專利名稱：光果翠雀植物在制備鎮(zhèn)痛、止血、抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種天然植物的開發(fā)與應(yīng)用，尤其涉及一種以毛茛科翠雀屬植物光果翠雀(Delphinium grandiflorum L.var.1eiocarpum W.T.Wang)全草(包括地上部分和根)或其提取物為原料在制備鎮(zhèn)痛、止血和抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
翠雀屬Delphinium L.是毛茛科的重要屬之一，全世界約300種以上，分屬于3個亞屬，廣布于北溫帶，我國約113種，除臺灣、海南島外。各省區(qū)均有分布，尤以云南北部、四川西部和西藏東部的高山地帶為多見。
光果翠雀(Delphinium grandiflorum L.var.leiocarpum W.T.Wang)由于其分布范圍較窄，在醫(yī)藥中很少得以應(yīng)用，目前尚未見國內(nèi)外有關(guān)文獻和專利報道。我們結(jié)合多年中醫(yī)藥臨床實踐發(fā)現(xiàn)光果翠雀是一味具有多方面治療作用的天然藥物。多年的臨床應(yīng)用表明該藥在鎮(zhèn)痛、止血和抗腫瘤等方面的作用尤為突出。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了提供毛茛科翠雀屬植物光果翠雀(Delphiniumgrandiflorum L.var.leiocarpum W.T.Wang)全草的醫(yī)藥用途，尤其是其在制備鎮(zhèn)痛、止血和抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明毛茛科翠雀屬植物光果翠雀的鎮(zhèn)痛、止血和抗腫瘤作用的藥理活性可以從以下實驗中體現(xiàn)一、光果翠雀的鎮(zhèn)痛作用1、實驗?zāi)康膽?yīng)用小鼠熱板法和醋酸扭體法研究光果翠雀的鎮(zhèn)痛作用。
2、實驗條件三級動物實驗室，室溫20～25℃，空調(diào)恒溫。
3、實驗對象動物BalB/C小鼠80只，體重20±2g，由蘭州生物制品研究所提供。
4、藥材與儀器光果翠雀水提取物由實驗室自制，撲熱息痛(西北制藥廠，20020709)。
5、實驗方法5.1、熱板法研究光果翠雀鎮(zhèn)痛活性健康小白鼠40只，雌性，體重19±2g，熱板法(55℃)測定痛閾值2次，挑選平均痛閾值不超過30秒者為試驗對象。動物隨機分為4組，每組10只，分別設(shè)為(1)生理鹽水組、(2)撲熱息痛組(0.2g/kg)、(3)光果翠雀水提取物高劑量組(相當于原植物0.5g/kg)、(4)光果翠雀水提取物低劑量組(相當于原植物0.125g/kg)，分別腹腔注射給藥0.5小時、1小時后用熱板法(55℃)測定痛閾值，結(jié)果如表15.2醋酸扭體法研究光果翠雀鎮(zhèn)痛活性健康小白鼠40只，雌性，體重19±2g，每組10只，雌雄各半，腹腔注射給藥，每10g體重0.2ml。分別設(shè)為(1)生理鹽水組、(2)撲熱息痛組(0.2g/kg)、(3)光果翠雀水提取物高劑量組(相當于原植物0.5g/kg)、(4)光果翠雀水提取物低劑量組(相當于原植物0.125g/kg)，給藥后30min，腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，觀察20分鐘內(nèi)各組動物由醋酸引起的扭體次數(shù)。結(jié)果如表26.鎮(zhèn)痛實驗結(jié)果表1口服光果翠雀對小鼠痛閾值的影響

*P＜0.05與給藥前比較表1結(jié)果表明光果翠雀水提取物0.5g/kg、0.25g/kg腹腔給藥對小鼠具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。
表2口服光果翠雀對小鼠醋酸引起的扭體次數(shù)影響

**P＜0.05與給藥前比較表2結(jié)果表明撲熱息痛組、光果翠雀水提取物高、低劑量組與空白對照組比較均能明顯的抑制醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)(P＜0.01)；光果翠雀水提取物高劑量組與撲熱息痛組比，鎮(zhèn)痛效果更佳。光果翠雀水提取物有明顯的止痛作用。
二、光果翠雀的止血作用1、實驗?zāi)康膽?yīng)用兔耳中動脈創(chuàng)傷出血法研究光果翠雀的止血作用。
2、實驗條件三級動物實驗室，室溫20～25℃，空調(diào)恒溫。
3、實驗對象新西蘭大白兔7只，體重2.5±0.2kg，由蘭州生物制品研究所提供。
4、藥材與儀器光果翠雀根粉由實驗室自制，云南白藥(云南白藥集團股份有限公司，批號20030803)。
5、實驗方法與結(jié)果新西蘭白兔7只，每只戊巴比妥鈉(30mg/kg，iv)麻醉后，于耳中動脈較粗分枝距離分叉約3cm處切斷動脈血管，血液流出后立即外敷0.5g光果翠雀并施以200g壓力，每30秒觀察一次，除去壓力120秒鐘不出血即為止血。以云南白藥在另一只耳上以同樣的方法做陽性對照。結(jié)果見表3表3光果翠雀對兔耳中動脈創(chuàng)傷出血時間的影響

