專利名稱：萘基和二氫化萘基中間體,化合物,組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥學(xué)和有機化學(xué)領(lǐng)域并提供了新的萘基和二氫化萘基化合物及其藥物組合物，其中這些化合物適用于治療與絕經(jīng)期后綜合癥，和子宮纖維性疾病，子宮內(nèi)膜異位以及主動脈平滑肌細(xì)胞增殖有關(guān)的各種醫(yī)學(xué)適應(yīng)癥。本發(fā)明進(jìn)一步涉及用于制備本發(fā)明藥物活性化合物的中間體。
“絕經(jīng)期后綜合癥”是用于描述時常影響已開始或結(jié)束了被稱作絕經(jīng)的生理變態(tài)的婦女的各種病理疾病的術(shù)語。盡管許多病理情況可考慮使用該術(shù)語，但絕經(jīng)后綜合癥的三種主要后果是長期以來醫(yī)學(xué)界最為關(guān)注的問題骨質(zhì)疏松，心血管效應(yīng)如血脂過多癥，以及雌激素依賴性癌癥，特別是乳腺癌和子宮癌。
骨質(zhì)疏松描述了一類起因于各種病因的疾病，但其特征表現(xiàn)為每單位體積骨質(zhì)凈損失。這種骨質(zhì)損失以及所發(fā)生的骨折的結(jié)果是骨骼不能對身體提供足夠結(jié)構(gòu)支持。一種最常見類型的骨質(zhì)疏松是與絕經(jīng)有關(guān)的骨質(zhì)疏松癥。大多數(shù)婦女在停經(jīng)后3至6年內(nèi)損失約20％至約60％骨小梁隔室內(nèi)的骨質(zhì)。這種快速損失一般與骨吸收和形成的增加有關(guān)。然而，這種吸收周期占主導(dǎo)，結(jié)果造成骨質(zhì)凈脫失。骨質(zhì)疏松是絕經(jīng)期后婦女常見的嚴(yán)重疾病。
據(jù)估計僅美國就有大約二千五百萬婦女患有這種疾病。骨質(zhì)疏松的結(jié)果對人是有害的，并且由于這種病的長期性以及這種病后遺癥需要多方面和長期的援助(住院和家庭護(hù)理)還將造成巨大的經(jīng)濟損失。對年齡較大的病人更是如此。此外，盡管骨質(zhì)疏松一般不被認(rèn)為是有生命危險的病癥，但仍有20％至30％老年婦女的死亡率與髖骨骨折有關(guān)。這種死亡率中有較大百分比可能直接與絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松有關(guān)。
骨內(nèi)與絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松的作用有關(guān)的最易損傷的組織是小梁骨。這種組織通常稱作海綿狀或網(wǎng)狀骨質(zhì)且主要集聚在骨末端周圍(靠近關(guān)節(jié))和脊柱的椎骨中。小梁組織的特征是具有較少的彼此間相互連結(jié)的骨質(zhì)結(jié)構(gòu)，以及形成骨外表面和中干的較緊密的皮質(zhì)組織。這種相互連結(jié)的小梁網(wǎng)絡(luò)提供了對表面皮質(zhì)結(jié)構(gòu)的周邊支持并對總結(jié)構(gòu)的生物力學(xué)強度十分關(guān)鍵。在絕經(jīng)期后的骨質(zhì)疏松中，導(dǎo)致骨衰竭和骨折的主要原因是小梁的凈吸收和損失。鑒于絕經(jīng)期后婦女小梁的損失，故那些與高度依賴小梁支柱的骨，如椎骨及承重骨如股骨和前臂的頸有關(guān)的骨折最為常見毫不令人驚奇。的確，髖骨骨折，Collies骨折，以及椎骨粉碎性骨折為絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松的標(biāo)志。
目前，治療絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松癥唯一可被廣泛接受的方法是雌激素替補療法。盡管這種療法一般是成功的，但接受這種療法的病人則十分稀少，這主要是由于雌激素治療常常會產(chǎn)生不良的副作用。
