專利名稱：含咪唑取代基的巰基烷基肽基化合物及其用作基質金屬蛋白酶(mmp)和/或腫瘤壞死因子 ...的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新的一類肽基衍生物及其在藥物中的用途。
背景技術：
金屬蛋白酶，包括基質金屬蛋白酶(MMP)，(人成纖維細胞)膠原酶，明膠酶和腫瘤壞死因子(TNF)，及其作用方式，抑制劑和它們的臨床作用被公開在WO-A-9611209中，其內容在此引作參考。
已經(jīng)顯示具有抑制與結締組織損壞有關的金屬蛋白酶，如膠原酶，溶基質素和明膠酶作用性質的化合物在體外和體內抑制TNF的釋放。參見Gearing等人(1994)《自然》(Nature)370555-557；McGeehan等人(1994)《自然》(Nature)370558-561；GB-A-2268934；和WO-A-9320047。所有這些報道的抑制劑均含有異羥肟酸鋅結合基團，正如公開在WO-A-9523790中的咪唑取代的化合物。抑制MMP和TNF的其它化合物公開在WO-A-9513289和WO-A-9611209中。
抑制膠原酶，具有類似于本發(fā)明化合物結構部分的化合物包括在US專利4,511,504(1985年4月16日頒布)和US專利4,568,666(1986年2月4日頒布)中包含的化合物中。
要求保護的抑制溶基質素(蛋白聚糖酶)的相關結構的化合物包括在US專利4,771,037(1988年9月13日頒布)中。
最近的報道說明MMP族一些新的酶也可以介導粘著分子如選擇蛋白，如L-選擇蛋白的排出。這些可溶性粘著分子與許多疾病包括癌癥，自身免疫和炎癥反應有關。已經(jīng)提出，這些分子一旦裂解，選擇蛋白就結合特定配體并且影響其生物活性。因此，干擾或防止配體與選擇蛋白結合的藥物將為治療上述各種疾病有用的藥物。
發(fā)明概述本發(fā)明包括新的式(I)巰基烷基肽基化合物，它們是基質金屬蛋白酶和/或TNFα介導的疾病包括變性疾病和某些癌癥的有用抑制劑。
本發(fā)明涉及新的通式(I)化合物及其鹽，溶劑化物和水合物
其中R1是C1-6烷基，C2-6鏈烯基，(C1-6烷基)芳基，芳基，C1-6烷基雜芳基，雜芳基或C1-6烷基-AR9基團，其中A是O，NR9或S(O)m，其中m＝0-2，及R9是H，C1-4烷基，芳基，雜芳基，(C1-4烷基)芳基或(C1-4烷基)雜芳基；如果A＝NR9基團，R9可以相同或不同；R2是氫或C1-6烷基；R3是[Alk]nR6基團，其中Alk是C1-6烷基或C2-6鏈烯基及n是0或1；X是NR9，O或S；Y是N或CR4；R4和R5相同或不同并且是R9，COR13，C1-3烷基-R13或C1-3烷基-COR13；R7是氫或R10CO，其中R10是C1-4烷基，C1-4烷基芳基，C1-4烷基雜芳基，環(huán)(C3-6)烷基，C1-4烷基-環(huán)(C3-6)烷基，C2-6鏈烯基，C2-6鏈烯基芳基，芳基或雜芳基；R8是芳基(可有可無地被R11取代)，雜芳基(可有可無地被R11取代)，C1-4烷基芳基(可有可無地被R11取代)，C1-4烷基芳基(可有可無地被R11取代)，C1-4烷基雜芳基(可有可無地被R11取代)，環(huán)(C3-6)烷基(可有可無地被R11取代)，環(huán)(C3-6)烯基(可有可無地被R11取代)或C1-4烷基-環(huán)(C3-6)烷基(可有可無地被R11取代)，基團
其中p＝1-2，或基團
其中B和C分別選自基團O，S，C(R9)2和NR9，并且R9彼此相同或不同；R6是AR9，環(huán)(C3-6)烷基，環(huán)(C3-6)鏈烯基，C1-6烷基，C1-6烷氧基芳基，芐氧基芳基，芳基，雜芳基，C1-3烷基雜芳基，C1-3烷基芳基，C1-6烷基-COOR9，脒，胍，C1-6烷基-NHR10，CONHR10，NHCO2R10，NHSO2R10或NHCOR10；R11是SO2R13，SR7，CO2R9，COR9，CON(R9)2(其中R9彼此相同或不同)，N(R9)2(其中R9彼此相同或不同)，NR9R12，OR9，苯二甲酰亞氨基或琥珀酰亞氨基；R12是氫或COR9，CO2R9(其中R9不是H)，CONHR9，或SO2R9(其中R9不是H)；及R13是N(R9)2(其中R9彼此相同或不同)，C1-4烷基，芳基，雜芳基，C1-4烷基芳基或C1-4烷基雜芳基。發(fā)明詳述應當理解，本發(fā)明化合物可以含有一個或多個不對稱取代的碳原子，例如，式(I)中用星號標示的那些碳原子。式(I)化合物中存在的一個或多個這些不對稱中心可以產(chǎn)生立體異構體，應當理解本發(fā)明包括每一種情況下的所有立體異構體，包括對映異構體和非對映異構體，及其外消旋混合物。
在結構式中，～線用在可能的不對稱中心以表示R-和S-構型的可能性，<和……線代表在不對稱中心的唯一構型。
在本說明書中，單獨或結合使用的術語“C1-6烷基”指具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基部分，包括，例如，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，叔丁基，戊基，己基等。