實驗結(jié)果表明光果翠雀局部外用對由于創(chuàng)傷所導(dǎo)致的動脈出血具有良好的止血作用，其止血效果與云南白藥基本相當。
三、光果翠雀的抗腫瘤活性1、實驗?zāi)康膽?yīng)用體外細胞培養(yǎng)MTT法和體內(nèi)接種法測定光果翠雀體外、體內(nèi)抗腫瘤活性。
2、實驗條件三級動物實驗室，室溫20～25℃，空調(diào)恒溫。
3、實驗對象人胃癌細胞SGC-7901、人肝癌細胞BEL-7402、人白血病細胞HL-60和H22腹水瘤細胞均引自中國科學(xué)院上海細胞生物研究所的細胞庫。BalB/C小鼠50只，體重20±2g，由蘭州軍區(qū)總醫(yī)院動物實驗科提供，合格證號甘肅省醫(yī)動字第1402-0201號4、藥材與儀器光果翠雀乙醇提取物由實驗室自制，注射用環(huán)磷酰胺(上海華聯(lián)制藥有限公司，批號030306)5、實驗方法5.1 MTT比色法測定光果翠雀體外抗腫瘤活性準確稱取光果翠雀乙醇提取物25.0mg后，加入1m1DMSO溶液充分溶解，試樣原初濃度為25.0mg/ml，用DMSO按倍比稀釋制備5個濃度25.0mg/ml，12.5mg/ml，6.25mg/ml，3.13mg/ml和1.56mg/ml。將生長旺盛的SGC-7901和BEL-7402細胞用0.25％胰蛋白酶消化后，懸浮于含10％小牛血清RMPI-1640培養(yǎng)液中，HL-60細胞直接加入含10％小牛血清RMPI-1640培養(yǎng)液，用玻璃吸管輕輕吹打成單細胞懸液；取少許懸液加0.4％臺盼藍染液染色，顯微鏡下計數(shù)活細胞，調(diào)整細胞濃度為2×105個/ml；取96孔細胞培養(yǎng)板，每孔加入調(diào)好的細胞懸液195μl，置于37℃，5％CO2相對濕度100％培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h后，加入測試藥液5μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)44h后每孔加10μl，5mg/ml MTT溶液(用生理鹽水配制)，在培養(yǎng)箱中溫育4h；完成后，HL-60細胞需2000rpm離心10min，然后仔細吸取上清，每孔加入200μl DMSO，于微量振蕩器振蕩以使甲瓚完全溶解，最后用酶標儀在570nm波長處測OD值。細胞增殖抑制率Ir(％)＝(OD對照-OD藥物)/OD對照×100，劑量對數(shù)線性回歸法計算IC50值。
5.2光果翠雀乙醇提取物體內(nèi)抗腫瘤活性研究取體重22g～28g的Balb/c♂小鼠50只，于左側(cè)腋窩下接種制備好的瘤液0.2ml/只。接種前應(yīng)用碘酒、酒精消毒接種部位的皮膚，然后將動物按體重隨機分成5組并給藥給予光果翠雀乙醇提取物組(400，200，100mg/kg)，陽性對照組給予環(huán)磷酰胺(20mg/kg)，空白組給予生理鹽水。腹腔注射給藥，給藥量為0.2ml/20g體重，每日一次，連續(xù)給藥7天。停藥后1天處死動物，記錄每只鼠接種、處死時的體重，剝離瘤體、脾臟，分別稱重，求出抑瘤率、脾指數(shù)并進行t檢驗。結(jié)果見表1、2、3。
6實驗結(jié)果線性回歸法計算光果翠雀乙醇提取物對不同腫瘤細胞的IC50值，分別為78.25μg/ml(SGC-7901)，113.25μg/ml(BEL-7402)，121.00μg/ml(HL-60)，均與環(huán)磷酰胺的活性相當，說明光果翠雀乙醇提取物具有明顯的體外抗腫瘤活性。
表2光果翠雀乙醇提取物體外抑制腫瘤細胞生長IC50(μg/ml)值

光果翠雀乙醇提取物腹腔注射給藥7天后，能顯著提高鼠的脾臟指數(shù)，抑制H22腫瘤細胞的生長，高劑量組(400mg/kg)與環(huán)磷酰胺組(20mg/kg)的活性相當。結(jié)果見表表1光果翠雀乙醇提取物腹腔注射給藥對小鼠H22腫瘤細胞的抑瘤率及脾指數(shù)