與同齡男性相比，大多數(shù)婦女在絕經(jīng)前心血管疾病的發(fā)生率較低。但絕經(jīng)之后，女性患心血管疾病的機會則緩慢增加到與男性相當(dāng)。這種保護(hù)作用的喪失與雌激素的損失有關(guān)，特別是與雌激素調(diào)節(jié)血清脂質(zhì)水平的能力喪失有關(guān)。雌激素調(diào)節(jié)血清脂質(zhì)能力的特性尚不能被充分認(rèn)識，但至今有證據(jù)表明雌激素可以上調(diào)肝臟內(nèi)的低密度脂質(zhì)(LDL)受體的水平以除去過量膽甾醇。另外，雌激素看來似乎對膽甾醇的生物合成具有一些作用，并對心血管健康具有其它有益作用。
已有文獻(xiàn)報道接受雌激素替補療法的絕經(jīng)期后婦女體內(nèi)的血清脂質(zhì)水平回復(fù)到絕經(jīng)前狀態(tài)的濃度。由此看來雌激素是這種病癥的適當(dāng)治療藥物。然而，雌激素替補療法的副作用對許多婦女來講是不能被接受的，這樣就限制了這種療法的應(yīng)用。對于這種病癥的理想療法是能和雌激素一樣調(diào)節(jié)血清脂質(zhì)水平，但無雌激素治療時所存在的副作用和危險的藥物。
與絕經(jīng)期后綜合癥有關(guān)的第三種主要病理性疾病是雌激素依賴性乳腺癌，以及相對較少的其它器官，尤其是子宮的雌激素依賴性癌癥。盡管這類腫瘤并不限于絕經(jīng)期后的婦女，但在年齡較大的絕經(jīng)期后的婦女中更普遍。這些癌癥的通用化學(xué)療法主要依賴于使用抗雌激素劑如它莫西芬。盡管這種混合興奮劑-拮抗劑在治療這些癌癥方面具有有益作用，而且在緊急威脅生命情況下雌激素的副作用可以忍受，但它們?nèi)圆焕硐搿＠?，由于它們的雌激?興奮劑)性質(zhì)，它們可能對子宮中某些癌細(xì)胞種群具有刺激作用，因此，在某些情況下它們?yōu)榭巩a(chǎn)生性的。對于這些癌癥的治療，更好的治療物是抗雌激素化合物，它們對生殖組織具有可以忽略不計的或根本不存在雌激素興奮特性。
為滿足能減輕尤其是絕經(jīng)期后綜合癥癥狀的新藥需要，本發(fā)明提供了新的萘和二氫化萘化合物，其藥物組合物，以及使用這類化合物治療絕經(jīng)期后綜合癥和其它雌激素相關(guān)的病理性病癥(如下面所述病癥)的方法。
子宮纖維變性(子宮纖維性疾病)是一種古老且到目前仍存在的臨床難題，它具有多種名稱，包括子宮纖維性疾病、子宮肥大，子宮增生、子宮肌層肥大、子宮纖維變性、以及纖維變性子宮炎。實質(zhì)上，子宮纖維變性是子宮壁上纖維性組織不適當(dāng)沉積的病癥。
這種病癥是造成婦女痛經(jīng)和不育的起因。這種病癥的確切起因尚未被認(rèn)識，但有證據(jù)表明這是由纖維性組織對雌激素的不適當(dāng)應(yīng)答引起的。這種病癥可通過每天對兔子施用雌激素連續(xù)3個月而產(chǎn)生。通過連續(xù)4個月每天給用雌激素也可在豚鼠體內(nèi)產(chǎn)生這種病癥。此外，雌激素也可以在大鼠體內(nèi)引起類似肥大。
治療子宮纖維變性的最常用的方法包括外科手術(shù)，但這種方法費用昂貴而且有時又會產(chǎn)生并發(fā)癥如造成腹粘連和感染。對于某些病人，外科手術(shù)只是暫時性的治療而且子宮肌瘤會再生長。在這些情況下，進(jìn)行子宮切除能有效根除纖維變性但也終止了病人的生殖生命。同樣也可施用促性腺激素釋放激素拮抗劑，然而由于它們能導(dǎo)致骨質(zhì)疏松，故它們的使用也逐漸減少。因此，目前仍需要治療子宮纖維變性的新方法。本發(fā)明的方法能滿足這種需要。
子宮內(nèi)膜異位是一種嚴(yán)重痛經(jīng)病癥，這種病伴有劇烈疼痛，并出血到子宮內(nèi)膜塊或腹膜腔內(nèi)，而且常常會導(dǎo)致不育。這種病癥的癥狀起因似乎是異位子宮內(nèi)膜生長，這種生長是對正常激素控制的不當(dāng)反應(yīng)并定位于不適當(dāng)?shù)慕M織中。由于子宮內(nèi)膜生長的不適當(dāng)位置，組織似引發(fā)造成巨噬細(xì)胞浸潤的局部炎癥樣反應(yīng)和一系列導(dǎo)致引發(fā)疼痛反應(yīng)的活動。這種疾病確切的病因?qū)W尚未被充分認(rèn)識，其激素療法治療也有多種人們不清楚的方面，并且具有許多不希望的甚至可能有危險的副作用。