術語“C1-4烷基”指具有1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基部分，包括，例如，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，叔丁基等。
術語“C2-6鏈烯基”指具有2-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基部分并且另外有E或Z立體化學(如果適當)的一個雙鍵。該術語包括，例如，乙烯基，1-丙烯基，1-和2-丁烯基，2-甲基-2-丙烯基等。
術語“環(huán)(C3-6)烷基”指具有3-6個碳原子的飽和脂環(huán)部分，并且包括，例如，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基等。
術語“環(huán)(C3-6)鏈烯基”指具有3-6個碳原子的脂環(huán)部分并且另外具有一個雙鍵。該術語包括，例如，環(huán)戊烯基或環(huán)己烯基。
術語“芳基”指可有可無地被選自例如鹵素，三氟甲基，C1-6烷基，烷氧基，苯基等取代的苯基或萘基。
術語“鹵素”指氟，氯。溴或碘。
術語“雜芳基”指5-10個原子或至少一個原子選自O，N，或S的芳香環(huán)系，并且包括，例如呋喃基，硫代苯基，吡啶基，吲哚基，喹啉基等。
術語“保護的氨基”和“保護的羧基”指以本領域技術人員熟悉的方式保護的氨基和羧基。例如，氨基可以用芐氧羰基，叔丁氧羰基，乙?；缺Ｗo，或以苯二甲酰亞氨基等形式保護。羧基可以容易裂解的酯的形式保護，例如，甲基，乙基，芐基或叔丁基酯。
術語“烷氧基”指最多含有6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，如甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基，丁氧基，叔丁氧基等。
術語“C0-4烷基”指具有0-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基部分，包括，例如，甲基，乙基，丙基，異丙基等。
式(I)化合物的鹽包括可藥用鹽，例如從無機酸或有機酸衍生的酸加成鹽，如鹽酸鹽，氫溴酸鹽，對甲苯磺酸鹽，磷酸鹽，硫酸鹽，過氯酸鹽，乙酸鹽，三氟乙酸鹽，丙酸鹽，檸檬酸鹽，馬來酸鹽，琥珀酸鹽，乳酸鹽，草酸鹽，酒石酸鹽和苯甲酸鹽。
也可以與堿形成鹽。這種鹽包括從無機酸或有機堿衍生的鹽，例如，堿金屬鹽如鎂鹽或鈣鹽，及有機胺鹽如嗎啉，哌啶，二甲胺或二乙胺鹽。
當本發(fā)明化合物中“保護的羧基”是酯化的羧基時，其可以是式CO2Z代謝不穩(wěn)定的酯，其中Z可以是乙基，芐基，苯乙基，苯基丙基，a-或b-萘基，2，4-二甲基苯基，4-叔丁基苯基，2，2，2-三氟乙基，1-(芐氧基)芐基，1-(芐氧基)乙基，2-甲基-1-丙酰氧基丙基，2，4，6-三甲基芐氧基甲基或戊酰氧基甲基。
通式(I)化合物可通過任何本領域已知的適當?shù)姆椒ê?或下列方法制備。應當理解如果需要式(I)的特定立體異構體，在所述合成方法中可以使用適當同手型起始原料和/或用常規(guī)分離技術(例如HPLC)從混合物中拆分異構體。
本發(fā)明化合物可以通過下列方法制備。在下列描述和結構式中基團R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10，R11，R12，R13，A，B，C，X，Y和Z定義如上，除非特別說明。應當理解，在下述各種化合物中存在的，并且需要保留的功能基如氨基，羥基或羧基在任何反應開始前應是保護形式。在這種情況下，除去保護基可以是在特定反應的最終步驟。用于這種功能基適當?shù)谋Ｗo基對于本領域技術人員是顯而易見的。具體描述請參見《有機合成中的保護基》(Protective Group in Organic Synthesis)，WileyInterscience，T W Greene，PGM Wuts。
制備通式(I)化合物的方法包括通式(II)化合物的脫保護(例如通過水解)
其中R7代表適當?shù)谋Ｗo基(例如叔丁基，三苯甲基，苯甲酰基或乙酸酯)。
應當理解如果需要式(I)的特定立體異構體時，其可通過常規(guī)拆分技術如高效液相色譜獲得。當然，如果需要，在偶合反應中可以使用適當同手型的起始原料以產(chǎn)生式(I)的特定立體異構體。下面舉例說明。
通式(II)化合物可以通過式(III)的酸或其活性衍生物
其中R1，R7和R8定義如上，與式(IV)的胺偶合制備，
其中R2，R3，R5，X和Y定義如上。
式(III)化合物的活性衍生物包括，例如，酸酐或酰鹵，如酰氯。
偶合反應可以用這類胺化反應的標準條件進行。因此，該反應可以在溶劑，如惰性有機溶劑，例如醚如環(huán)醚如四氫呋喃，酰胺如取代的酰胺如二甲基甲酰胺，或鹵代烴如二氯甲烷，在低溫例如-30℃至室溫，如-20℃-0℃，可有可無地在堿，例如有機堿如胺，例如三乙胺或環(huán)狀胺如N-甲基嗎啉存在下進行。如果使用式(III)的酸，該反應可以在附加縮合劑，例如二亞胺如N，N-二環(huán)己基碳化二亞胺存在下進行，優(yōu)選在三唑如1-羥基苯并三唑存在下進行。另外，在與式(IV)的胺反應前，酸可以與氯甲酸酯例如氯甲酸乙酯反應。
式(III)的酸可以用公開在WO-A-9611209中的任何方法制備。
式(IV)的胺可以從(V)的酮通過還原胺化或相應的肟(VI)(可以容易地從式(V)制備)的還原制備。
