專利名稱：雙歧三聯(lián)活菌制劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬微生物產(chǎn)品，具體涉及一種雙歧三聯(lián)活菌制劑及制備方法。
雙歧桿菌、乳酸桿菌及糞鏈球菌是人和動物體內(nèi)常見的正常菌群重要成員，集中粘附在下腸道粘膜，對機(jī)體發(fā)揮有益作用，能抑制外籍病原菌的入侵，其代謝產(chǎn)物提供宿主必需的維生素，參與和協(xié)助營養(yǎng)的消化和吸收。激發(fā)機(jī)體的免疫功能，減少腸源性毒性的吸收。由于消化系統(tǒng)疾病或大量使用抗生素及隨著年齡的增長，體內(nèi)雙歧桿菌逐漸減少。為保持上述有益菌的正常水平，人們開始研究含有這些有益菌的制劑。如中國專利CN1103584報道的三株口服液及其制法，其含有雙歧桿菌、嗜酸乳酸桿菌和糞鏈球菌。但該口服液穩(wěn)定性差，菌的存活率低，不宜長期保存。
本發(fā)明的目的在于克服上述口服液的缺點(diǎn)，設(shè)計一種穩(wěn)定性好、使用方便、菌的存活率高的三菌聯(lián)合制品本發(fā)明提供了一種雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)，該制劑是由兩歧雙歧桿菌(6-1)、乳酸桿菌和糞鏈球菌冷凍干燥活菌粉作為活性成份與保護(hù)劑組成的，并且可以按含活性成份為0.01～99.99％與含保護(hù)劑為99.99～0.01％的任意配比組成100％的組成，其中兩歧雙歧桿菌(6-1)與乳酸桿菌和糞鏈球菌可以按1～5∶1～5∶1～5的任意比例組成活性成份，保護(hù)劑可以為含脫脂奶粉10-20％、異乳糖10-20％、維生素C-鈉0.01-0.2％、谷氨酸鈉0.01-2％、維生素E0.01-2％、β-環(huán)糊精6-20％、淀粉6-20％的任意比例組成保護(hù)劑。
本發(fā)明的菌種來源及其生物學(xué)特征如下菌種來源及其生物學(xué)特征1、菌種來源(1)兩歧雙歧桿菌(6-1)，由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院流行病學(xué)微生物學(xué)研究所分離、贈予。
選取健康兒童(1-5歲)的新鮮糞便0.5克，置4.5毫升PBS稀釋液中混勻，并做10倍系列稀釋，取合適濃度涂BL平板，37℃厭氧培養(yǎng)72小時。在BL平板上長出的雙歧桿菌，菌落呈圓形，稍突出，個別中凹，顏色多呈褐色，咖啡色灰白色或乳白色，不透明，有光滑或粗糙型，直徑約0.5-2.0毫米。挑取典型菌落純培養(yǎng)并做需氧試驗(yàn)，在眾多的典型菌落中，選到了雙歧桿菌6-1株。經(jīng)鏡檢，生理生化反應(yīng)并結(jié)合代謝物的分析，鑒定為兩歧雙歧桿菌(6-1)(B.bifidum6-1株)。結(jié)果見表一，鑒定結(jié)果符合BuchananBL et al(1977):Bergeys Mannual of Determimative Bacteriology 8th ed書中有關(guān)Bifidobacterium bifidum的描述。
表一兩歧雙歧桿菌與兩歧雙歧桿菌(6-1)菌種的理化特征比較表
(2)嗜酸乳酸桿菌和糞鏈球菌的來源嗜酸乳酸桿菌(L.acidophilus YIT2004)和糞鏈球菌(Strep.faecalis YIT 0027)皆由日本歧阜藥科大學(xué)贈。
2、生物學(xué)特征(1)培養(yǎng)特征及菌體形態(tài)A兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)(6-1)株，在厭氧或微氧條件下生長，最適生長溫度37～38℃，PH6.5-7.4。在BL平板上厭氧或微氧培養(yǎng)72小時的菌落呈圓形，凸起、乳白色、光滑、有粘性、大小不一。
革蘭氏染色陽性，著色不均勻，無芽胞、無莢膜、無鞭毛，菌體呈直形或彎曲狀，可出現(xiàn)“Y”或“V”型的分叉狀，棒狀等多形態(tài)。
