專利名稱：丹酚酸a組合物用于制備抑制腦組織神經(jīng)元損傷或死亡藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹酚酸A組合物用于制備抑制腦組織神經(jīng)元損傷或死亡藥物的用途。
背景技術(shù)：
腦血管病又稱腦卒中，是由各種病因使供應(yīng)腦部血液的血管發(fā)生病變所致的一種神經(jīng)系統(tǒng)疾病。其主要病因為腦動脈系統(tǒng)病損(如腦動脈硬化)等原因?qū)е碌哪X動脈管腔狹窄、血管痙攣、閉塞或破裂、血流減少或完全阻塞，腦部血液循環(huán)和功能障礙，腦組織受損而發(fā)生的一系列癥狀。主要包括缺血性和出血性腦血管病。其中(ICVD，又稱缺血性卒中)占80 左右。缺血性腦血管病是指局部腦組織包括神經(jīng)細胞、膠質(zhì)細胞及聯(lián)系纖維由于供血障礙發(fā)生的變性、壞死或一過性的功能喪失。血管內(nèi)血栓形成、栓塞、血管狹窄導(dǎo)致的腦動脈阻塞是缺血性腦卒中的主要原因。缺血引起腦神經(jīng)細胞損傷和死亡的作用機制多樣、復(fù)雜，缺血性腦卒中(即腦缺血)后，由于腦部缺乏血液和氧氣的供應(yīng)，導(dǎo)致大腦能量代謝失衡，產(chǎn)生一系列病理性損傷，如氧化應(yīng)激、興奮性氨基酸毒性、鈣超載、炎癥反應(yīng)等，從而導(dǎo)致神經(jīng)元的大量死亡。它是臨床上的常見病、多發(fā)病，死亡率及致殘率很高，現(xiàn)已經(jīng)成為世界公認的三大致死疾病之一。臨床上治療主要是溶栓、挽救缺血區(qū)域(半暗帶)的瀕臨死亡的神經(jīng)元和促進損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)。防治缺血性腦血管疾病是目前人類迫切需要解決的醫(yī)學難題。目前美國FDA僅批準了組織纖溶酶原活化因子(tPA)用于中風后的溶栓治療，但其治療時間窗很窄，只有在中風4.5小時內(nèi)使用才有效；而且還存在出血以及缺血再灌加重腦損傷的危險性。而目前針對缺血性中風治療的神經(jīng)保護藥包括鈣通道阻斷劑如尼莫地平、谷氨酸受體拮抗劑如地佐環(huán)平(dizocilPine)、抗氧化劑或自由基清除劑如依達拉奉、NO信號傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)劑蘆貝魯 哩(Lubeluzole)以及炎癥抑制劑恩莫單抗(enlimomab)等。但它們中有的治療作用不確切或特異性不強，有的毒副作用較大、耐受性小，有的還處于臨床前或臨床研究階段，很難在防治缺血性腦卒中發(fā)揮積極影響。因而，研發(fā)出快速有效、安全穩(wěn)定的防治腦缺血藥物迫在眉睫。在此領(lǐng)域中醫(yī)藥發(fā)揮了不可忽視的積極作用。丹參制劑是我國心腦血管疾病的基本治療藥物，因療效確切，丹參已成為我國用量最大、銷售額最高、制劑生產(chǎn)廠最多，臨床劑型最全的中藥之一。丹參有效化學成分主要有兩大類:脂溶性丹參酮類化合物和水溶性酚酸類化合物。研究表明:丹酚酸類在抗肝臟損傷、抗動脈粥樣硬化及細胞凋亡以及改善記憶功能障礙等方面有著顯著的活性。其中又以丹酚酸A(Salvianolic acid A)抗氧化活性最強，丹酚
酸A結(jié)構(gòu)如下:
權(quán)利要求
1.丹酚酸A組合物用于制備抑制腦組織神經(jīng)元損傷或死亡藥物的用途，所述組合物由丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C組成；其中 所述丹酚酸A的分子式=C26H22Oltl,分子量:494.45，結(jié)構(gòu)如下:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于抑制腦組織神經(jīng)細胞凋亡的用途。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于增強腦組織內(nèi)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子表達的用途。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于抑制腦組織炎癥損傷的用途。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于抑制腦組織神經(jīng)細胞內(nèi)Ca2+超載的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于改善腦組織內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)紊亂的用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于抑制腦組織興奮性氨基酸毒性的用途。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于抑制腦組織氧自由基損傷的用途。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項所述的用途，其中所述組合物是由下列重量配比制成:丹酚酸A93 % 98 %，紫草酸0.1 % 2.0 %，迷迭香酸0.1 % 2.0 %，丹酚酸B0.1 % 2.0%，丹酚酸 C0.1% 3%。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述組合物是由下列重量配比制成:丹酚酸A94% 97%，紫草酸0.1% L 5%，迷迭香酸0.1% L 5%，丹酚酸B0.1% 1.5%，丹酚酸 C0.1% 2.0%。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其中所述組合物是由下列重量配比制成:丹酚酸A95% 96%，紫草酸0.1% L 2%，迷迭香酸0.1% L 2%，丹酚酸B0.1% 1.2%，丹酚酸 C0.1% 1.5%。
12.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的用途，其特征在于步驟(I)中所述的水提取方法為:取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約2mm顆粒，每次加3 15倍量水提取，共提取I 3次，每次提取I 4小時；提取液減壓濃縮至相對密度1.10 1.25 (600C )，加入乙醇使含醇量在30% 80%，離心，上清液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，所述水提取采用煎煮提取或45 95°C水溫浸提取，同時以10 50轉(zhuǎn)/分速度攪拌，得丹參提取液。
