專(zhuān)利名稱(chēng)：生物適合的生長(zhǎng)激素溶液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生長(zhǎng)激素的一種新溶液及其配制所需器材。此溶液可在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持清徹，在機(jī)械振蕩下也可保持清徹。
生長(zhǎng)激素(somatotropins)，亦即growth hormones，是由多種動(dòng)物垂體腺分泌的多肽激素。這類(lèi)激素具有多種治療用途，其合成物可用于治療人類(lèi)腦垂體缺陷，胃腸道出血和加速骨折、挫傷和其它創(chuàng)傷的愈合過(guò)程。通過(guò)不同的施藥方法和注射，還可以促進(jìn)動(dòng)物肉、乳的生產(chǎn)。(參見(jiàn)E.J. Turman，“Some Effects of Pituitary Anterior Growth Factor”ThesisPurdue University，April，1953;L.J.Machlin，J.Anim.Sci.35794-800(1972);T.R.Kasser et al.，J.Anim.Sci.53420-426;L.J.Machlin，J.Dairy Sci.56575-580(1973)).
生長(zhǎng)激素這類(lèi)蛋白質(zhì)的加工和使用常常需用其溶液，然而，溶解的生長(zhǎng)激素如蛋白質(zhì)會(huì)被疏水界面吸附從而產(chǎn)生繼發(fā)性反應(yīng)。如“變性”。即吸附的生長(zhǎng)激素分子形狀發(fā)生改變。另外，吸附的生長(zhǎng)激素分子的聚集作用還會(huì)產(chǎn)生可溶或不可溶的聚合形式。這種聚集作用表現(xiàn)的例子是，當(dāng)攪拌和振蕩生長(zhǎng)激素的水溶液時(shí)，溶液混濁，或生長(zhǎng)激素失去生物活性。(參見(jiàn)A.F.Henson等人，J.Colloid Interface Sci.32162(1970))
當(dāng)生長(zhǎng)激素從溶液中沉淀出來(lái)以后，沉淀出的蛋白質(zhì)就不能再用，因此，需要有一種在攪拌振蕩后不會(huì)混濁，貯存較長(zhǎng)一段時(shí)間仍能保持清徹的溶液。
本發(fā)明公開(kāi)的生長(zhǎng)激素溶液將能較長(zhǎng)時(shí)間地保持清徹，并且在機(jī)械振蕩下也不會(huì)產(chǎn)生混濁和沉淀。此溶液包括冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物，該組合物每2-8份鹽酸精氨酸含約1份生長(zhǎng)激素(重量比)，冷凍干燥前此組合物的PH值在7.2-8.5之間，溶解于稀釋液中。如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值低于7.8，稀釋液含有乙二胺四乙酸(EDTA)一種非離子表面活化劑和一種緩沖劑;如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值為7.8或更高，則此稀釋液包括EDTA和一種非離子表面活化劑，發(fā)需要還可包括一種合適的緩沖劑或非緩沖介質(zhì)。雖然兩種介質(zhì)均可使用，但如果加入非緩沖介質(zhì)，就不可再加緩沖劑。
本發(fā)明還提供配制此溶液的器材，包括一個(gè)裝有冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物(每2-8份鹽酸精氨酸1份生長(zhǎng)素(重量比))的小瓶，還包括另一個(gè)裝有生物適合的稀釋液的小瓶，內(nèi)裝EDTA和一種非離子表面活化劑。另外，如前所述，根據(jù)冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值，此稀釋液還可含有一種緩沖劑或非緩沖介質(zhì)。如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值小于7.8，小瓶?jī)?nèi)還應(yīng)含有一種緩沖劑。如PH等于或大于7.8，小瓶?jī)?nèi)可選地含有一種緩沖劑或非緩沖介質(zhì)?？蓪⒋讼♂屢杭尤肜鋬龈稍锖蟮纳L(zhǎng)激素組合物中，搖動(dòng)所得混合物，使生長(zhǎng)激素溶解。