B嗜酸乳酸桿菌Lactobacillus acidophilus YIT2004，為兼性厭氧菌，最適生長溫度37～40℃，在45℃條件下能生長，最適PH5.5-6.5。在BL平板上需氧培養(yǎng)48小時的菌落呈圓形，隆起、乳白色、光滑，直徑約1毫米。
革蘭氏染色陽性，無芽胞、無莢膜、無鞭毛、兩端鈍圓的短桿或球桿狀，單個或成雙排列。
C糞鏈球菌Streptococcus Faecalis YIT 0027，為兼性厭氧菌，最適生長溫度37-40℃，在45℃條件下能良好生長，最適PH6.5-7.6，在BL平板上需氧培養(yǎng)24小時的菌落呈圓形、凸起?；野咨?、光滑。
革蘭氏染色陽性，無芽胞、無莢膜、無鞭毛、卵圓形，多成雙排列，亦成短鏈。
本發(fā)明的雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果如下表2培菲康膠囊留樣測定結(jié)果
結(jié)論培菲康在出廠時其總活菌數(shù)為1.9～6.5億CFU/g。置冰箱中保存一年，其總活菌數(shù)可達(dá)670萬～3000萬CFU/g。
表3雙歧桿菌凍干粉穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(貯藏溫度2-8℃)
表4乳酸桿菌凍干粉穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(貯藏溫度2-8℃)
<p>表5糞鏈球菌凍干粉穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(貯藏溫度2-8℃)
本發(fā)明的雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)的一般藥理學(xué)研究試驗(yàn)結(jié)果如下一、材料及方法動物狗三條，分別為10kg、12kg、12kg。編號為1#、2#、3#。藥物培菲康膠囊(每粒含210mg菌粉，內(nèi)含兩歧雙歧桿菌(6-1)4×106CFU、嗜酸乳酸桿菌4×106CFU、糞鏈球菌2×107CFU)。給藥途徑口服三天觀察三天后急性給藥一次觀察。藥物劑量1#，210mg×50(為人劑量的50倍)；210mg×24(為人劑量的20倍)；3#，210mg×12(為人劑量的10倍)。三、結(jié)論三只狗口服培菲康膠囊(大、中、小劑量)后對神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)及呼吸頻率和深度均未出現(xiàn)異常變化。
本發(fā)明的雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)的藥效學(xué)研究試驗(yàn)結(jié)果如下為探討雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)對腸道致病菌的作用機(jī)理及拮抗效力。我們分別以制劑中的兩歧雙歧桿菌(6-1)、嗜酸乳酸桿菌加糞鏈菌及成品制劑，對宋內(nèi)氏和福氏志賀氏菌的拮抗作用進(jìn)行了初步研究。
材料1、菌種與制劑兩歧雙歧桿菌(6-1)(B.bifidum 6-1)，嗜酸乳酸桿菌(L.acidophilus YIT2004)，糞鏈球菌(Strep.faecalis YIT0072)，宋內(nèi)氏志賀氏菌(Shigella sonnei73)福氏志賀氏菌(Shigella flexneri301)，雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康，批號970107、970721)2、培養(yǎng)基
PYG湯、BL瓊脂、LB瓊脂。3、其它需氧、厭氧培養(yǎng)裝置，試管、吸管、三角瓶、平皿。