通式(V)的酮可以從適當保護的(例如用SEM)咪唑通過用正丁基鋰在-78℃鋰化，接著與式R3-COOH(VII)的酸衍生物反應制備。式(VII)的適當?shù)乃嵫苌锇ㄋ狒?，酰胺或酰鹵，如酰氯。
通式(VII)的酸容易從商品起始原料用本領域技術人員已知的方法獲得。這些酸的一些酰胺也是商品。
作為本發(fā)明的進一步外延，可以通過適當保護的式H2N-CHR3-CHO(VIII)醛的標準環(huán)化反應，接著除去任何保護基制備雜環(huán)類如咪唑類，噁唑類，噻唑類和三唑類。例如，咪唑類可以通過適當保護的醛(VIII)與氨和乙二醛反應制備。通式(VIII)的醛可以通過相應的適當保護的α-氨基酸還原制備。
這種氨基酸及其衍生物可以光學純或外消旋形式獲得。在同手型形式中，它們提供通式(I)化合物對映有擇合成的不對稱結構單元。許多衍生物可容易地從商品起始原料用本領域技術人員已知的方法獲得。參見《肽合成應用》(Practice of Peptide Synthesis)，M.Bodanszk等人，Springer Verlag New York，(1984)，和WO-A-9221360。
式(I)化合物可通過其它式(I)化合物的相互轉化制備。因此，例如，其中R1是C1-6烷基的式(I)化合物可通過氫化(用適當溶劑例如乙醇中的鈀-炭)其中R1是C2-6鏈烯基的式(I)化合物制備。在另一個實例中，其中R7是式R10CO基團的式(I)化合物可通過酰化(用適當?shù)孽Ｂ萊10COCl，在堿如三乙胺的存在下，在適當?shù)娜軇┤缏却軇缍燃淄橹?其中R7是H的式(I)化合物制備。
所得終產(chǎn)物或中間體的混合物可以根據(jù)其組分的物理化學差異用已知方法分離為純的終產(chǎn)物或中間體，例如，通過色譜法，蒸餾，分級結晶，或在某些情況下如果需要或可能，通過形成鹽方式進行分離。
本發(fā)明化合物在體外顯示對溶基質素，膠原酶和明膠酶的抑制活性。本發(fā)明化合物在體外還顯示抑制TNFα釋放的活性。本發(fā)明化合物的活性和選擇性可用適當?shù)拿敢种圃囼灉y定，例如，在WO-A-9611209中的實施例A-H所述方法。另外，下面將給出熒光測定法。
本發(fā)明還涉及治療患有與上述基質金屬蛋白酶和/或TFNα有關的失調或疾病的患者(包括人和/或在牛奶房，肉類或皮毛工業(yè)中飼養(yǎng)的哺乳動物或寵物)，更具體地，該治療方法包括給予作為活性成分的式(I)的基質金屬蛋白酶抑制劑。
因此，式(I)的化合物可用于治療骨關節(jié)炎和類風濕性關節(jié)炎，及由于這些基質金屬蛋白酶(如在某些轉移性腫瘤細胞系中發(fā)現(xiàn)的那些)過度表達引起的疾病和癥狀。
如上所述，由于式(I)化合物是TFNα和MMPs的活性抑制劑，它們可用于人或獸藥中。因此，本發(fā)明另一方面涉及
處理(意指治療或預防)哺乳動物，特別是人的由TFNα和/或MMPs介導的疾病或癥狀的方法，該方法包括給哺乳動物服用有效量的上述式(I)化合物或其可藥用鹽；及式(I)化合物用于人或獸藥中，特別是處理(意指治療或預防)由TFNα和/或MMPs介導的疾病或癥狀；及式(I)化合物在制備處理(意指治療或預防)由TFNα和/或MMPs介導的疾病或癥狀的藥劑中的用途。
上述疾病或癥狀包括炎癥，自身免疫疾病，癌癥，心血管疾病，涉及組織損壞疾病如類風濕性關節(jié)炎，骨關節(jié)炎，骨質疏松，神經(jīng)變性，早老性癡呆，動脈粥樣硬化，充血性心律衰竭，中風，脈管炎，節(jié)段性回腸炎，潰瘍性結腸炎，多發(fā)性硬化癥，牙周炎，齦炎和涉及組織損壞如骨吸收，出血，凝固，急性期反應，惡質病和厭食，急性感染，HIV感染，發(fā)燒，休克癥狀，移植宿主排異反應，皮膚病，外科傷口愈合，牛皮癬，特應性皮炎，大皰性表皮松解，腫瘤生長，繼發(fā)性轉移血管生成和發(fā)病，眼科疾病，視網(wǎng)膜病，角膜潰瘍，再灌注損傷，偏頭痛，腦膜炎，哮喘，鼻炎，過敏性結膜炎，濕疹和過敏癥。
對于治療類風濕性關節(jié)炎，骨關節(jié)炎，和由基質金屬蛋白酶(如在某些轉移性腫瘤細胞系中發(fā)現(xiàn)的那些酶)過度表達引起的疾病和癥狀，或其它由基質金屬蛋白酶或TFNα產(chǎn)生增加介導的疾病，式(I)化合物可以被口服，表面，非腸道，通過噴霧吸入或直腸以含有無毒可藥用載體，輔劑和賦形劑的單位劑量制劑進行給藥。這里所用術語非腸道包括皮下注射，靜脈，肌內，胸骨內注射或灌注技術。另外，除了治療溫血動物如大鼠，小鼠，馬，牛，羊，狗，貓等，本發(fā)明化合物在用于人的治療中是有效的。
含有活性成分的藥物組合物可以是適于口服使用的形式，例如，片劑，錠劑，糖錠劑，水性或油性懸浮液，可分散粉劑或粒劑，乳劑，硬或軟膠囊，或糖漿或酏劑。適于口服使用的組合物可以根據(jù)本領域制備藥物組合物的任何已知方法制備并且這種組合物可含有一種或多種選自甜味劑，香味劑，著色劑和防腐劑的添加劑以提供精美可口的藥物制劑。片劑含有活性成分及與其混合的適于制備片劑的無毒可藥用賦形劑。這些賦形劑可以是，例如，惰性稀釋劑，如碳酸鈣，碳酸鈉，乳糖，磷酸鈣或磷酸鈉；成粒和崩解劑，例如玉米淀粉，或藻酸；粘合劑，例如淀粉，明膠或阿拉伯膠，和潤滑劑，例如硬脂酸鎂，硬脂酸或滑石。片劑可以是不包衣的或用已知技術包衣以延緩在胃腸道崩解和吸收，因此，它們提供在較長時間內的緩釋作用。例如，可以使用延長時間的物質如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。也可以用在US專利4,256,108；4,166,452和4,256,874中所述技術包衣以形成用于緩釋的滲透治療片劑。
