專(zhuān)利名稱(chēng)：淫羊藿苷的醫(yī)藥新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及淫羊藿苷在預(yù)防或治療細(xì)菌感染所致?lián)p傷及增強(qiáng)抗生素療效的藥物中的應(yīng)用，具體地涉及淫羊藿苷在預(yù)防或治療細(xì)菌感染引起的敗血癥、內(nèi)毒素血癥、內(nèi)毒素休克及增強(qiáng)抗生素療效中的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
細(xì)菌毒素分為內(nèi)毒素和外毒素，內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁中類(lèi)脂多糖體，位于細(xì)胞壁的最外層，生物活性十分復(fù)雜，對(duì)機(jī)體作用廣泛，可激活多種炎癥細(xì)胞釋放炎性介質(zhì)，引起炎癥反應(yīng)，能使臟器發(fā)生嚴(yán)重、復(fù)雜的病理變化，可引起休克、彌漫性血管凝血(DIC)、成人呼吸窘迫綜合癥(ARDS)、全身性炎性反應(yīng)綜合征(SIRS)和多臟器功能失常綜合征(MODS)等。目前在許多疾病過(guò)程中，均可出現(xiàn)革蘭氏陰性菌感染，如急性梗阻化膿性膽管炎、急性出血壞死性胰腺炎、大面積燒傷、腸梗阻、肝梗化、肝炎等。且革蘭氏陰性菌感染率逐年上升，故治療革蘭氏陰性菌所至的內(nèi)毒素血癥對(duì)避免許多危重癥的發(fā)生有著重要的臨床意義，從而成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究的重要課題之一。
淫羊藿苷是從淫羊藿中提取分離的活性成分，文獻(xiàn)報(bào)道其具有治療骨質(zhì)疏松、ED、抗自由基、穩(wěn)定細(xì)胞膜及抗肝損傷作用。中國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)文本CN1282584A中公開(kāi)了淫羊藿苷具有預(yù)防或治療性功能障礙和血管收縮的作用，但關(guān)于淫羊藿苷具有治療或預(yù)防細(xì)菌毒素感染所致?lián)p傷及增強(qiáng)抗生素療效的藥物中的作用未見(jiàn)報(bào)道；鑒于此，本發(fā)明人通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究，提供了淫羊藿苷在制備治療或預(yù)防細(xì)菌感染所致?lián)p傷、增強(qiáng)抗生素療效的藥物中的應(yīng)用。
淫羊藿苷分子式C33H40O15，分子量676.67，熔點(diǎn)225～230℃，化學(xué)結(jié)構(gòu)式