方法在試驗(yàn)過程中，所用菌種需在同一環(huán)境條件下培養(yǎng)。經(jīng)預(yù)備試驗(yàn)，我們選用了PYG湯為培養(yǎng)液，驗(yàn)證了所用菌種在37℃、厭氧條件下皆生長良好。并以此條件分別做了各種菌的對數(shù)生長曲線。一、兩歧雙歧桿菌(6-1)對宋內(nèi)氏志賀氏菌的拮抗作用1、宋氏菌液的制備接種宋氏菌于含100ml PYG湯的三角瓶中(接種量約103CFU/ml)，置37℃、厭氧條件下培養(yǎng)5小時(此時為該菌的對數(shù)中期)。取此培養(yǎng)液分裝12支大試管每管6ml，分組編號為O、A、B、C，每組三管。2、雙歧桿菌液的制備接種雙歧桿菌于含50ml PYG湯的三角瓶中(接種量約103CFU/ml)，置37℃、厭氧條件下培養(yǎng)16小時(此時該菌的對數(shù)中期)，制成菌液(1)。以PYG將菌液(1)做10倍、100倍稀釋制成菌液(2)、(3)。3、混合培養(yǎng)分別取菌液(1)、(2)、(3)與A、B、C各組試管中的宋氏菌等量混合；在O組三管中分別補(bǔ)加6ml PYG湯做為對照。此時取O組菌液涂LB平板活菌計數(shù)，即為零時各組試管中宋氏菌值；取菌液(1)涂BL平板活菌計數(shù)，換算出零時A、B、C各組試管中的雙歧菌值。
將以上四組12支試管置37℃厭氧條件下培養(yǎng)，不同時間取樣涂LB平板計數(shù)宋氏菌值。二、嗜酸乳酸桿菌加糞鏈球菌對宋內(nèi)氏志賀氏菌的拮抗作用1、宋氏菌液的制備(同一)2、乳酸桿菌和糞鏈球菌的制備分別接種乳酸桿菌和糞鏈球菌于含50ml PYG湯的三角瓶中(接種量約103CFU/ml)，置37℃、厭氧條件下，分別培養(yǎng)11和5個小時(此時分別為二者的對數(shù)中期)制成兩種菌液，取二者等量混和制成菌液(1)，以PYG湯將菌液(1)做10倍、100倍稀釋制成菌液(2)、(3)。3、混合培養(yǎng)(類同一)三、雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)對宋內(nèi)氏和福氏志賀氏菌的拮抗作用1、宋氏和福氏菌液的制備(類同一)2、制劑懸液的制備無菌稱取制劑中的粉劑5g，加45ml PYG湯中混勻制成懸液(1)，以PYG湯將(1)液做10倍稀釋制得系列懸液。3、混合培養(yǎng)(類同一)結(jié)果在試管內(nèi)，雙歧三聯(lián)活菌制劑對宋內(nèi)氏和福氏志賀氏菌皆有明顯的拮抗作用，48小時內(nèi)能完全抑殺上述兩種菌，其最低抑菌濃度為0.5-1mg/ml。
制劑中的三種菌在抑菌過程中體現(xiàn)出時間順序(糞鏈球菌和嗜酸乳酸桿菌優(yōu)先發(fā)揮抑菌效能，隨后是兩歧雙歧桿菌(6-1))和協(xié)同效應(yīng)。
本發(fā)明的雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)的動物毒性試驗(yàn)結(jié)果如下1、全身毒性試驗(yàn)取制劑以無菌生理鹽水稀釋冷成懸液，分別徑尾靜脈注射、腹腔注射、灌胃、給每組每只小鼠各含160萬個活菌的劑量(相當(dāng)于人每公斤用量的四千多倍，計算方法見后)，(三組，20只小鼠/組，體重20-25克，雌雄各半)，觀察七天。2、七天連續(xù)毒性試驗(yàn)以兩歧雙歧桿菌(6-1)液，經(jīng)灌胃給每只小白鼠290萬個活菌的劑量(相當(dāng)于人每公斤用量的7千倍，計算方法同1)。雙歧三聯(lián)菌制劑，經(jīng)灌胃給每只小鼠含3600萬個菌的劑量(相當(dāng)于人每公斤用量的9萬倍，計算方法同1)。同時設(shè)生理鹽水對照組(每組20只鼠，體重20-25克，雌雄各半)每日按上述劑量連續(xù)給七天。
(昆明小鼠由預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院流研所動物室提供)。3、毒性試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)過程中動物攝食，活動正常，無不良反應(yīng)，體重上升，試驗(yàn)組與對照組動物體重增長幅度無顯著差別。試驗(yàn)結(jié)束時，全身性毒性試驗(yàn)、七天連續(xù)毒性試驗(yàn)各組動物無一只死亡。以上結(jié)果證明，雙歧三聯(lián)活菌制劑中的兩歧雙歧桿菌(6-1)、嗜酸乳酸桿菌和糞鏈球菌均無毒性。