本發(fā)明提供能較長(zhǎng)時(shí)間地保持清徹并且在機(jī)械振蕩、搖動(dòng)和渦流攪拌下仍不混濁和不會(huì)產(chǎn)生沉淀的生長(zhǎng)激素溶液。所謂能保持“清徹”的生長(zhǎng)激素溶液是生長(zhǎng)激素溶于稀釋劑后不沉淀的溶液。此溶液在貯存幾日，一般至少五日之后仍保持清徹，此溶液一般在25℃下至少五日保持清徹。如貯存溫度稍高，此溶液仍可保持清徹，只是保存時(shí)間可能縮短。一種保持清徹的溶液，其在360nm處的表觀吸光度(0.0360)小于0.10。
本生長(zhǎng)激素溶液晶民含冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物，冷凍干燥前的PH值至少為7.2，一般在7.2-8.5之間。如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素合成物的PH值小于7.8，稀釋液則包括EDTA，一種非離子表面活化劑和一種合適的緩沖劑，以穩(wěn)定最終的生長(zhǎng)激素溶液。如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值大于或等于7.8，稀釋液則包括EDTA，一種非離子表面活化劑和可選地包括一種緩沖劑或非緩沖介質(zhì)。雖然兩種介質(zhì)都可使用，但如果加入非緩沖介質(zhì)，則最好不要再加緩沖劑。如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值大于或等于7.8，緩沖劑和非緩沖介質(zhì)都不是必需的，但其中任何一種均可調(diào)節(jié)和保持所得生長(zhǎng)激素溶液的等滲性以免其變?yōu)楦邼B溶液，這在動(dòng)物注射生長(zhǎng)激素溶液中是必需的。適當(dāng)添加物的選擇基于許多因素，包括例如價(jià)錢(qián)(FDA，GRAS List中列有)，高壓滅菌能力，化學(xué)穩(wěn)定性，與生長(zhǎng)激素?zé)o相互作用以及生物適合性。
冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物的制備為將鹽酸精氨酸溶于生長(zhǎng)激素中，調(diào)節(jié)溶液的PH值至7.2以上，以7.2-8.5為宜，然后用過(guò)濾和離心法除去不溶物質(zhì)，將生長(zhǎng)激素和鹽酸精氨酸溶液用已知技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)程序冷凍干燥。
冷凍干燥的溶液通常包括，每2-8份鹽酸精氨酸1份生長(zhǎng)激素(重量比)，最好為每3份鹽酸精氨酸1份生長(zhǎng)激素。因此，此溶液最好包括10-150mg/ml生長(zhǎng)激素和30-450mg/ml鹽酸精氨酸，最終PH值不小于7.2。最適宜的是，冷凍干燥的溶液包括30mg/ml生長(zhǎng)激素和90mg/ml鹽酸精氨酸，其最終PH值在7.2-8.5之間。
本發(fā)明中冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物中的生長(zhǎng)激素可為任何一類(lèi)生長(zhǎng)激素，包括天然或合成的牛、豬、人、鳥(niǎo)、羊或馬的生長(zhǎng)激素，最好用豬的生長(zhǎng)激素。此處名詞“生長(zhǎng)激素”是指包括完整的天然激素或合成的生長(zhǎng)激素及共具有促生長(zhǎng)能力的衍生物。衍生物包括具有生物活性的斷片或此類(lèi)多肽激素的類(lèi)似物。例如δ-7豬生長(zhǎng)激素(delta 7 porcine somatotropin)，它具有與豬生長(zhǎng)激素相同的氨基排列，比成熟、完整的豬生長(zhǎng)激素少首七個(gè)氨基酸(見(jiàn)European Patent Application Publication No.0 104 920 to Biogen N.V.).此處術(shù)語(yǔ)“生物活性”是指該多肽用于活體后對(duì)其生物過(guò)程有顯著的影響。