治療這種疾病的方法之一是使用低劑量雌激素通過對中央促性腺激素釋放和隨后卵巢雌激素生成的負(fù)反饋效應(yīng)抑制子宮內(nèi)膜生長；但是，有時有必要持續(xù)使用雌激素以控制該癥狀。這種雌激素的使用常常能產(chǎn)生不良副作用，以及甚至有產(chǎn)生子宮內(nèi)膜腫瘤的危險性。
另一治療方法包括連續(xù)使用誘發(fā)閉經(jīng)的孕激素并通過抑制卵巢雌激素的生成可以造成子宮內(nèi)膜生長停滯。長期孕激素療法的使用常常伴有不希望的孕激素CNS副作用，并且由于抑制卵巢功能而常常引起不育。
第三種治療方法包括施用弱雄激素，這種激素對子宮內(nèi)膜異位是有效的；但是，它們誘發(fā)嚴(yán)重的男性化作用。這幾種治療子宮內(nèi)膜異位的方法在連續(xù)治療時導(dǎo)致輕微程度骨損失有關(guān)。因此，人們?nèi)孕枰委熥訉m內(nèi)膜異位的新方法。
主動脈平滑肌細(xì)胞增殖在如動脈粥樣硬化和再狹窄等疾病中起著重要作用。經(jīng)皮經(jīng)經(jīng)腔冠脈成形術(shù)(PTCA)之后的血管再狹窄已顯示為早期階段和后期階段所表征的組織反應(yīng)。發(fā)生在PTCA后數(shù)小時或數(shù)天的早期階段是由伴有一些血管痙攣的血栓造成的，而后期階段似乎是由主動脈平滑肌細(xì)胞的過度增殖和遷移所造成。在這種疾病中，增加的細(xì)胞能動性和由這類肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞所引起的移生對這種疾病的發(fā)病機理產(chǎn)生顯著影響。血管主動脈平滑肌細(xì)胞的過度增殖和遷移可能是在PTCA、粉瘤切除術(shù)、激光血管成形術(shù)和動脈分流術(shù)之后冠狀動脈再閉塞的主要機理。參見“Intimal Proliferation of Smooth Muscle Cellsas an Explanation for Recurrent Coronary Artery Stenosis after PercutaneousTransluminal Coronary Angioplasty”，Austin等人，美國心臟學(xué)院雜志(Jorunalof the American College of Cardiology)，8369-375(1985年8月)。
在通過經(jīng)皮經(jīng)經(jīng)腔冠脈成形術(shù)(PTCA)、粉瘤切除術(shù)、激光血管成形術(shù)和動脈分流術(shù)的阻斷動脈手術(shù)之后，血管再狹窄仍然是主要的長期并發(fā)癥。約有35％接受PTCA的患者在手術(shù)后的三至六個月內(nèi)發(fā)生再閉塞。治療血管再狹窄的現(xiàn)行對策包括用裝置如支架進(jìn)行機械介入術(shù)或藥物治療包括用肝素、低分子量肝素、香豆素、阿司匹林、魚油、鈣拮抗劑、類固醇和前列環(huán)素治療。這些對策未能控制再閉塞率并且對血管再狹窄的治療和預(yù)防是無效的。參見“經(jīng)皮經(jīng)經(jīng)腔冠狀血管成形術(shù)后再狹窄的防治‘胂凡納明’的探究”，Hermans等，美國心臟雜志(American Heart Journal)，122171-187(1991年7月)。
在再狹窄的發(fā)病機理中，細(xì)胞過度增殖和遷移是血液和損傷動脈血管壁上的細(xì)胞成分產(chǎn)生的生長因子引起的結(jié)果，而這一因子可在血管再狹窄中介導(dǎo)平滑肌細(xì)胞的增殖。
能抑制主動脈平滑肌細(xì)胞增殖和/或遷移的藥物適用于治療和預(yù)防再狹窄。本發(fā)明提供了化合物作為主動脈平滑肌細(xì)胞增殖抑制劑并因此作為再狹窄抑制劑的的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及式I化合物或其可藥用鹽