本發(fā)明的雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)通過動物試驗(yàn)和人體試驗(yàn)對雙歧桿菌發(fā)酵的安全性進(jìn)行研究的結(jié)果表明一、該乳制品對瑞士小白鼠，滬白1號/F26+13小白鼠，NIH封閉群小白鼠，SD純系大白鼠及日本大耳白家兔無急性毒性、蓄積毒性及刺激性。
三項(xiàng)致突變性試驗(yàn)均為陰性，表明雙歧桿菌無致突變性。
二、從該乳制品對24名志愿受試者受試一月的人體試驗(yàn)和追蹤觀察一年的結(jié)果可知，對人體的健康安全未發(fā)現(xiàn)不良作用。
本發(fā)明的雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)臨床研究結(jié)果如下一、入選病例1、成人急性腹瀉(1)輕型或者普通型急性菌痢*輕型--體溫38℃以下，臨床癥狀不明顯，腹瀉次數(shù)不超過4-5次/日，大便稀爛，肉眼不見膿血，培養(yǎng)陽性。
*普通型--體溫38-39℃左右，白血球＜20,000/ml，有輕度里急后重，大便5-15次/日，帶粘液或膿血，神志清醒，無嗜睡、驚厥，心血管功能良好，呼吸平穩(wěn)。(2)原因不明急性腹瀉(包括細(xì)菌性和病毒性等)；起病急，有不潔飲食史，腹瀉水便＞3次/日，大便外觀無膿血，鏡檢高倍視野白細(xì)胞＜15個。
2、成人慢性腹瀉大便＞2-3次/日，大便性狀不正常，持續(xù)2-3個月以上，反復(fù)發(fā)作以及近期又犯者。
3、成人便秘大便＞2-3天/次，便硬干結(jié)，且有排便困難，常需依靠開塞露或潤腸劑，癥狀持續(xù)1周以上者。
4、小兒各種病因的急、慢性腹瀉(感染性和非感染性)或便秘之0+--13周歲門診或住院病兒。
二、研究方法擬分試驗(yàn)和對照兩組進(jìn)行，以雙盲和開放對比法用培菲康與乳酶生進(jìn)行對比治療。研究方案由北京友誼醫(yī)院消化內(nèi)科和臨床藥理室根據(jù)衛(wèi)生部藥政局頒發(fā)的“消化系統(tǒng)藥物臨床研究指導(dǎo)原則”和“新生物制品人體觀察的技術(shù)要求”制定，并經(jīng)各參加臨床研究單位討論通過。各單位嚴(yán)格按照方案的要求，按統(tǒng)一表格記錄。資料齊備的合格病例方可定為可評價病例。
統(tǒng)計學(xué)處理，根據(jù)不同資料采用卡方檢驗(yàn)和Ridit分析。
三、給藥方法和劑量病人于治療前停用其它藥物(抗生素、激素、其它止瀉藥或潤腸劑)，隨機(jī)分組給藥；雙盲組給外形相同的培菲康和乳酶生膠囊。成人5粒/次，2-3次/日；兒童0+--1歲1粒/次，1--6歲2粒/次，6--13歲3粒/次，3次/日。幼兒可剝開膠囊倒出粉劑溫開水沖服。
四、結(jié)論1、本臨床研究，用培菲康治療成人或兒童輕、中型的急性腹瀉和原因不明的慢性腹瀉共401例；以乳酶生對照治療139例。綜合療效試驗(yàn)組，顯效率為58.6％、有效率為38.9％、總有效率為87.5％；對照組三者分別為22.3％、28.1％50.4％。兩組療效比較有顯著性差異(P＜0.05)，說明培菲康治療腹瀉優(yōu)于乳酶生。對比各組療效可以看出，培菲康治療急性腹瀉的效果優(yōu)于治療慢性腹瀉(二者療效相比有顯著性差異P＜0.05)。治療成人和兒童急性腹瀉的總有效率分別為92.3％和90.7％(其中顯效者占主，分別為76.9％和59.0％)；而對慢性腹瀉的總有效率則分別為80.0％和76.3％(其中顯效者分別為43.6％和39.0％)。
2、培菲康除了可用于治療原因不明的腹瀉外，尚對感染性腹瀉(病原包括痢疾桿菌、沙門氏菌、致病大腸菌、空腸彎曲菌、氣單胞菌及輪狀病毒等)有療效。試驗(yàn)組中有52例治療前檢出病原菌(細(xì)菌類)，有8例檢出輪狀病毒，治療后52例中有50例(96.2％)轉(zhuǎn)陰，8例輪狀病毒性腸炎患者治療后雖未做病毒檢驗(yàn)，但全部顯效。對照組病原菌的轉(zhuǎn)陰率僅50％，兩組比較有明顯差異(P＜0.01)。