本發(fā)明中所用的生長(zhǎng)激素可以是金屬結(jié)合的生長(zhǎng)激素。金屬結(jié)合的生長(zhǎng)激素由在含有生長(zhǎng)激素的水溶液中加入過(guò)渡金屬鹽產(chǎn)生。這些過(guò)渡金屬鹽與生長(zhǎng)激素產(chǎn)生不溶復(fù)合物，從溶液中沉淀出來(lái)。金屬結(jié)合的生長(zhǎng)激素含有生長(zhǎng)激素分子和金屬離子，如Zn+2，Cu+2，Co+2，Mn+2Fe+2和Fe+3，其中金屬離子和生長(zhǎng)激素分子中某些氨基酸殘基上的氮原子以配位鍵相連。金屬結(jié)合的生長(zhǎng)激素可作為制備冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物的原料。盡管冷凍干燥的生長(zhǎng)激素合成物中含有金屬，但一旦經(jīng)冷凍干燥，金屬就不再與生長(zhǎng)激素相連。當(dāng)用于生物體時(shí)，產(chǎn)物中的過(guò)渡金屬對(duì)生長(zhǎng)激素的生物活性并無(wú)任何顯著的不利影響。
本發(fā)明的生長(zhǎng)激素溶液可通過(guò)將冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物溶于稀釋液中制備，最終溶液PH值至少為7.2，一般為約7.2-8.5，最好為7.2-8.2之間。如果溶液的PH值大于8.5，蛋白質(zhì)將會(huì)降解。一般地，1ml稀釋液中溶解約0.5-40mg冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物，生長(zhǎng)激素溶液的最終濃度以每毫升稀釋液10-30mg冷凍干燥的生產(chǎn)激素組合物為宜，最好為每毫開(kāi)稀釋液約20mg冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物。冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物的重量為其中所含鹽酸精氨酸和生長(zhǎng)激素重量之和。
如果配制生長(zhǎng)激素溶液的生長(zhǎng)激素組合物冷凍干燥前的PH值小于7.8，則稀釋液含EDTA，一種非離子表面活化劑和一種緩沖劑。另一方面，如果生長(zhǎng)激素組合物的PH值大于或等于7.8，則稀釋液含有EDTA，一種非離子表面活化劑和可選地含有一種緩沖劑或非緩沖介質(zhì)。如果稀釋液含緩沖劑，則最終生長(zhǎng)激素溶液的PH值將與緩沖液的PH值一致，但如果稀釋液是非緩沖的，則生長(zhǎng)激素組合物的PH值將決定最終生長(zhǎng)激素溶液的PH值。
如果最終生長(zhǎng)激素的溶液PH值在約7.2-7.6之間，稀釋液中所用EDTA的濃度應(yīng)至少為1.5mM，最好為1.5mM-10mM。如果最終生長(zhǎng)激素溶液的PH值大于7.6，則稀釋液中所用EDTA的濃度至少為1.0mM，最宜在1.0mM至10mM之間。
適用于稀釋劑中的表面活化劑包括聚氧乙烯-23-月桂醚(布里劑Brij35)，吐溫80，聚氧乙烯-20-鯨蠟醚(布里劑Brij58)以及其它具有相似親水/疏水平衡(HLB)的聚氧乙烯非離子表面活化劑?，F(xiàn)有技術(shù)表明此類(lèi)非離子表面活化劑可穩(wěn)定和保持純化酶的活性。(見(jiàn)T.Kitani et al. Eur.J.Biochem.119177-181(1981);M.Pritchard et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.1001597-1603(1981);Seely et al.Biochemistry，Vol.21，No.14，3394-3399(1982))。一般地，所用表面活化劑的濃度范圍為約為0.08%-2.0%。如果表面活化劑用Brij35，則Brij的濃度至少為0.08%，最好在0.1%-0.2%之間。如果表面活化劑用吐溫80或Brij58，則其濃度以0.1%-1.0%為宜。