其中R1為-H、-OH、-O(C1-C4烷基)、-OCOC6H5、-OCO(C1-C6烷基)或-OSO2(C4-C6烷基)；R2為C1-C6烷基或C5-C7環(huán)烷基，它們?nèi)芜x地被1-3個選自下面的取代基取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、氨基、硝基和鹵素；X為-CH(OH)-或-CH2-；M為-CH2CH2-或-CH＝CH-；n為2或3；和R3為1-哌啶基、1-吡咯烷基、甲基-1-吡咯烷基、二甲基-1-吡咯烷基、4-嗎啉代、二甲氨基、二乙氨基或1-六亞甲基亞氨基。
本發(fā)明還提供了式IIIf中間體或其可藥用鹽
其中R1a為-H、-OH、或-O(C1-C4烷基)；R2為C1-C6烷基或C5-C7環(huán)烷基，它們?nèi)芜x地被1-3個選自下面的取代基取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、氨基、硝基和鹵素；M為-CH2CH2-或-CH＝CH-；和Y1為-OH，-OCH3或-O(CH2)n-Z，其中n為2或3，且Z為離去基團。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及藥物組合物，它包含式I化合物，其中任選地含有雌激素或孕激素，還涉及這類化合物可以單獨或與雌激素或孕激素聯(lián)合用于緩解絕經(jīng)期后綜合癥，特別是骨質(zhì)疏松癥，心血管相關(guān)病理性病癥，以及雌激素依賴性癌癥的應(yīng)用。這里所用的術(shù)語“雌激素”包括具有雌激素活性的甾族化合物，例如17β-雌二醇、雌酮、結(jié)合雌(Premarin)、孕馬雌激素、17β-乙炔基雌二醇等。這里所用的術(shù)語“孕激素”包括具有促孕激素活性的化合物，例如孕甾酮、異炔諾酮、nongestrel甲地孕酮、乙酸鹽、炔諾酮等。
本發(fā)明一方面包括式I化合物或其可藥用鹽
其中R1為-H、-OH、-O(C1-C4烷基)、-OCOC6H5、-OCO(C1-C6烷基)或-OSO2(C4-C6烷基)；R2為C1-C6烷基或C5-C7環(huán)烷基，它們?nèi)芜x地被1-3個選自下面的取代基取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、氨基、硝基和鹵素；X為-CH(OH)-或-CH2-；M為-CH2CH2-或-CH＝CH-；n為2或3；和R3為1-哌啶基、1-吡咯烷基、甲基-1-吡咯烷基、二甲基-1-吡咯烷基、4-嗎啉代、二甲氨基、二乙氨基或1-六亞甲基亞氨基。
本文所述化合物的定義中所用的一般術(shù)語具有其通常的含義。例如，“C1-C6烷基”是指具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈脂族鏈，并包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、正丁基、戊基、異戊基、己基、異己基等。同樣術(shù)語“C1-C4烷氧基”表示通過氧連結(jié)的C1-C4烷基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基等。這些C1-C4烷氧基基團中，極其優(yōu)選甲氧基。
制備本發(fā)明化合物途徑之一中的起始原料(即下述式II化合物)基本上按USP 4230862(1980年10月28日公告)中所述的方法制備，該文獻(xiàn)在此并入本文用作參考。
其中R1b為-H或-O(C1-C4烷基)；和Y為甲氧基或R3-(CH2)n-O-，其中R3和n的定義同上。優(yōu)選R1b為甲氧基，Y為R3-(CH2)n-O-，R3為1-哌啶基，以及n為2。
一般來講，是將下式四氫萘酮(此化合物易從市場上購得或用已知方法制備)或其鹽
其中R1b的定義同上，與?；瘎┤缦率降谋郊姿岜锦シ磻?yīng)
其中Y的定義同上。此反應(yīng)一般是在中強堿如氨基鈉存在下于室溫或低于室溫的溫度下進(jìn)行。