3、培菲康對慢性腹瀉的療效雖不及對急性腹瀉，但確有一定效果。多數(shù)慢性腹瀉患者試驗(yàn)前均有不同程度的服過其他藥物而無明顯效果，或長期被診斷為“腸激惹綜合癥”，服用培菲康后80.0％的成人和76.3％的兒童患者痊愈或有好轉(zhuǎn)。
4、培菲康確具調(diào)整腸道菌群的功能。從對19例成人和16例兒童腹瀉患者治療前、后主要腸菌群的檢測結(jié)果來看，治療前病人都不同程度的存在腸菌群紊亂，主要表現(xiàn)在腸桿菌等需氧或兼性厭氧菌偏高，雙歧桿菌等厭氧菌偏低，治療后隨著臨床癥狀的消失上述狀況得到改善，腸菌群基本恢復(fù)正常。
5、培菲康在治療便秘方面，本項(xiàng)研究6例中有4例有效。
6、本臨床試驗(yàn)，未發(fā)現(xiàn)服用培菲康后有明顯副作用者，證實(shí)該品是安全的。
本發(fā)明的另一目的是提供了上述雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)的制備方法，該方法包括下列步驟將脫脂奶粉3.5～4.0％的水溶液與1.0％葡萄糖及3％的酵母膏置于高壓鍋內(nèi)滅菌121℃10分鐘，冷卻至37～38℃分別置于三個罐內(nèi)并在無菌條件下分別接種10％量的兩歧雙歧桿菌(6-1)、糞鏈球菌和乳酸桿菌，然后在37～38℃，罐內(nèi)壓0.3～0.6公斤/平方厘米發(fā)酵，其中兩歧雙歧桿菌(6-1)為充氮厭氧發(fā)酵，糞鏈球菌和乳酸桿菌為無菌空氣發(fā)酵，發(fā)酵后2000rpm離心得菌泥，加等量保護(hù)劑，冷凍干燥，得凍干粉，然后將三個菌的凍干粉混合后加入淀粉及預(yù)膠化淀粉過40目篩混合后灌裝膠囊(210mg/粒)或按常規(guī)方法制成顆粒劑、片劑。
本發(fā)明的雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)經(jīng)衛(wèi)生部藥品生物制品檢定，所檢定報如下菌種鑒定(形態(tài)、染色、培養(yǎng)特征、耐氧試驗(yàn)、生化反應(yīng))合格活菌計數(shù)合格大腸桿菌計數(shù)合格總雜菌數(shù)合格安全試驗(yàn)合格效力試驗(yàn)合格總評合格本發(fā)明的雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)能用于治療消化不良、急慢性腹瀉、菌群失調(diào)等消化系統(tǒng)疾病，并有保健用途，有較好的社會效益和經(jīng)濟(jì)價值。
實(shí)例一、制備雙歧三聯(lián)活菌膠囊在三個罐中分別加入脫脂奶粉7kg，葡萄糖12kg，酵母粉500g，溶于200kg水中，調(diào)PH6.5左右。121℃,10分鐘滅菌，然后在每個罐中分別接種10％兩歧雙歧桿菌(6-1)、厭氧37℃培養(yǎng)18小時后冷卻，嗜酸乳酸桿菌及糞鏈球菌，在需氧37℃培養(yǎng)20小時后冷卻，分別離心得菌泥8kg左右，加入保護(hù)劑混勻，在-40℃凍冷干燥，得菌粉5kg左右。將上述三個菌粉混合，加入可壓性淀粉20kg、硬脂酸鎂400克，過40目篩，直接灌裝膠囊。
保護(hù)劑配方脫脂奶粉2kg、谷氨酸鈉400克、異乳糖3kg、溶于12kg左右水中，121℃滅菌15分鐘。
實(shí)例二、制備雙歧三聯(lián)活菌片劑脫脂奶粉10kg、葡萄糖2kg、酵母粉1kg、硫酸銨500克、磷酸二氫鉀150g，磷酸氫二鉀300g，溶于200kg水中，調(diào)節(jié)PH7.0。
121℃,10分鐘滅菌，然后按實(shí)例一操作，將得到三個凍干菌粉混合后加入β-環(huán)糊精2kg粉碎，加可壓性淀粉20kg、乳糖2kg，混合過24目篩、壓片。
保護(hù)劑配方②脫脂奶粉2kg，維生素E20g，異乳糖3kg，維C鈉30g，水12kg、121℃,10分鐘滅菌。
實(shí)例三、制備雙歧三聯(lián)活菌顆粒劑脫脂奶粉7kg，葡萄糖1.2kg，酵母粉500g、水200kg，調(diào)節(jié)PH7.0，121℃,10分鐘滅菌。然后按實(shí)例一操作，將得到的三個凍干菌粉混合后，用0.1％HPMC溶液制成顆粒奶粉17kg，與菌粉混合，過12目篩，鋁塑包裝。