如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素的PH值大于或等于7.2小于7.8，則稀釋液中的緩沖劑可增加生長(zhǎng)激素溶液的穩(wěn)定性。緩沖劑可以是鹽酸三羥甲基氨基甲烷(Tris HCl)，磷酸鹽或其它中性與受體相容的PH緩沖劑。一般地，加入緩沖劑的濃度范圍為約0.2-0.5M。如果用Tris HCl作緩沖劑，Tris HCl的濃度至少為0.2M，宜為0.2M-0.3M。
如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素合成物的PH值大于或等于7.8，稀釋液中可根據(jù)需要加入前面所述的緩沖劑或非緩沖介質(zhì)，以調(diào)節(jié)或保持生長(zhǎng)溶液的等滲性。非緩沖介質(zhì)也應(yīng)與受體相容。這類(lèi)非緩沖介質(zhì)包括蔗糖、海藻糖或氯化鈉。如果用非緩沖介質(zhì)。其濃度應(yīng)為0.05M-0.5M。如果非緩沖介質(zhì)用蔗糖或海藻糖，適宜的濃度范圍是0.1-0.3M。如非緩沖介質(zhì)用氯化鈉，濃度以0.05M-0.15M為宜。
制備本發(fā)明的器材包括裝有前述冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物的小瓶和另一裝有前述稀釋液的小瓶。將稀釋液注入冷凍干燥的生長(zhǎng)激素化合物中振蕩使生長(zhǎng)激素溶解。
本發(fā)明的生長(zhǎng)激素溶液可用于進(jìn)一步加工或直接施用于動(dòng)物體。此溶液在室溫下(一般為25℃)可保存至少5天不混濁。此溶液還可貯存于稍高一些的溫度下，盡管其貯存時(shí)間可能縮短。此溶液在振蕩、攪動(dòng)等機(jī)械振蕩下也不會(huì)沉淀出長(zhǎng)生激素。溶液中的生長(zhǎng)激素可保持生物活性，可按常規(guī)技術(shù)施用于動(dòng)物體以促進(jìn)生長(zhǎng)。
本發(fā)明還可用以下實(shí)施例說(shuō)明，但這些實(shí)施例并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限定。
實(shí)施例以下實(shí)施例中溶液的清徹度用目視法和/或360nm下測(cè)定表觀光密度(0.D.360)來(lái)測(cè)定，此波長(zhǎng)下生長(zhǎng)素沒(méi)有內(nèi)吸收。生長(zhǎng)激素溶液裝在樣品比色杯中，0.D.360用Shimadzu UVU 160分光光度計(jì)測(cè)定。不含生長(zhǎng)激素的稀釋液作為對(duì)照。所有實(shí)驗(yàn)均用石英比色杯。實(shí)施例中“清徹”是指0.D.360小于0.10的溶液。
實(shí)施例1
按照歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)第83300803.9號(hào)所公開(kāi)的方法制備32克鋅合豬生長(zhǎng)激素(PST)，將其和90克鹽酸精氨酸溶于1升無(wú)菌水中，用鹽酸或氫氧化鈉水溶液將PH值調(diào)至7.8，用聚二氟乙烯膜過(guò)濾，除去不溶物質(zhì)，然后對(duì)此透明液體進(jìn)行冷凍干燥。生成物(命名為“冷凍干燥的豬生長(zhǎng)激素(PST)組合物)含有每90克鹽酸精氨酸約30克PST，過(guò)濾過(guò)程損失原33克PST中10%的不溶PST。
實(shí)施例2在含有0.639g PST和21.6ml PH值為9.8，0.46M的碳酸鈉緩沖液的非鋅合PST溶液中加入1.92克固體鹽酸精氨酸，攪拌，使精氨酸溶解，滴加1M氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至7.8。生成溶液含有約30mg/mlPST和90mg/ml精氨酸。用移液管將溶液的等分試樣(7.2ml)移入三個(gè)50ml的小瓶中，冷凍至-80℃然后進(jìn)行冷凍干燥。