13.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的用途，其特征在于步驟(I)中所述的醇提取方法為:取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約2mm顆粒，每次加3 15倍量30% 60%乙醇回流提取，每次提取I 4小時，共提取I 3次；減壓回收乙醇，得丹參提取液。
14.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的用途，其中步驟(I)中的提取液中丹酚酸B濃度為lmg/ml 30mg/ml或加水稀釋至lmg/ml 30mg/ml。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的用途,其中提取液中丹酹酸B濃度為5mg/ml 20mg/ml或加水稀釋至5mg/ml 20mg/ml。
16.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的用途，其中步驟(2)中的催化劑是氯化鐵、三氯化釕、氯化鋁、氯化鋅、氯化鈀中的一種或幾種，催化劑與丹酚酸B的摩爾百分比為0.1% 3.0%。
17.根據(jù)權(quán)利 要求16所述的用途，其中催化劑與丹酚酸B的摩爾百分比為0.5% 2.0%。
18.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的用途，其特征在于步驟a中所述大孔樹脂柱為HPD-80、HPD-100、HPD-100B、HPD-200A、HPD-300、HPD-450、HPD-722、HPD-826、ADS-5、ADS-8、ADS-21、或D101、AB-8 ；所述洗脫劑為水及不同比例的水與乙醇，并且先用水、10 40 %乙醇洗脫，再用20 60%乙醇洗脫，高效液相檢測丹酚酸A，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無醇味。
19.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的用途，其特征在于步驟b中的所述洗脫劑為水及不同比例的水與乙醇，并且先用水、20 60%乙醇溶液洗脫除雜，再用40 90%乙醇溶液洗脫，高效液相檢測丹酚酸A，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無醇味。
20.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的用途，其特征在于步驟c中所述的有機溶劑為叔丁基甲基醚、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯或甲酸乙酯。
21.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的用途，其特征在于步驟d中所述洗脫劑為石油醚、正戊烷、正庚烷、乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸乙酯、叔丁基甲基醚組成的兩相溶劑。
22.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的用途，其特征在于步驟(4)中所述微波真空干燥的溫度:20-100°C，回差溫度1_5°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率1-100KW，干燥10-200分鐘。
23.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的用途，其特征在于步驟(4)中所述真空干燥的溫度:50°C 90°C，真空度-0.07Mpa以上，功率:1 60KW，干燥2 20小時。
24.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的用途，其特征在于步驟(4)中所述噴霧干燥的進風口溫度:150°C 350°C，出風口溫度:70°C 95°C，噴霧速度:1 300ml/min。
25.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項所述的用途，其特征在于pH調(diào)節(jié)劑為磷酸、鹽酸、硫酸或醋酸。
26.根據(jù)權(quán)利要求1 25任一項所述的用途，其特征在于采用高效液相色譜法測定丹酚酸A，紫草酸，迷迭香酸，丹酚酸B，丹酚酸C含量，測定條件如下: 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 檢測波長286nm ;流速1.0ml/min ;柱溫30°C ； 理論塔板數(shù)按丹酚酸A計應(yīng)不低于10000 ； 對照品溶液的制備精密稱取丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C對照品適量至容量瓶中，加甲醇制成混合對照品溶液； 供試品溶液的制備 :精密稱取樣品IOmg到IOOml容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度，即得； 洗脫以甲醇為流動相A，以0.1 0.5%磷酸為流動相B，按下述條件進行梯度洗脫，運行60分鐘； O 10分鐘時，甲醇的比例由30%升至40%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由70%降至60% ； 10 30分鐘時，甲醇的比例由40%升至55%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由50%降至45% ； 30 60分鐘時，甲醇的比例由55%升至80%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由45%降至20% ； 測定法:分別精密吸取混合對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，計算丹酚酸Α、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C的含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種丹酚酸A組合物用于制備抑制腦組織神經(jīng)元損傷或死亡藥物的用途，該組合物由丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C組成，其中所述的組合物是由下列重量配比制成丹酚酸A90％～99％，紫草酸0.1％～3％，迷迭香酸0.1％～3％，丹酚酸B0.1％～3％，丹酚酸C0.1％～5％。
文檔編號A61P29/00GK103211808SQ20131009809
公開日2013年7月24日 申請日期2013年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月20日
發(fā)明者歐陽婷, 張功俊, 楊小玲, 蔡元魁, 李志勇, 程帆 申請人:蔣春紅