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了淫羊藿苷在制備治療或預(yù)防細(xì)菌感染所致?lián)p傷中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了淫羊藿苷在增強(qiáng)抗生素療效的藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明涉及的抗生素是具有抗革蘭氏陰性桿菌的抗生素，可以為β內(nèi)酰胺類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)或喹諾酮類(lèi)。
本發(fā)明提供了淫羊藿苷在預(yù)防或治療細(xì)菌感染所致?lián)p傷引起的敗血癥內(nèi)毒素血癥內(nèi)毒素休克中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了以淫羊藿苷為活性成分的用于預(yù)防或治療細(xì)菌感染所致?lián)p傷增強(qiáng)抗生素療效的藥物組合物該藥物組合物可以通過(guò)口服、注射途徑給藥可以以片劑丸劑顆粒劑膠囊懸浮液溶液糖漿注射劑的形式存在，注射用制劑優(yōu)選凍干粉針注射用靜脈乳劑本發(fā)明所提供的各種藥物劑型均可以以藥學(xué)常規(guī)方法制備而成。
本發(fā)明所述的淫羊藿苷在用于上述任一用途時(shí)，其使用劑量范圍為50～2000mg/天，優(yōu)選劑量范圍為100～500mg/天。
本發(fā)明人通過(guò)下列試驗(yàn)證實(shí)了淫羊藿苷在治療或預(yù)防細(xì)菌感染所致?lián)p傷及增強(qiáng)抗生素療效的藥物中的應(yīng)用，增強(qiáng)抗生素療效的藥物中的應(yīng)用試驗(yàn)例中，本文以阿莫西林作為抗生素的代表進(jìn)行研究，但不限于此試驗(yàn)所用的淫羊藿苷按文獻(xiàn)辛鐘成，Euy Kyung Kim，田貞姬，等.淫羊藿苷對(duì)陰莖海綿體的松弛效應(yīng)及其作用機(jī)制.科學(xué)通報(bào)，2001，46(6)485～9中所述方法提取分離制備，含量≥90％。
具體實(shí)施例方式制備例1淫羊藿苷注射劑制備稱(chēng)取1.00g淫羊藿苷，加入20ml正丁醇和30ml的丙二醇使皂苷完全融解，將0.15g鹽酸丁卡因0.02g的枸櫞酸加入到40ml注射用水中，使完全溶解，并將上述水溶液加入到藥物溶液中，混合均勻；以硼砂和硼酸調(diào)節(jié)pH值為5.5±1.0；加入0.1％的針用活性炭85℃保溫30分鐘，G3垂熔玻璃漏斗過(guò)濾，0.22um的微孔濾膜過(guò)濾；濾液分裝于7ml西林瓶中，每支裝量2ml。或經(jīng)凍干機(jī)凍干制成凍干粉針。
制備例2制備注射用淫羊藿苷乳劑

將淫羊藿苷、豆磷脂、膽固醇用乙醇溶解后加入到精制大豆油中，混合至澄明，并通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或通入氮?dú)庹舭l(fā)除去醇，得到含淫羊藿苷10mg/ml和50mg/ml膽固醇的大豆油溶液。將泊洛沙姆、甘油分散至注射用水中，在高速攪拌條件下，慢慢滴加含有淫羊藿苷的磷脂、膽固醇的油溶液到分散體系中，制成粗乳劑。將所得到的粗乳劑在壓力100Mpa的條件下，通過(guò)乳勻機(jī)進(jìn)一步乳化，乳化結(jié)束后于115℃，30min滅菌，分裝即得。
實(shí)驗(yàn)例1淫羊藿苷對(duì)小鼠內(nèi)毒素致死的影響試驗(yàn)1材料淫羊藿苷注射劑按制備例1制備。
內(nèi)毒素上海第二軍醫(yī)大學(xué)微生物教研室，批號(hào)020412。
二級(jí)昆明種小鼠，體重19～21g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(魯)20030020。
地塞米松磷酸鈉注射液天津藥業(yè)漣水有限公司，規(guī)格5mg，批號(hào)030825。
2方法與結(jié)果小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、地塞米松組、淫羊藿苷400mg/kg組、100mg/kg組、50mg/kg組、20mg/kg組、10mg/kg組，每組20只，雌雄各半。小鼠靜脈注射內(nèi)毒素20mg/kg后隨即靜脈給藥，空白對(duì)照組給予同體積的溶劑。記錄48h內(nèi)小鼠死亡時(shí)間、數(shù)量并計(jì)算死亡率。組間進(jìn)行X2檢驗(yàn)。
結(jié)果顯示靜脈給予不同劑量淫羊藿苷(10～400mg/kg)均能明顯降低內(nèi)毒素所致小鼠死亡(與空白對(duì)照組比較，P＜0.05或P＜0.01)。
表1淫羊藿苷對(duì)小鼠內(nèi)毒素致死的影響(n＝20)