冷凍干燥的PST組合物易溶于200mM Tris HCl，2mM EDTA，0.15%Brij 35中(PH為7.8)，濃度為20mg/ml(溶解時(shí)間小于3分鐘)。用目視法觀察到生成溶液是清徹的。
實(shí)施例3準(zhǔn)備以下的溶液1. 0.2 M Tris HCl, 2 mM EDTA, 0.15% Brij 35,pH 7.82. " " " " " " ",pH 7.43. 2 mM EDTA, 0.15% Brij 35, pH 7.8將鋅合的PST(Zn-PST)，非金屬結(jié)合的PST(non-Zn PST)以及冷凍干燥的PST組合物(用實(shí)施例1的方法制備)分別溶于以上溶液，振蕩2分鐘(濃度為5mg/ml PST或20mg/ml冷凍干燥的PST組合物)。振蕩2分鐘后所得溶液的清徹度用目視法和在360nm測(cè)定濁度的方法測(cè)定。如表1所示，只有冷凍干燥的PST組合物在此條件下可得到清徹的溶液。結(jié)果如表1所示表1PST 溶液 OD360Zn-pST #1 0.522〃 #2 0.504〃 #3 0.381non-Zn pST #1 0.242〃 #2 0.347〃 #3 0.186冷凍干燥的PST組合物〃 #1 0.019〃 #2 0.019〃 #3 0.019實(shí)施例4配制以下的稀釋液1. 0.2M 2mMTris HCl EDTA PH7.8 含有 0.15% BriJ35。
2. 〃 〃 〃 〃 〃 0.125% 〃 。
3. 〃 〃 〃 〃 〃 0.10% 〃 。
4. 〃 〃 〃 〃 〃 0.08% 〃 。
5. 〃 〃 〃 〃 〃 0.06% 〃 。
6. 〃 〃 〃 〃 〃 0.04% 〃 。
7. 〃 〃 〃 〃 〃 0.00% 〃 。
稱(chēng)七份等分的40mg冷凍干燥的PST組合物(用實(shí)施例1的方法制備)分別置入七個(gè)13×100的試管中，分別用2ml以上的稀釋液溶解。所得溶液用渦動(dòng)攪拌器(調(diào)至4.5)攪動(dòng)30秒，用目視法和分光度法測(cè)定0.D.360，其結(jié)果如表2所示表2不同稀釋液對(duì)重組PST機(jī)械穩(wěn)定性的影響稀釋液編號(hào) 表現(xiàn) O.D.3601 清徹 0.0402 清徹 0.0473 清徹 0.0724 清徹 0.0925 稍混濁 0.2576 稍混濁 0.4847 非?；鞚? 1.708如表2所示，在此條件下渦動(dòng)攪拌稀釋液中冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物，只有所含Brij35濃度大于0.08%的溶液可保持清徹，而所含Brij35濃度小于0.08%的生長(zhǎng)激素溶液在渦動(dòng)攪拌后不能保持清徹。
實(shí)施例5稱(chēng)40mg等分的冷凍干燥的PST組合物于2英錢(qián)的玻璃小瓶中，然后用含有200mM Tris HCl，0.10% Brij35和以下EDTA濃度和最終PH值的稀釋液溶解
1. 2.0 mM EDTA, pH 7.22. 0.25 mM 〃 , pH 7.43. 0.50 mM 〃 , 〃4. 1.00 mM 〃 , 〃5. 1.50 mM 〃 , 〃6. 2.00 mM 〃 , 〃7. 0.25 mM 〃 , pH 7.68. 0.50 mM 〃 , 〃9. 1.00 mM 〃 , 〃10. 1.50 mM 〃 , 〃11. 2.00 mM 〃 , 〃12. 0.25 mM 〃 , pH 7.813. 0.50 mM 〃 , 〃14. 1.00 mM 〃 , 〃15. 1.50 mM 〃 , 〃16. 2.00 mM 〃 , 〃將這些樣品置于25℃恒溫箱中，在不同時(shí)間用肉眼觀察其清徹度，結(jié)果如表3所示表3不同稀釋液對(duì)重組PST溶液穩(wěn)定性的影響溶液# 1天 5天 10天1 清徹 清徹 清徹2 稍混濁 稍混濁 非常混濁3 清徹 混濁 非?；鞚? 清徹 稍混濁 混濁5 清徹 清徹 清徹6 清徹 清徹 清徹7 清徹 混濁 非常混濁8 清徹 稍混濁 非?；鞚? 清徹 稍混濁 混濁