用于口服的制劑也可以硬膠囊形式存在，其中活性成分與惰性固體稀釋劑混合，例如碳酸鈣，磷酸鈣或高嶺土，或以軟膠囊形式存在，其中活性成分與水或油介質，例如花生油，液體石蠟或橄欖油混合。
水性懸浮液含有活性成分及與其混合適于制備水性懸浮液的賦形劑。這種賦形劑是懸浮劑，例如羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素，羥基丙基甲基纖維素，藻酸鈉，聚乙烯吡咯烷酮，黃蓍膠和阿拉伯樹膠；分散劑或潤濕劑可以是天然磷脂，例如，卵磷脂，或烯化氧與脂肪酸的縮合產(chǎn)物，例如，聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物，例如，十七乙烯氧基十六烷醇，或環(huán)氧乙烷與從脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的縮合產(chǎn)物，如聚氧乙烯與從脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的縮合產(chǎn)物，例如，聚氧乙烯脫水山梨糖醇一油酸酯。水性懸浮液還可以含有一種或多種防腐劑，例如，乙基或正丙基，對羥基苯甲酸酯，一種或多種著色劑，一種或多種香味劑，和一種或多種甜味劑，如蔗糖或糖精。
油性懸浮劑可以通過將活性成分懸浮在植物油例如，花生油，橄欖油，芝麻油或椰子油中制備，或懸浮在礦物油如液體石蠟中制備。油性懸浮劑中可以含有增稠劑，例如，蜂蠟，硬石蠟或十六烷醇?？梢约尤肷鲜鎏鹞秳拖阄秳┮蕴峁┛煽诘目诜苿?。這些組合物可以通過加入抗氧化劑如抗壞血酸來防腐。
適于通過加入水制備水性懸浮液的可分散性粉劑和粒劑含有活性成分及與其混合的分散劑或潤濕劑，懸浮劑和一種或多種防腐劑。適宜的分散劑或潤濕劑及懸浮劑已經(jīng)列舉，還可以存在例如，甜味劑，香味劑和著色劑。
本發(fā)明藥物組合物也可以是水包油型乳劑。油相可以是植物油，例如，橄欖油或花生油，或礦物油，例如液體石蠟或其混合物。適宜的乳化劑可以是天然膠，例如阿拉伯樹膠或黃蓍膠，天然磷脂，例如大豆，卵磷脂，和從脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯，例如脫水山梨糖醇一油酸酯和所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯脫水山梨糖醇一油酸酯。乳劑還可以含有甜味劑和香味劑。
與甜味劑，例如甘油，丙二醇，山梨糖醇或蔗糖可以制成糖漿和酏劑。這種制劑中還可以含有緩和劑，防腐劑和香味劑和著色劑。藥物組合物可以是無菌可注射水性或油性懸浮液。這種懸浮液可根據(jù)本領域已知方法用上述適宜的分散劑或潤濕劑和懸浮劑制成制劑。無菌可注射制劑還可以是在無毒非腸道可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液?？梢允褂玫目山邮艿妮d體和溶劑是水，Rings溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，通常使用無菌的固定油作為溶劑或懸浮介質。為此，可以使用包括合成的一或二甘油酯在內的任何溫和的固定油。另外，脂肪酸如油酸可用于可注射制劑中。
式(I)化合物還可以以用于藥物直腸給藥的栓劑形式給藥。這些組合物可以通過混合藥物和在常溫是固體但在直腸的溫度是液體的適宜非刺激賦形劑制備，因此其可在直腸中熔化以釋放藥物。這種物質是可可脂和聚乙二醇。
對于表面應用，使用含有式(I)化合物的軟膏，油膏，凝膠，溶液或懸浮液。(對于這種應用目的，表面應用應包括口腔洗液和漱口液)。
對于治療上述疾病，劑量水平在約0.05mg-約140mg/kg體重/天是有用的(每個患者每天約2.5mg-約7g)。例如，給藥約0.01-50mg化合物/kg體重/天(每個患者每天約0.5mg-約3.5g)治療炎癥是有效的。
可與載體物質結合產(chǎn)生單劑量形式的活性成分的量依據(jù)要治療的患者和具體的給藥方式變化。例如，用于人口服給藥的制劑的活性成分可在總組合物的約5-約95％的量內變化。單劑型通常含有約1mg-約500mg活性成分。
當然，應當理解，對于任何特定的患者的具體劑量將取決于許多因素，包括使用的具體化合物的活性，患者的年齡，體重，健康狀況，性別，給藥時間，飲食，給藥途徑，排泄率，聯(lián)合使用的藥物和要治療疾病的嚴重程度。
下列非限定性實施例說明式(I)化合物的制備，但是并不意味著限制所附權利要求所述的本發(fā)明。
在實施例中，使用下列縮寫RT 室溫EDC 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽TNFα 腫瘤壞死因子αLPS 脂多糖ELISA 酶聯(lián)免疫吸附測定中間體1(S)-N-(芐氧羰基)亮氨醛在-78℃將(S)-N-(芐氧羰基)亮氨酸甲基酯(8.22g，29.4mmol)的無水甲苯(80ml)溶液用滴加二異丁基氫化鋁(1.0M，74ml，74mmol)的甲苯溶液處理。將該溶液在-78℃攪拌30分鐘，然后加入甲醇(3.5ml)淬滅反應。然后將冷的混合物加到攪拌的酒石酸氫鉀(200ml)水溶液中。再攪拌1小時后，將混合物用乙醚(3×200ml)萃取，用鹽水(400ml)洗滌合并的萃取液，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)得到無色油狀標題化合物。該物質不用純化直接用于下步。