與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01
實(shí)驗(yàn)2淫羊藿苷對(duì)內(nèi)毒素菌液致小鼠死亡的影響2.1材料二級(jí)昆明種小鼠，體重19～21g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(魯)20030020。
淫羊藿苷注射劑按制備例1制備。
內(nèi)毒素菌液取Ecoil菌種，置于盛滅菌的蛋白牛肉胨溶液的錐形瓶中，共制備3000mL，37℃恒溫水浴，搖床振搖48小時(shí)，取出，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取沉淀的菌泥，加入NS 50mL，振搖混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，棄去上清液，菌泥加入NS 50mL，細(xì)菌破碎儀破碎細(xì)菌，每次5分鐘，進(jìn)行4次，破碎完畢，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液，即得粗制的內(nèi)毒素菌液，稀釋備用。
2.2方法與結(jié)果小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、地塞米松組、淫羊藿苷400mg/kg組、100mg/kg組、50mg/kg組、20mg/kg組、10mg/kg組，每組20只，雌雄各半。小鼠靜脈注射稀釋的內(nèi)毒素菌液0.2mL后隨即靜脈給藥，空白對(duì)照組給予同體積的溶劑，記錄48h內(nèi)小鼠死亡時(shí)間、數(shù)量并計(jì)算死亡率。組間進(jìn)行X2檢驗(yàn)。
結(jié)果顯示，結(jié)果顯示靜脈給予不同劑量淫羊藿苷(10～400mg/kg)均能明顯降低內(nèi)毒素菌液所致小鼠死亡(與空白對(duì)照組比較，P＜0.05或P＜0.01)。
表2淫羊藿苷對(duì)內(nèi)毒素菌液致小鼠死亡的影響(n＝20)

與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01實(shí)驗(yàn)3淫羊藿苷對(duì)細(xì)菌致小鼠死亡的影響3.1材料淫羊藿苷注射劑按制備例2制備。
Ecoil菌液取Ecoil菌種，置于盛滅菌的蛋白牛肉胨溶液的錐形瓶中，共制備3000mL，37℃恒溫水浴，搖床振搖48小時(shí)，取出，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取沉淀的菌泥，加入NS50mL，振搖混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，棄去上清液，菌泥加入NS 50mL，即得Ecoil菌液，稀釋備用。
二級(jí)昆明種小鼠，體重19～21g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(魯)20030020。
3.2方法與結(jié)果小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、地塞米松組、淫羊藿苷400mg/kg組、100mg/kg組、50mg/kg組、20mg/kg組、10mg/kg組，每組20只，雌雄各半。小鼠靜脈注射稀釋的Ecoil菌液0.2mL后隨即靜脈給藥，空白對(duì)照組給予同體積的溶劑，記錄48h內(nèi)小鼠死亡時(shí)間、數(shù)量并計(jì)算死亡率。組間進(jìn)行X2檢驗(yàn)。
結(jié)果顯示，結(jié)果顯示靜脈給予不同劑量淫羊藿苷(10～400mg/kg)均能明顯降低Ecoil菌液所致小鼠死亡(與空白對(duì)照組比較，P＜0.05或P＜0.01)。
表3淫羊藿苷對(duì)Ecoil菌液致小鼠死亡的影響(n＝20)

與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01實(shí)驗(yàn)4淫羊藿苷對(duì)內(nèi)毒素致大鼠休克的影響4.1材料淫羊藿苷注射劑按制備例2制備。
PowerLab多導(dǎo)生理記錄儀(澳大利亞ADI-Instrument公司生產(chǎn))。
壓力傳感器(YP200型，河北高碑店新航機(jī)電設(shè)備有限公司，規(guī)格50g)。
內(nèi)毒素上海第二軍醫(yī)大學(xué)微生物教研室，批號(hào)020412。
Wistar大鼠，雌雄各半，體重230-260g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證SYXK(魯)20030020。
4.2方法與結(jié)果大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、地塞米松組、淫羊藿苷50mg/kg組、25mg/kg組，10mg/kg組，每組10只，雌雄各半。動(dòng)物稱(chēng)重后以3.5％戊巴比妥鈉1.0ml/kg腹腔麻醉。分離一側(cè)頸總動(dòng)脈，作動(dòng)脈插管，將動(dòng)脈插管的另一端連接到裝有三通閥的壓力傳感器上，壓力信號(hào)經(jīng)傳感器輸入PowerLab多導(dǎo)生理記錄儀，記錄正常的血壓，隨即靜脈注射內(nèi)毒素5mg/kg，10分鐘后靜脈給藥，空白對(duì)照組給予同體積的溶劑，觀察給藥后240min內(nèi)血壓(平均動(dòng)脈壓)的變化，組間T檢驗(yàn)。
結(jié)果顯示，靜脈給予不同劑量淫羊藿苷(10～50mg/kg)在不同的時(shí)間內(nèi)能顯著升高由內(nèi)毒素所致休克大鼠的血壓(與空白對(duì)照組比較，P＜0.05或P＜0.01)。
表4淫羊藿苷對(duì)內(nèi)毒素休克大鼠血壓的影響(n＝10)