10 清徹 稍混濁 清徹11 清徹 稍混濁 清徹12 清徹 混濁 非?；鞚?3 清徹 清徹 混濁14 清徹 清徹 稍混濁15 清徹 清徹 清徹16 清徹 清徹 清徹如表3所示，此條件下含有濃度大于1.5mM EDTA，PH為7.2-7.6的生長(zhǎng)激素溶液在將冷凍干燥的PST合成物溶于稀釋液后至少10天保持清徹。而此條件下含有濃度大于1.0mM EDTA，PH值大于7.6的生長(zhǎng)激素溶液在將冷凍干燥的PST合成物溶于稀釋液后仍能至少5天保持清徹。
實(shí)施例6稱(chēng)40mg等分成16份的冷凍干燥的PST合成物置入16個(gè)兩英錢(qián)的小瓶中，加入以下稀釋液2ml;
與稀釋液9-14重組后的樣品的最終PH值為7.8-7.9(或約等于冷凍干燥前PST/精氨酸溶液最后調(diào)節(jié)的PH值)。這些樣品置于25℃恒溫箱中保溫6天，然后測(cè)定其混濁度(0.D.360)結(jié)果。如表4所示。
表4不同稀釋液對(duì)重組PST溶液穩(wěn)定性的影響溶液 # 6天后(O.D.360)1 0.0212 0.0643 0.2644 0.5375 0.6586 0.0647 0.0848 0.9799 0.02510 0.02511 0.02512 0.02513 <0.0314 <0.03如表4中溶液1-5所示，含有0.15% Brij35和1.5mM EDTA，PH值為7.4的稀釋液中所含Tris HCl濃度大于200mM時(shí)，此生長(zhǎng)激素溶液可保持清徹。如表4中溶液6-8所示，除含有0.15%的Brij35和200mM Tris HCl，PH為7.2之外，還必須有濃度大于1.5mM的EDTA方可使生長(zhǎng)激素溶液保持6天清徹。表4中溶液9-14顯示，當(dāng)稀釋液含有0.15%Brij 35，2mM EDTA和或1%，5%，10%蔗糖溶液，或是0.2M，0.1M，0.0M氯化鈉溶液，樣品最終PH值為7.8-7.9時(shí)，生長(zhǎng)激素的溶液可保持6天清徹。
權(quán)利要求
1.一種能在一段較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)和機(jī)械振蕩下仍能保持清徹的生長(zhǎng)激素溶液，由一種冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物溶于稀釋液組成，該冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物包括每2-8份鹽酸精氨酸1份生長(zhǎng)激素(重量份)冷凍干燥前PH值為7.2-8.5；該稀釋液則含有EDTA，一種非離子表面活化劑，如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值7.2-7.8之間，還含有一種緩沖劑。
2.權(quán)利要求1的生長(zhǎng)激素溶液，其中的生長(zhǎng)激素組合物冷凍干燥前的PH值大于或等于7.8時(shí)，稀釋液還可含有一種與受體相容的非緩沖介質(zhì)。
3.權(quán)利要求1的生長(zhǎng)激素溶液，其中的生長(zhǎng)激素組合物冷凍干燥前的PH值大于或等于7.8時(shí)，稀釋液還可含有一種與受體相容的緩沖劑。
4.權(quán)利要求1，2或3的生長(zhǎng)激素溶液，其中的生長(zhǎng)激素可以是天然或合成的牛、豬、人、鳥(niǎo)、羊或馬的生長(zhǎng)激素或其具有生物活性的斷片類(lèi)似物。
5.權(quán)利要求4的生長(zhǎng)激素溶液，其中的生長(zhǎng)激素為豬生長(zhǎng)激素(PST)。
6.權(quán)利要求5的生長(zhǎng)激素，其中豬生長(zhǎng)激素為δ-7豬生長(zhǎng)激素。
7.權(quán)利要求4的生長(zhǎng)激素，其中生長(zhǎng)激素為金屬結(jié)合的生長(zhǎng)激素。
8.權(quán)利要求1，2或3的生長(zhǎng)激素溶液，其中非離子表面活化劑為聚氧乙烯-23-月桂醚(布里劑Brij35)，吐溫80或聚氧乙烯-20-鯨蠟醚(布里劑Brij58)，濃度為0.08-2.0%。
9.權(quán)利要求8的生長(zhǎng)激素溶液，其中非離子表面活化劑為brij35，其濃度大于或等于0.08%。