類似方法制備中間體2(S)-N-(芐氧羰基)苯丙氨醛從(S)-N-(芐氧羰基)苯丙氨酸甲基酯(8.0g)制備，產(chǎn)物為無色油狀物，不用純化直接用于下步。中間體32-[1-(N-芐氧羰基氨基)-3-甲基]丁基咪唑將中間體1(29.4mmol)和乙二醛三聚體二水合物(10.36g，49.3mmol)的甲醇(150ml)溶液在-15℃用氨氣處理。在-10℃攪拌4小時后，將混合物溫熱至RT并攪拌過夜。將橙色懸浮液倒入水(400ml)中并過濾除去所得白色固體得到標題化合物(3.96g，47％)，為白色固體。TLC Rf0.42(5％ MeOH-CH2Cl2)類似方法制備中間體42-[1-(N-芐氧羰基氨基)-2-苯基]乙基咪唑從中間體2制備，產(chǎn)物為米色固體(4.1g，32％)。TLC Rf0.38(5％ MeOH-CH2Cl2)中間體5(S)-2-[1-(N-芐氧羰基氨基)-3-甲基]-1-(1，1-二甲基乙氧基羰基)丁基咪唑將二-叔丁基二碳酸酯(5.47g，25mmol)的二甲基甲酰胺(80ml)溶液滴加到在3℃攪拌著的中間體5(7.2g，25mmol)，二-異丙基乙胺(4.35ml，25mmol)和二甲氨基吡啶(92mg，0.75mmol)的二甲基甲酰胺(140ml)溶液中。將該混合物慢慢溫熱至RT并攪拌過夜。將棕色混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取三次。將合并的有機相用水洗滌3次及用鹽水洗滌1次，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)得到棕色油狀粗產(chǎn)物。用快速硅膠柱色譜純化，用20％乙酸乙酯-己烷洗脫得到淡黃色油狀所需產(chǎn)物。將該油狀物溶解在二氯甲烷(12ml)中并加入戊烷(50ml)。將該混合物放在冰箱中2小時，然后過濾除去沉淀并真空蒸發(fā)濾液得到淡黃色油狀標題化合物(7.70g，20mmol，79％)。TLC Rf 0.20(33％乙酸乙酯-己烷)；ee分析97.8％類似方法制備中間體6(S)-2-[1-(N-芐氧羰基氨基)-2-苯基]-1-(1，1-二甲基乙氧基羰基)乙基咪唑從中間體4制備，產(chǎn)物為淡黃色油狀物(3.52g，53％)。TLC Rf 0.16(33％乙酸乙酯-己烷)；ee分析97.5％中間體7(S)-2-[1-(N-芐氧羰基氨基)-3-甲基]丁基咪唑將三氟乙酸(15.3ml，198mmol)加到3℃攪拌著的中間體5(7.5g，19.3mmol)的二氯甲烷溶液中。將混合物慢慢溫熱至RT并攪拌過夜。真空蒸發(fā)混合物然后從庚烷和二氯甲烷的混合物中濃縮2次得到白色泡沫狀標題化合物(5.53g，100％)。TLC Rf 0.26(5％甲醇-二氯甲烷)類似方法制備中間體8(S)-2-[1-(N-芐氧羰基氨基)-2-苯基]乙基咪唑從中間體6制備，產(chǎn)物為淡黃色泡沫(2.5g，100％)。TLC Rf 0.32(5％甲醇-二氯甲烷)中間體9(S)-2-(1-氨基-3-甲基)丁基咪唑將中間體7的溶液在RT和大氣壓下用10％鈀-炭(50％w/w)的乙醇溶液氫化過夜。用hyflo過濾除去催化劑并蒸發(fā)濾液得到無色泡沫狀粗標題化合物，將其直接用于下步。
類似方法制備中間體10(S)-2-(1-氨基-3-苯基)乙基咪唑從中間體8制備，產(chǎn)物為淡黃色泡沫，不用純化直接用于下步。中間體115-琥珀酰亞氨基戊酸乙酯將二甲基甲酰胺(800ml)加到琥珀酰亞胺(248g，2.5mol)，碳酸鉀(346g，2.5mol)和5-溴戊酸乙酯(400g，1.9mol)的混合物中。將該混合物在110-120℃加熱3小時然后冷卻至室溫。加水(2.5L)然后將混合物用甲基叔丁基醚(4X1L)萃取。用水(400ml)洗滌合并的萃取液，干燥(MgSO4并真空蒸發(fā)得到淡黃色油狀標題化合物(310g，71％)。TLC Rf 0.3(甲基叔丁基醚)中間體125-琥珀酰亞氨基戊酸將中間體11(130g，572mmol)的正磷酸二氫鉀(50nM，650ml)溶液用Novozyme 435(2g)處理。加入NaOH(6N)以保持pH為7。3小時后過濾除去酶并用少量水洗滌。通過加入6N鹽酸酸化濾液至pHl，并真空濃縮濾液至約100ml然后用二氯甲烷(3×250ml)萃取。用鹽水(100ml)洗滌合并的萃取液。干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)得到白色固體狀標題化合物(99g，81％)。TLC Rf0.2(50％乙酸乙酯/己烷)中間體13(R，S)-2-溴-5-琥珀酰亞氨基戊酸將中間體12(60g，300mmol)的1，2-二氯乙烷(120ml)溶液在80℃用滴加亞硫酰氯(26.6ml，370mmol)處理。將該混合物攪拌30分鐘，然后加入三氯化磷(2.6ml，30mmol)。