呼吸困難和水腫消失(NYHA I級)，心率降低為75，S3消失，心臟大小減小，CXR充血消失。1個月后進行的踏旋器運動試驗，運動時間增加170秒。以后兩年內(nèi)未見進一步惡化。
實例5一60歲黑人女性患者，有三次心肌梗塞史，導致嚴重的(NY-HA IV級)充血性心力衰竭，在前六周內(nèi)入院四次，用最大耐受量(asix、硝酸異山梨酯、地高辛和ACE抑制劑對代償失調(diào)作治療。其癥狀包括水腫、休息時呼吸困難、需墊三個枕頭的端坐呼吸、明顯的疲勞和精神紊亂。決定停用地高辛，用(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-羧酸甲酯進行治療。(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-羧酸甲酯的起始劑量為0.5mg，一天一次，口服給藥，但經(jīng)2個月時間遞增至2mg，一天三次，以充分地控制癥狀。2個月末時，她的端坐呼吸、紊亂和水腫消失，進行日常生活的能力改善，例如自己穿衣而無呼吸困難(NYHA III級，中度充血性心力衰竭)。其射血分數(shù)也從20％改善為35％。在以后的三個月內(nèi)保持穩(wěn)定。
實例6一個最近(2個月)飲酒節(jié)制的60歲白人男性嗜酒者，有30年吸煙史，入院時有三個月進行性運動時用力呼吸困難加重、疲勞、端坐呼吸、水腫和突發(fā)性夜間呼吸困難，刷牙時有呼吸困難。體檢結果為惡病質(zhì)男性，有中度痛苦狀，呼吸頻率30次/分，心率110bpm，血壓90/50，S3奔馬律，膝部凹陷性水腫++，頸靜脈擴張，肝大，腹水，雙側基底部羅音，及心臟擴大。廣泛的評價提供如下診斷慢性酒精中毒性肝炎、慢性阻塞性肺部疾患和因中毒(酒精)性心肌病所致中度(NYHA III級)充血性心力衰竭。開始用氫氯噻嗪、ACE抑制劑和14β-氨基-3β-〔α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯(每天口服劑量0.25mg)進行治療?；颊甙Y狀迅速改善，一周后出院。體重減輕20磅后，他能走到郵筒處，僅輕度呼吸困難(NYHA II級)。呼吸頻率20，心率90，不再聽到S3，水腫和羅音消失。肝大保持不變，但腹水略有減少。射血分數(shù)從32％增至45％，心臟大小減小。
實例7一70歲慣于久坐的白人女性患者，在選擇性白內(nèi)障手術前進行的OXR上發(fā)現(xiàn)心臟擴大?；颊叻裾J任何胸痛、呼吸困難史或任何高血壓、糖尿病或心臟疾病史。其ECG顯示非特異性ST-T波改變，標準臨床實驗室評價為正常。因疲勞而終止踏旋器運動試驗，無冠狀動脈疾病的證據(jù)。ECG顯示兩心室擴大，瓣膜正常，射血分數(shù)為30％。給予患者每天口服0.25mg14β-氨基-3β-〔α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯的預防性療程，其射血分數(shù)增至40％。在五年后進行第二次白內(nèi)障手術住院時患者無癥狀。
權利要求
1.如下通式所示的含寡糖的14-氨基甾類化合物及其藥學上可接受的酸式鹽或酯 其中a)R1為(i)COOR5，其中R5為H；C1-6烷基；氨基取代的C1-6低級烷基；芳烷基或雜芳基烷基或碳環(huán)；以C1-6低級烷基為佳；或(ii)CHR6OH，其中R6為氫原子或C1-6低級烷基；或(iii)COR，其中R為H；C1-6低級烷基；氨基取代的C1-6低級烷基；氨基或二烷氨基；b)R2為-NR7R8，其中R7和R8可相同或不同，為氫原子或C1-6低級烷基c)R3為(i)具有如下結構的寡糖殘基 其中R9為H、甲基、羥基、羰基、乙酸基、芳烷氧基、雜芳基烷氧基或苯甲酸基；R10為H、甲基、羧基、乙酸基、芳烷氧基、雜芳基烷氧基、苯甲酸基或羥基；R11為O，當R11為末端單糖殘基上的取代基時，則為OH、甲基、乙酸基、雜芳基烷氧基、芳烷氧基，R12為H、甲基、甲基羥基甲基或乙酸基甲基；或(ii)具有如下結構的單糖殘基 其中R14和R15可相同或不同，為H、C1-6低級烷基、芳烷基、雜芳基烷基、雜芳基或芳基；R17可為H、羥基、乙酸基或苯甲酸基；R18和R19為羥基、乙酸基或苯甲酸基；或(iii)具有如下結構的寡糖殘基 其中R14或R15可相同或不同，為H、C1-6低級烷基、雜芳基烷基、芳烷基或芳基；R14a為O，當R14a為末端單糖殘基上的取代基時，則為羥基、甲基、乙酸基、芳烷氧基或雜芳基烷氧基；d)R4為(i)OH，或(ii)H，或(iii)OR13，其中R13為單糖殘基、乙酸基、苯甲酸基、芳烷基或雜芳基烷基e)Z為(i)-CH-，其中a和b為單鍵，或(ii)＝C，其中a和b為雙鍵。
2.按權利要求1所述的化合物，其中R1為COOR5，而R5為C1-6低級烷基；R2為氨基；R3為寡糖殘基 其中R9為氫、甲基、羥基、羧基、乙酸基、雜芳烷氧基、芳烷氧基或苯甲酸基；R10為羥基、甲基、羧基、乙酸基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、苯甲酸基或羥基；R11為氧；當R11為末端單糖糖基上的取代基時，則為OH、甲基、乙酸基、芳烷氧基；R12為氫、甲基、甲基羥基甲基或乙酸基甲基。