10.權(quán)利要求9的生長(zhǎng)激素溶液，其中非離子表面活化劑為Brij35時(shí)，濃度約為0.1-0.2%。
11.權(quán)利要求8的生長(zhǎng)激素溶液，其中非離子表面活化劑為吐溫80或Brij35時(shí)，其濃度約為0.08%-1.0%。
12.權(quán)利要求1或2的生長(zhǎng)激素溶液，其中緩沖劑為中性PH緩沖劑，濃度為0.2M-0.5M。
13.權(quán)利要求12的生長(zhǎng)激素溶液，其中緩沖劑為T(mén)ris HCl或磷酸鹽緩沖劑。
14.權(quán)利要求13的生長(zhǎng)激素溶液，其中緩沖劑為T(mén)ris HCl，其濃度為0.2M-0.3M。
15.權(quán)利要求3的生長(zhǎng)激素溶液，其中非緩沖成分的濃度約為0.1M-0.5M。
16.權(quán)利要求15的生長(zhǎng)激素溶液，其中非緩沖成分為蔗糖、海藻糖或氯化鈉。
17.權(quán)利要求1，2，3的生長(zhǎng)激素溶液，如果PH值小于7.6，其中EDTA的濃度大于或等于1.5mM;如果溶液PH值大于或等于7.6，其中EDTA的濃度則大于或等于1.0mM。
18.配制在機(jī)械振蕩下保持清徹，一段持續(xù)時(shí)間內(nèi)不會(huì)變混濁的生長(zhǎng)激素溶液的儀器，它包括一個(gè)內(nèi)裝由每2-8份鹽酸精氨酸1份生長(zhǎng)激素(重量比)制成的冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物的小瓶，其中該生長(zhǎng)激素組合物冷凍干燥前的PH值范圍為7.2-8.5;和一個(gè)內(nèi)裝稀釋液的小瓶，稀釋液含有EDTA，一種非離子表面活化劑，如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值在7.2-7.8之間，稀釋液還含有一種緩沖劑。
19.權(quán)利要求18的中的儀器，其中如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值大于或等于7.8時(shí)，稀釋液中還含有一種生物適合的非緩沖介質(zhì)。
20.權(quán)利要求18中的儀器，其中如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值大于或等于7.8時(shí)，稀釋液中還含有一種與受體相容的緩沖劑。
21.權(quán)利要求18，19或20的儀器，其中每毫升稀釋液溶解0.5mg-40mg冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物。
22.權(quán)利要求18，19或20的儀器，其中的生長(zhǎng)激素為天然或合成的牛、豬、人、鳥(niǎo)、羊或馬的生長(zhǎng)激素或其具有生長(zhǎng)活性的斷片或類(lèi)似物。
23.權(quán)利要求18，19或20的儀器，其中的表面活化劑為聚氧乙烯-23-月桂醚(Brij35)，吐溫80或聚氧乙烯-20鯨蠟醚(Brij58)其濃度為0.08%-2.0%。
24.權(quán)利要求18或20的儀器，其中的緩沖劑為T(mén)ris HCl，磷酸鹽，濃度為0.2M-0.5M。
25.權(quán)利要求19的儀器，其中的非緩沖成分為蔗糖、海藻糖或氯化鈉，濃度為0.1M-0.5M。
26.配制在機(jī)械振動(dòng)下保持清徹且較長(zhǎng)一段時(shí)間仍保持清徹的生長(zhǎng)激素溶液的方法，包括以下步驟(1)制備冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物溶解鹽酸精氨酸于生長(zhǎng)激素中，比例為1份生長(zhǎng)激素比2-8份鹽酸精氨酸，調(diào)節(jié)PH值至7.2-8.5范圍內(nèi)，用過(guò)濾和離心法除去不溶物，然后對(duì)生成溶液進(jìn)行冷凍干燥;(2)將生成的冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物溶解于含EDTA和一種非離子表面活化劑的稀釋液中，如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值在7.2-7.8之間，此稀釋液還含有一種緩沖劑。