然后在20分鐘內滴加溴(18.6ml，360mmol)并將混合物在80℃攪拌16小時。將混合物冷卻至RT并加入水(200ml)；然后在50℃攪拌2.5小時。將混合物冷卻至RT，過濾收集沉淀并真空干燥得到淡橙色粉末狀標題化合物(82g，98％)。TLC Rf0.3(50％乙酸乙酯/己烷)中間體14(R，S)-2-乙?；鶐€基-5-琥珀酰亞氨基戊酸在5℃將中間體13(20g，72mmol)的四氫呋喃(100ml)溶液分批用硫代乙酸鉀(8.21g，72mmol)處理。將該混合物溫熱至RT并攪拌4小時。真空蒸發(fā)溶劑并將剩余物在甲基叔丁基醚(400ml)和水(40ml)中分配。分離有機相，用水(40ml)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)得到黃色油狀標題化合物(14.4g，78％)。TLC Rf0.3(50％乙酸乙酯/己烷)中間體15(1S)-[(N-芐氧羰基)-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑在0℃將N-芐氧羰基-L-(S-甲基)半胱氨酸(3.50g，14.8mmol)的四氫呋喃(60ml)溶液用中間體9(2.07g，13.5mmol)和EDC(2.82g，14.8mmol)處理。然后將該混合物溫熱至RT并攪拌過夜。真空濃縮混合物至約30ml并加入1N鹽酸(20ml)。將混合物用二氯甲烷(5×100ml)萃取并用鹽水(100ml)洗滌合并的萃取液，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)得到無色油狀標題化合物(3.40g，68％)。TLC Rf 0.3(5％ MeOH-CH2Cl2)類似方法制備中間體16(1S)-[(N-芐氧羰基)-L-正纈氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑從N-芐氧羰基-L-正纈氨酸(3.43g，15mmol)和中間體9(2.20g，14mmol)制備，產(chǎn)物為淡黃色油狀物(94％)TLC Rf 0.4(5％ MeOH-CH2Cl2)中間體17(1S)-[L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑在0℃將中間體15(3.40g，9.2mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液用三氟乙酸(11.4ml，14.8mmol)處理。然后將該混合物溫熱至RT并攪拌過夜。真空蒸發(fā)溶劑并將剩余物溶解在水(50ml)中。加入1N NaOH直到溶液pH達到8。然后將混合物用二氯甲烷(3×100ml)萃取，用鹽水(100ml)洗滌合并的萃取液，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)得到無色油狀標題化合物(0.99g，40％)。TLC Rf 0.1(5％ MeOH-CH2Cl2)
類似方法制備中間體18(1S)-(L-正纈氨酰)氨基-3-甲基-2-丁基咪唑從中間體16(5.0g，14mmol)制備，產(chǎn)物為白色固體(50％)。TLC Rf 0.2(5％ MeOH-CH2Cl2)實施例1(1S)-[[(2R，S)-乙?；鶐€基-5-苯二甲酰亞氨基]-戊?；?L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑將(R，S)-2-乙酰基巰基-5-苯二甲酰亞氨基戊?；?L-亮氨酸(WO-A-9611209的中間體122，1mmol)和中間體9(1mmol)的無水四氫呋喃(30ml)溶液用N-羥基苯并三唑(1mmol)和EDC(1mmol)處理并將混合物在RT攪拌過夜。用乙酸乙酯(100ml)稀釋混合物并用8％碳酸氫鈉(50ml)，1N鹽酸(50ml)，水(50ml)和鹽水(50ml)洗滌溶液，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)淡黃色泡沫。用快速硅膠柱色譜純化，用2-3％甲醇-二氯甲烷洗脫得到無色泡沫狀標題化合物(43％)。C29H39N5O5S[569.7]；MH+570類似方法制備實施例2(1S)-[[(2S)-乙酰基巰基-5-苯二甲酰亞氨基]-戊?；?L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑從(S)-2-乙酰基巰基-5-苯二甲酰亞氨基戊?；?L-(S-甲基)半胱氨酸(WO-A-9611209)和中間體9(0.65mmol)制備，產(chǎn)物為無色泡沫(46％)。C27H35N5O5S2[573.7]；MH+577實施例3(1S)-[[(2S)-乙酰基巰基-5-苯二甲酰亞氨基]-戊?；?L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-2-苯基-2-丁基咪唑從中間體2和中間體12(0.65mmol)制備，產(chǎn)物為無色泡沫(46％)。C30H33N5O5S2[607.8]；MH+608實施例4(1S)-[[(2S)-乙?