與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01實(shí)驗(yàn)5淫羊藿苷對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠的影響5.1材料淫羊藿苷注射劑按制備例1制備。
內(nèi)毒素上海第二軍醫(yī)大學(xué)微生物教研室，批號(hào)020412。
D-半乳糖胺進(jìn)口分裝，5g/瓶，北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)030412。
鱟試劑試劑盒福建省福州新北生化工業(yè)有限公司，批號(hào)040430。
Wistar大鼠，雌雄各半，體重180-220g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證SYXK(魯)20030020。
5.2方法與結(jié)果大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、空白對(duì)照組、地塞米松組、淫羊藿苷50mg/kg組、25mg/kg組、10mg/kg組，每組10只，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食16h，不禁水。實(shí)驗(yàn)時(shí)經(jīng)尾靜脈注射D-半乳糖胺(300mg/kg)，立即經(jīng)胃內(nèi)灌注內(nèi)毒素(20mg/kg)進(jìn)行造模，隨即靜脈給藥，正常對(duì)照組靜脈注射生理鹽水但不造模，空白對(duì)照組給予同體積的溶劑，各組分別于給藥24小時(shí)后取血以鱟試劑產(chǎn)色基質(zhì)法測(cè)血漿中內(nèi)毒素水平。組間T檢驗(yàn)。
結(jié)果顯示，靜脈給予不同劑量淫羊藿苷(10～50mg/kg)能顯著降低內(nèi)毒素血癥大鼠血漿中內(nèi)毒素水平(與空白對(duì)照組比較，P＜0.05或P＜0.01)。
表5淫羊藿苷對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠血漿中內(nèi)毒素水平影響(n＝10)

與正常對(duì)照組比較，**P＜0.01；與空白對(duì)照組比較△P＜0.05，△△P＜0.01實(shí)驗(yàn)6淫羊藿苷對(duì)重度燒傷引起損傷大鼠的影響6.1材料淫羊藿苷注射劑按制備例1制備。
鱟試劑試劑盒(福建省福州新北生化工業(yè)有限公司，批號(hào)040430)Wistar大鼠，雌雄各半，體重180-220g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證SYXK(魯)20030020。
6.2方法與結(jié)果大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、空白對(duì)照組、地塞米松組、淫羊藿苷50mg/kg組、25mg/kg組、10mg/kg組，每組10只，雌雄各半。除正常對(duì)照組外，其余各組動(dòng)物腰部以下肢體去毛，80℃熱水燙傷30s，造成深I(lǐng)I度燒傷，制作大鼠重度燒傷休克模型。24小時(shí)后取血以鱟試劑產(chǎn)色基質(zhì)法測(cè)血漿中內(nèi)毒素水平。組間T檢驗(yàn)。
結(jié)果顯示，靜脈給予不同劑量淫羊藿苷(10～50mg/kg)能顯著降低重度燒傷大鼠血漿中內(nèi)毒素水平(與空白對(duì)照組比較，P＜0.05或P＜0.01)。
表6淫羊藿苷對(duì)重度燒傷大鼠的血漿中內(nèi)毒素水平影響(n＝10)