保護(hù)劑配方(同①)。
實(shí)例四、制備雙歧三聯(lián)活菌片劑脫脂奶粉8kg，葡萄糖2kg，酵母精粉1.0kg、水200kg。調(diào)節(jié)PH6.5,121℃,10分鐘滅菌。然后按實(shí)例1操作，將制得三種凍干菌粉，混入β-環(huán)糊精2kg、可壓性淀粉16kg、乳糖4kg、乙基纖維素4kg，混合過24目篩，壓片。
保護(hù)劑(同②)實(shí)例五、制備雙歧三聯(lián)活菌膠囊脫脂奶粉7kg，葡萄糖1.2kg，酵母粉500g、水200kg，調(diào)節(jié)PH6.5,121℃,10分鐘滅菌。其它同實(shí)例一。
實(shí)例六、制備雙歧三聯(lián)活菌顆粒劑脫脂奶粉10kg、葡萄糖2kg、酵母粉1.0kg、硫酸銨500g、磷酸二氫鉀150g，磷酸氫二鉀300g，溶于200kg水中，調(diào)節(jié)PH7.0左右，121℃,10分鐘滅菌。然后按實(shí)例一操作，將制得三種凍干菌粉混合，混入β-環(huán)糊精2kg，加入用0.1％HPMC溶液制粒的奶粉17kg混和，過12目篩，制成顆粒劑、鋁塑包裝。
保護(hù)劑(同②)。
權(quán)利要求
1.一種雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)，其特征在于該制劑是由兩歧雙歧桿菌(6-1)、乳酸乳桿菌和糞鏈球菌冷凍干燥活菌粉作為活性成份與保護(hù)劑組成的，并且可以按含活性成份為0.01～99.99％與含保護(hù)劑為99.99～0.01％的任意配比組成100％的組成，其中兩歧雙歧桿菌(6-1)與乳酸桿菌和糞鏈球菌可以按1～5∶1～5∶1～5的任意比例組成活性成份，上述保護(hù)劑可以為含脫脂奶粉10-20％、異乳糖10-20％、維生素C-鈉0.01-0.2％、谷氨酸鈉0.01-2％、維生素E0.01-2％、β-環(huán)糊精6-20％、淀粉6-20％的任意比例組成保護(hù)劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)，其特征在于其中所述的保護(hù)劑可以為脫脂奶粉10-20％、異乳糖10-20％、維生素C-鈉0.01-0.2％、谷氨酸鈉0.01-2％、維生素E0.01-2％、β-環(huán)糊精6-20％、淀粉6-20％。
3.一種如權(quán)利要求1所述的一種雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康)的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟將脫脂奶粉3.5～4.0％的水溶液與1.0％葡萄糖及3％的酵母膏置于高壓鍋內(nèi)滅菌121℃10分鐘，冷卻至37～38℃分別置于三個罐內(nèi)并在無菌條件下分別接種10％量的兩歧雙歧桿菌(6-1)、糞鏈球菌和乳酸桿菌，然后在37～38℃，罐內(nèi)壓0.3～0.6公斤/平方厘米發(fā)酵，其中兩歧雙歧桿菌(6-1)為充氮厭氧發(fā)酵，糞鏈球菌和乳酸桿菌為無菌空氣發(fā)酵，發(fā)酵后2000rpm離心得菌泥，加等量保護(hù)劑，冷凍干燥，得凍干粉，加入淀粉及預(yù)膠化淀粉，混合后灌裝膠囊(210mg/粒)或按常規(guī)方法制成片劑、顆粒劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種雙歧三聯(lián)活菌制劑(培菲康),該制劑是由兩歧雙歧桿菌(6－1)、糞鏈球菌和乳酸桿菌與保護(hù)劑組成的。本品能用于治療消化不良、急慢性腹瀉,菌群失調(diào)等消化系統(tǒng)疾病,并有保健用途。本發(fā)明提供了制備方法。
文檔編號A61K35/74GK1223865SQ9811062
公開日1999年7月28日 申請日期1998年1月20日 優(yōu)先權(quán)日1998年1月20日
發(fā)明者陳彬華, 姚義強(qiáng) 申請人:上海信誼藥業(yè)有限公司