；鶐€基-5-琥珀酰亞氨基]-戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑在RT，將中間體17(1.61g，5.96mmol)的四氫呋喃(32ml)溶液用中間體14(1.62g，5.96mmol)和EDC(1.25g，6.55mmol)處理。將混合物攪拌過夜。將混合物在乙酸乙酯(100ml)和水(75ml)中分配并分離有機相，用鹽水(50ml)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)得到黃色油狀物。用快速硅膠柱色譜純化，用60％乙酸乙酯-己烷洗脫得到無色泡沫狀標題化合物(1.60g，51％)。TLC Rf 0.3(5％ MeOH-CH2Cl2)類似方法制備實施例5(1S)-[[(2S)-乙?；鶐€基-5-琥珀酰亞氨基]-戊?；?L-正纈氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑從中間體18(1.76g，6.98mmol)和中間體14(1.90g，6.98mmol)制備，產(chǎn)物為白色固體油狀物(45％)。TLC Rf 0.3(5％ MeOH-CH2Cl2)實施例6(1S)-[[(2R，S)-巰基-5-苯二甲酰亞氨基]-戊?；?L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑在3℃將氨水溶液(SG 0.88，0.3ml)加到實施例1(120mg，0.21mmol)的甲醇溶液中。1小時后將混合物真空濃縮得到粗產(chǎn)物。用柱色譜純化，用2-3％甲醇的二氯甲烷洗脫得到白色固體標題化合物(76mg，68％)。C27H33N5O4S[515.7]；MH+516類似方法制備實施例7(1S)-[[(2S)-巰基-5-苯二甲酰亞氨基]-戊?；?L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑從實施例2(4.4g，7.67mmol)制備。用柱色譜純化粗產(chǎn)物，用2-3％甲醇的二氯甲烷洗脫得到白色固體標題化合物(3.0g，74％)。C25H33N5O4S2[531.7]；MH+532實施例8(1S)-[[(2S)-巰基-5-苯二甲酰亞氨基]-戊?；?L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑從實施例3(200mg，0.33mmol)制備。用柱色譜純化粗產(chǎn)物，用2-3％甲醇的二氯甲烷洗脫得到白色固體標題化合物(148mg，79％)。C28H31N5O4S2[565.7]；MH+566實施例9(1S)-[[(2S)-巰基-5-苯二甲酰亞氨基]-戊?；?L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-2-苯基-2-丁基咪唑從實施例3制備，產(chǎn)物為白色固體油狀物(89％)。TLC Rf 0.2(5％ MeOH-CH2Cl2)實施例10(1S)-[[(2S)-巰基-5-苯二甲酰亞氨基]-戊?；?L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑鹽酸鹽將鹽酸的乙醚(1.0M，5ml)溶液加到攪拌著的實施例7(40mg)的四氫呋喃(4ml)和甲醇(1ml)混合物溶液中。RT1小時后，真空濃縮混合物得到淡黃色固體鹽酸鹽。MMP抑制活性-熒光測定法可以用下列方法測定通式(I)化合物作為膠原酶-1(MMP-1)，膠原酶-2(MMP-8)，明膠酶-A(MMP-2)，明膠酶-B(MMP-9)和溶質基素-1(MMP-3)抑制劑的效力將抑制劑溶解在含有0.02％β-巰基乙醇的二甲亞砜中并制備系列稀釋液。在有和沒有抑制劑存在下，將活化酶在含有50mM Tris，pH7.4，5mMCaCl2，0.002％NaN3和Brij35的分析緩沖液中溫育。將樣品在37℃預溫育15分鐘，然后加入熒光底物(Mca-Pro-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2)至最終濃度10μM。測定物在37℃溫育90分鐘然后用熒光掃描儀II(FluoroscanII)在λex(355nm)和λem(460nm)處讀數(shù)。
將酶活性與沒有抑制劑的對照組的活性進行比較并且結果用50％抑制溶質基素的抑制劑濃度(IC50)表示。
權利要求
1.通式(I)化合物及其鹽，溶劑化物和水合物
其中R1是C1-6烷基，C2-6鏈烯基，(C1-6烷基)芳基，芳基，C1-6烷基雜芳基，雜芳基或C1-6烷基-AR9基團，其中A是0，NR9或S(O)m，其中m＝0-2，及R9是H，C1-4烷基，芳基，雜芳基，(C1-4烷基)芳基或(C1-4烷基)雜芳基；如果A＝NR9基團，R9可以相同或不同；R2是氫或C1-6烷基；R3是[Alk]nR6基團，其中Alk是C1-6烷基或C2-6鏈烯基及n是0或1；X是NR9，O或S；Y是N或CR4；R4和R5相同或不同并且是R9，COR13，C1-3烷基-R13或C1-3烷基-COR13；R7是氫或R10CO，其中R10是C1-4烷基，C1-4烷基芳基，C1-4烷基雜芳基，環(huán)(C3-6)烷基，C1-4烷基-環(huán)(C3-6)烷基，C2-6鏈烯基，C2-6鏈烯基芳基，芳基或雜芳基；R8是芳基(可有可無地被R11取代)，雜芳基(可有可無地被R11取代)，C1-4烷基(可有可無地被R11取代)，C1-4烷基芳基(可有可無地被R11取代)，C1-4烷基雜芳基(可有可無地被R11取代)，環(huán)(C3-6)烷基(可有可無地被R11取代)，環(huán)(C3-6)鏈烯基(可有可無地被R11取代)或C1-4烷基-環(huán)(C3-6)烷基(可有可無地被R11取代)，基團