×與空白對照組比較P＜0.05，××與空白對照組比較P＜0.01；△與環(huán)磷酰胺組比較P＜0.05，△△與環(huán)磷酰胺組比較P＜0.01本發(fā)明可以毛茛科翠雀屬植物光果翠雀全草或其提取物為原料制成單方或復(fù)方藥物。
本發(fā)明可將毛茛科翠雀屬植物光果翠雀全草或其提取物，配以藥用鋪料，按制劑學(xué)常規(guī)方法制備成藥劑學(xué)上的任何一種劑型。
具體實施例方式
實施例一光果翠雀鎮(zhèn)痛、止血散的制備選取光果翠雀植物的根，洗凈、干燥后，將其超微粉碎，使其粒度達300目，輻照滅菌，分包裝、密閉保存即得。
實施例二光果翠雀鎮(zhèn)痛、止血、抑瘤片的制備將光果翠雀全草，用75％乙醇提取后，加入藥用淀粉，滑石粉等常用藥劑輔料，按常規(guī)方法壓片得光果翠雀片，用于鎮(zhèn)痛、止血、消化道，婦科等腫瘤的治療。
實施例三光果翠雀鎮(zhèn)痛、止血噴霧劑的制備將光果翠雀全草，用75％乙醇提取物后，按噴霧劑制備方法制備用于創(chuàng)傷后鎮(zhèn)痛、止血治療的噴霧劑。
實施例四光果翠雀止痛搽劑的制備將光果翠雀提取物，溶于50％乙醇溶液，配成10g原藥材/100ml的搽劑，用于跌打損傷、扭挫傷等的局部鎮(zhèn)痛治療。
實施例五光果翠雀鎮(zhèn)痛、止血抗腫瘤滴丸劑的制備
光果翠雀提取物，加入PEG等作為賦型劑，按滴丸劑制備方法制備用于創(chuàng)傷后鎮(zhèn)痛、止血和各種腫瘤治療的滴丸劑。
實施例六光果翠雀復(fù)方鎮(zhèn)痛、止血散的制備取光果翠雀植物根細粉(300目)，加入獨一味，大黃等細粉，過篩，輻照滅菌，分包裝、密閉保存即得。
實施例七光果翠雀活血止痛酊的制備將光果翠雀提取物，和當歸、丹參、白芷等提取物，溶于50％乙醇溶液，配成10g原藥材/100ml的酊劑，用于跌打損傷、扭挫傷等的局部活血、鎮(zhèn)痛治療。
權(quán)利要求
1.毛茛科翠雀屬植物光果翠雀在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的毛茛科翠雀屬植物光果翠雀在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用，其特征在于以毛茛科翠雀屬植物光果翠雀全草或其提取物為原料制成單方或復(fù)方藥物。
3.如權(quán)利要求1或2所述的毛茛科翠雀屬植物光果翠雀在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用，其特征在于是將毛茛科翠雀屬植物光果翠雀全草或其提取物，配以藥用鋪料應(yīng)用制劑學(xué)方法制備成藥劑學(xué)上的任何一種劑型。
4.毛茛科翠雀屬植物光果翠雀在制備止血藥物中的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求4所述的毛茛科翠雀屬植物光果翠雀在制備止血藥物中的應(yīng)用，其特征在于以毛茛科翠雀屬植物光果翠雀全草或其提取物為原料制成單方或復(fù)方藥物。
6.如權(quán)利要求4所述的毛茛科翠雀屬植物光果翠雀在制備止血藥物中的應(yīng)用，其特征在于是將毛茛科翠雀屬植物光果翠雀全草或其提取物，配以藥用鋪料應(yīng)用制劑學(xué)方法制備成藥劑學(xué)上的任何一種劑型。
7.毛茛科翠雀屬植物光果翠雀在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求7所述的毛茛科翠雀屬植物光果翠雀在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于以毛茛科翠雀屬植物光果翠雀全草或其提取物為原料制成單方或復(fù)方藥物。
9.如權(quán)利要求7所述的毛茛科翠雀屬植物光果翠雀在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于是將毛茛科翠雀屬植物光果翠雀全草或其提取物，配以藥用鋪料應(yīng)用制劑學(xué)方法制備成藥劑學(xué)上的任何一種劑型。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種新的藥用植物，即毛茛科翠雀屬植物光果翠雀(Delph－inium grandiflorum L.var.leiocarpum W.T.Wang)全草的醫(yī)藥用途，尤其是其在制備鎮(zhèn)痛、止血及抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。實驗證明毛茛科翠雀屬植物光果翠雀的鎮(zhèn)痛效果比撲熱息痛更佳；其止血效果與云南白藥基本相當，同時具有明顯的抗腫瘤活性，未見其它毒副作用。
文檔編號A61P7/00GK1813884SQ20051009647
公開日2006年8月9日 申請日期2005年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月29日
發(fā)明者喬生潤, 賈正平, 盛杰, 費改順, 李茂星, 喬樹洲 申請人:喬生潤, 賈正平