與正常對(duì)照組比較，**P＜0.01；與空白對(duì)照組比較△P＜0.05，△△P＜0.01
實(shí)驗(yàn)7淫羊藿苷對(duì)抗生素的增效試驗(yàn)7.1材料淫羊藿苷注射劑按制備例1制備。
Ecoil菌液取Ecoil菌種，置于盛滅菌的蛋白牛肉胨溶液的錐形瓶中，共制備3000mL，37℃恒溫水浴，搖床振搖48小時(shí)，取出，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取沉淀的菌泥，加入NS 50mL，振搖混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，棄去上清液，菌泥加入NS 50mL，即得Ecoil菌液，稀釋備用。
阿莫西林膠囊(齊魯制藥廠(chǎng)，規(guī)格0.25g/粒，批號(hào)030412)二級(jí)昆明種小鼠，體重19～21g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(魯)20030020。
7.2方法與結(jié)果小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、地塞米松組、阿莫西林15mg/kg組、阿莫西林30mg/kg組、阿莫西林15mg/kg+淫羊藿苷10mg/kg組、阿莫西林30mg/kg+淫羊藿苷10mg/kg組，每組20只，雌雄各半，靜脈注射稀釋的內(nèi)毒素菌液0.2mL，隨即各組給藥，阿莫西林灌胃給藥，淫羊藿苷靜脈給藥，空白對(duì)照組給予同體積的溶劑，記錄48h內(nèi)小鼠死亡時(shí)間、數(shù)量并計(jì)算死亡率。組間進(jìn)行X2檢驗(yàn)。
結(jié)果顯示，阿莫西林15mg/kg+淫羊藿苷10mg/kg組作用強(qiáng)度明顯優(yōu)于阿莫西林15mg/kg組；阿莫西林30mg/kg+淫羊藿苷10mg/kg組作用強(qiáng)度明顯優(yōu)于阿莫西林30mg/kg組；提示阿莫西林聯(lián)用淫羊藿苷能更加明顯降低由Ecoil菌液所致小鼠死亡率。
表7淫羊藿苷對(duì)Ecoil菌液致小鼠死亡的影響(n＝20)

與空白對(duì)照組比較，aP＜0.05，aaP＜0.01；與阿莫西林15mg/kg組比較bP＜0.05；與阿莫西林30mg/kg組比較cP＜0.05；與淫羊藿苷組比較dP＜0.05.
權(quán)利要求
1.淫羊藿苷在制備治療或預(yù)防細(xì)菌感染所致?lián)p傷中的應(yīng)用。
2.淫羊藿苷在預(yù)防或治療細(xì)菌感染所致?lián)p傷引起的敗血癥、內(nèi)毒素血癥、內(nèi)毒素休克中的應(yīng)用。
3.淫羊藿苷在增強(qiáng)抗生素療效的藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，抗生素是指具有抗革蘭氏陰性桿菌的抗生素，可以為β內(nèi)酰胺類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)或喹諾酮類(lèi)。
5.淫羊藿苷在用于權(quán)利要求1-4任一所述用途時(shí)，其使用劑量范圍為50～2000mg/天。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其優(yōu)選劑量范圍為100～500mg/天。
7.以淫羊藿苷為活性成分的用于預(yù)防或治療細(xì)菌感染所致?lián)p傷、增強(qiáng)抗生素療效的藥物組合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其可以以片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液、溶液、糖漿、注射劑的形式存在。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其優(yōu)選以?xún)龈煞坩?、注射用靜脈乳劑形式存在。
全文摘要
本發(fā)明提供了淫羊藿苷在制備治療或預(yù)防細(xì)菌感染所致?lián)p傷中的應(yīng)用，具體地涉及其在預(yù)防或治療細(xì)菌感染所致?lián)p傷引起的敗血癥、內(nèi)毒素血癥、內(nèi)毒素休克中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及其在增強(qiáng)抗生素療效的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1803139SQ20051004232
公開(kāi)日2006年7月19日 申請(qǐng)日期2005年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月10日
發(fā)明者田京偉, 孫盛茂, 蔣王林, 徐本明 申請(qǐng)人:山東綠葉天然藥物研究開(kāi)發(fā)有限公司