27.權(quán)利要求26的方法，其中冷凍干燥前生長(zhǎng)激素合成物PH值大于或等于7.8，稀釋液還含有一種生物適合的非緩沖介質(zhì)，其濃度范圍為0.1M-0.5M。
28.權(quán)利要求26的方法，其中冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值大于或等于7.8時(shí)，稀釋液還含有一種中性與受體相容的緩沖液，其濃度范圍為0.2M-0.5M。
29.權(quán)利要求26或28的方法，其中的緩沖劑為T(mén)ris HCl或磷酸鹽緩沖劑。
30.權(quán)利要求27的方法，其中的非緩沖成分為蔗糖，海藻糖或氯化鈉。
31.權(quán)利要求26，27或28的方法，其中生長(zhǎng)激素是指天然或合成的牛、豬、人、鳥(niǎo)、羊或馬的生長(zhǎng)激素或其具有生物活性的斷片或類(lèi)似物。
32.權(quán)利要求26，27或28的方法，其中非離子表面活化劑為聚氧乙烯-23月桂醚(Brij35)，吐溫80或聚氧乙烯-20鯨蠟醚(Brij58)，濃度為0.08%-2.0%。
33.一種促進(jìn)生長(zhǎng)的方法，包括使用一種促生長(zhǎng)的含冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物的生長(zhǎng)激素溶液，組合物中每2-8份鹽酸精氨酸含1份生長(zhǎng)激素(重量比)，其中冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值為7.2-8.5，冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合成物溶于一種含有EDTA和一種非離子表面活化劑的稀釋液中，如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物PH值小于7.8，則稀釋液還含有一種緩沖劑。
34.一種促進(jìn)生長(zhǎng)的方法，包括使用一種促生長(zhǎng)的含冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物的生長(zhǎng)激素溶液，組合物中每2-8份鹽酸精氨酸含1份生長(zhǎng)激素(重量比)，其中冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的PH值為7.2-8.5。冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物的PH值為7.2-8.5，冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物溶于一種含有EDTA和一種非離子表面活化劑的稀釋液中，如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素合成物的PH值大于或等于7.8，則稀釋液還可選地含有一種緩沖劑或非緩沖介質(zhì)。
全文摘要
能較長(zhǎng)時(shí)間地保持清澈和在機(jī)械振蕩下保持清澈的生長(zhǎng)激素溶液，由混合含有1份生長(zhǎng)激素和2-8份鹽酸精氨酸(重量比)的經(jīng)冷凍干燥的生長(zhǎng)激素組合物和一種生物適合的稀釋液而制得。其中冷凍干燥前組合物的pH值為7.2-8.5，稀釋液含有EDTA和一種非離子表面活化劑。如果冷凍干燥前生長(zhǎng)激素組合物的pH值小于7.8，則稀釋液還含有一種緩沖劑；否則稀釋劑可選擇地含有一種緩沖劑或非緩沖介質(zhì)。
文檔編號(hào)A61K47/26GK1078910SQ93104030
公開(kāi)日1993年12月1日 申請(qǐng)日期1993年4月6日 優(yōu)先權(quán)日1992年4月7日
發(fā)明者J·E·西利, M·H·胡爾伯特, 小·C·W·里奇, H·E·奧爾 申請(qǐng)人:皮特曼-穆?tīng)栍邢薰?br>