其中p＝1-2，或基團
其中B和C分別選自基團O，S，C(R9)2和NR9，并且R9是相同的或不同的；R6是AR9，環(huán)(C3-6)烷基，環(huán)(C3-6)鏈烯基，C1-6烷基，C1-6烷氧基芳基，芐氧基芳基，芳基，雜芳基，C1-3烷基雜芳基，C1-3烷基芳基，C1-6烷基-COOR9，脒，胍C1-6烷基-NHR10，CONHR10，NHCO2R10，NHSO2R10或NHCOR10；R11是SO2R13，SR7，CO2R9，COR9，CON(R9)2(其中R9彼此相同或不同)，N(R9)2(其中R9彼此相同或不同)，NR9R12，OR9，苯二甲酰亞氨基或琥珀酰亞氨基；R12是氫或COR9，CO2R9(其中R9不是H)，CONHR9，或SO2R9(其中R9不是H)；及R13是N(R9)2(其中R9彼此相同或不同)，C1-4烷基，芳基，雜芳基，C1-4烷基芳基或C1-4烷基雜芳基。
2.權利要求1的化合物，其中R6不是脒或胍；如果R8是芳基，烷基或烷基芳基，其可被取代；及R11是SO2R13，SR7，COR13，N(R9)2，NR9R12，OR9，苯二甲酰亞氨基或琥珀酰亞氨基。
3.權利要求1的化合物，選自(1S)-[[(2R，S)-乙酰基巰基-5-苯二甲酰亞氨基]戊?；?L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑(1S)-[[(2S)-乙酰基巰基-5-苯二甲酰亞氨基]戊?；?L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑。
4.權利要求1的化合物，選自(1S)-[[(2S)-乙?；鶐€基-5-苯二甲酰亞氨基]戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-2-苯基-2-丁基咪唑(1S)-[[(2R，S)-巰基-5-苯二甲酰亞氨基]戊?；?L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑(1S)-[[(2S)-巰基-5-苯二甲酰亞氨基]戊?；?L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑和(1S)-[[(2S)-巰基-5-苯二甲酰亞氨基]戊?；?L-亮氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑及其鹽酸鹽。
5.權利要求1的化合物，選自(1S)-[[(2S)-乙?；鶐€基-5-琥珀酰亞氨基]-戊酰基-L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑和(1S)-[[(2S)-乙?；鶐€基-5-琥珀酰亞氨基]-戊酰基-L-正纈氨酰]氨基-3-甲基-2-丁基咪唑(1S)-[[(2S)-巰基-5-苯二甲酰亞氨基]-戊?；?L-(S-甲基)半胱氨酰]氨基-2-苯基-2-丁基咪唑。
6.上述權利要求之一的化合物，為單一對映異構體或非對映異構體，或這種異構體的混合物。
7.一種用于治療的藥物組合物，包括上述權利要求之一的化合物，和可藥用稀釋劑，或載體。
8.權利要求1-6之一的化合物在制備治療或預防與基質金屬蛋白酶相關的疾病或由TNFα或L-選擇蛋白sheddase介導的疾病的藥物中的應用。
9.權利要求8的用途，其中疾病選自癌癥，炎癥和炎癥疾病，組織變性，牙周疾病，眼科疾病，皮膚科疾病，發(fā)燒，心血管疾病，，出血，凝固，急性期反應，惡質病和厭食，急性感染，HIV感染，休克癥狀，移植宿主排異反應，自身免疫疾病，再灌注損傷，腦膜炎，偏頭痛。
10.權利要求8的用途，其中疾病選自腫瘤生長，血管生成，腫瘤發(fā)作和擴散，轉移，惡性腹水和惡性胸膜滲漏。
11.權利要求8的用途，其中疾病選自類風濕性關節(jié)炎，骨質疏松，骨關節(jié)炎，哮喘，多發(fā)性硬化癥，神經(jīng)變性，早老性癡呆，動脈粥樣硬化，中風，脈管炎，節(jié)段性回腸炎和潰瘍性結腸炎。
12.權利要求8的用途，其中疾病選自角膜潰瘍，視網(wǎng)膜病和外料傷口愈合。
13.權利要求8的用途，其中疾病選自牛皮癬，特應性皮炎，慢性潰瘍和大皰性表皮松解。
14.權利要求8的用途，其中疾病選自牙周炎和齦炎。
15.權利要求8的用途，其中疾病選自鼻炎，過敏性結膜炎，濕疹和過敏癥。
16.權利要求8的用途，其中疾病選自ristonosis，充血性心律衰竭，子宮內膜炎，動脈粥樣硬化和內硬化癥(endosclerosis)。
全文摘要
由于對金屬蛋白酶和腫瘤壞死因子的抑制作用,通式(Ⅰ)的含咪唑取代基的肽基化合物具有治療用途,其中R
文檔編號A61P43/00GK1202895SQ9619850
公開日1998年12月23日 申請日期1996年11月22日 優(yōu)先權日1995年11月22日
發(fā)明者A·D·巴克斯特, J·G·蒙塔納 申請人:達爾文發(fā)現(xiàn)有限公司