3.按上述權利要求之一所述的化合物，其中R1為COOR5，而R5為C1-6低級烷基；R2為NH2；R3為寡糖殘基 其中R14和R15可相同或不同，為H、C1-6低級烷基、芳烷基、雜芳基烷基、雜芳基或芳基；R17可為H、羥基、乙酸基或苯甲酸基；R18和R19為羥基、乙酸基或苯甲酸基。
4.按上述權利要求之一所述的化合物，其中R1為COOR5，而R5為C1-6低級烷基；R2為NH2；R3為寡糖殘基 其中R14和R15可相同或不同，為H、C1-6低級烷基、芳烷基或芳基；R14a為O，當R14a為末端單糖殘基上的取代基時，則為羥基、甲基、乙酸基、芳烷氧基或雜芳基烷氧基。
5.按上述權利要求之一所述的化合物，其中R1為COR，而R為甲氨基、氨基或二烷氨基。
6.按上述權利要求之一所述的化合物，它們選自如下化合物組成的組(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕-N-甲基雄烷-17-甲酰胺；(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-6-脫氧-2，3-O-(1-甲基亞乙基)-α-L-吡喃甘露糖基〕氧〕雄烷-17-羧酸甲酯；(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-甲酰胺；(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-羧酸甲酯；(3β，5β，14β，17β)-14-氨基-3-〔(O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-O-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基-(1→4)-2，6-二脫氧-β-D-核糖-己吡喃糖基)氧〕雄烷-17-羧酸甲酯；14β-氨基-3β-〔α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯；14β-氨基-3β-〔α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯；14β-氨基-3β-〔2″，3″-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯；14β-氨基-3β-〔2″，3″，4″-三-O-乙?；?α-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯；14β-氨基-3β-〔4″-O-乙?；?2″，3″-O-亞異丙基-β-(L)-鼠李吡喃糖基氧-(1→4)-2′，3′-O-亞異丙基-α-(L)-鼠李吡喃糖基氧〕-5β-雄烷-17β-羧酸甲酯。
7.一種藥物組合物，由安全有效量15-95％上述權利要求之一化合物或其混合物和5-85％藥學上可接受的賦形劑組成，其中所述藥學上可接受的賦形劑選自聚合物、樹脂、增塑劑、填充物、粘合劑、潤滑劑、助流劑、崩解劑、溶劑、助溶劑、緩沖系統(tǒng)、表面活性劑、防腐劑、增甜劑、調(diào)味劑、藥品級染料或色素，及粘性劑。
8.按權利要求7所述的藥物組合物，由如下成分組成15-95％上述權利要求之一化合物或其混合物；0-2％調(diào)味劑；0-50％助溶劑；0-5％緩沖系統(tǒng)；0-2％表面活性劑；0-2％防腐劑；0-5％增甜劑；0-5％粘性劑；0-75％填充物；0.5-2％潤滑劑；1-5％助流劑；4-15％崩解劑；及1-10％粘合劑。
9.治療患充血性心力衰竭的人或其它哺乳動物的方法，其特征在于對所述人或其它哺乳動物投以含上述任一權利要求所述化合物或其混合物的安全有效量的權利要求7和8藥物組合物。
10.在甾核14位上引入氨基的方法。其特征在于；其中所述氨基通過包括如下步驟的碘代異氰酸鹽加成反應非對映選擇性地引到甾核14位上a)將異氰酸鹽加成到甾核14-15位雙鍵上，較佳為用氰酸銀和碘完成所述脫鹵反應；b)脫鹵，較佳為用烷基錫氫化物和自由基引發(fā)劑完成脫鹵反應，烷基錫氫化物以三正丁基錫為佳，自由基引發(fā)劑以過氧化苯甲酰為佳；c)甾核14位上異氰酸根轉化為氨基，較佳為經(jīng)水解，最佳為加入鹽酸或碳酸鉀。
11.含權利要求1所述含寡糖的14-氨基甾類化合物的制備方法，其特征在于其中所述氨基通過包括如下步驟的碘代異氰酸鹽加成反應非對映選擇性地引到甾核14位上a)將異氰酸鹽加成到甾核14-15位雙鍵上；b)脫鹵；c)甾核14位上異氰酸根轉化為氨基。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(I)所示的含寡糖的14-氨基甾類化合物及其藥學上可接受的酸式鹽或酯，其中a)R
文檔編號A61P9/00GK1135758SQ94194217
公開日1996年11月13日 申請日期1994年9月23日 優(yōu)先權日1993年9月24日
發(fā)明者P·M·戴巴斯, R·N·約翰遜, R·S·穆特, S·劉, D·E·波特洛克 申請人:普羅克特和甘保爾公司