對于下步反應(yīng)，一種方案是使所選擇的式II化合物在轉(zhuǎn)化成烯醇磷酸酯衍生物(通常是就地形成的)之后，于格利雅反應(yīng)條件下，與下式格利雅試劑反應(yīng)R2-MgBr其中R2為C1-C6烷基或環(huán)烷基，它們?nèi)芜x地被1-3個選自下面的取代基取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、氨基、硝基和鹵素，得到下述式IIIa化合物或其可藥用鹽，此通式化合物也是本領(lǐng)域公知的(例如，參見上述的USP4230862)。在制備本發(fā)明化合物過程中，R2為羥基環(huán)己基，特別是4-羥基環(huán)己基時，R2取代基的構(gòu)型是反式的。但這里的立體構(gòu)型并不涉及到整個說明書。
其中R1b、R2、和Y的定義同上。另一方面，還可采用銅媒體化學(xué)利用下式銅試劑制備式IIIa化合物(R2)2CuLi這類試劑是本領(lǐng)域公知的并可以通過反應(yīng)相應(yīng)的格利雅試劑和合適的銅物質(zhì)(如CuBr-二甲硫配合物)制備。
其中M為-CH＝CH-的式I化合物用下文所述的方法制備。然而，當(dāng)需要其中M代表-CH2CH2-的優(yōu)選式I化合物時，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能認(rèn)識到，芳構(gòu)化實際上可以在本文所述方法的任何階段完成。一般采用標(biāo)準(zhǔn)方法芳構(gòu)化式IIIa化合物。通常是將需要的二氫萘基底物與約2當(dāng)量2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)在惰性溶劑或溶劑混合物存在下反應(yīng)，所述溶劑如二噁烷、二氯甲烷、甲苯、二氯乙烷或苯。反應(yīng)混合物通常加熱回流約1-2小時，爾后在室溫下攪拌約36-約72小時。
當(dāng)式IIIa化合物中的Y為R3-(CH2)n-O-時，這類化合物可按下文所述進(jìn)行還原或脫保護(hù)。當(dāng)式IH化合物中的Y為甲氧基(式IIIb化合物)時，采用下文流程I中所示的合成途徑之一進(jìn)行。在流程I中，R1b、R2、R3、M和n的定義同上。
流程I
流程I中合成途徑A和B的每一步都可用本專業(yè)技術(shù)人員公知的方法進(jìn)行。
例如，式IIIc化合物通過在回流條件下用吡啶鹽酸鹽處理式IIIb化合物制得。在這些條件下，倘如R1b為烷氧基，該基團將被脫烷基成羥基。采用此方法將消除這種烷氧基在隨后階段中如果需要的脫保護(hù)步驟。
另一方面，式IIIb中的Y甲氧基基團可被選擇性脫甲基，這可以通過在約80℃-約100℃中等溫度下，在惰性溶劑如N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中用等當(dāng)量乙硫醇鈉處理化合物完成。此步驟的反應(yīng)進(jìn)程可用標(biāo)準(zhǔn)色譜技術(shù)(如薄層色譜法(TLC))監(jiān)測。
一旦制得式IIIc化合物，可使其與下式化合物反應(yīng)R3-(CH2)n-Q其中R3的定義同上，Q為溴或(優(yōu)選)氯，得到式IIId化合物。此反應(yīng)為流程I中途徑A的最后步驟。
在正常烷基化條件下，此反應(yīng)在式IIIc分子中可能存在的每一羥基上進(jìn)行。然而，4-羥基苯甲?；鶊F的選擇性烷基化可通過在過量細(xì)粉碳酸鉀存在下，使用等當(dāng)量至稍過量的R3-(CH2)n-Q反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)實現(xiàn)。
為制備式IIIe化合物，如流程I的途徑B所示，使式IIIc化合物與過量下式烷基化劑在堿性溶液中反應(yīng)Z-(CH2)n-Z′其中Z和Z′各自為相同或不同的離去基團。
合適的離去基團包括，例如，磺酸酯如甲磺酸酯、4-溴磺酸酯、甲苯磺酸酯、乙磺酸酯、異丙烷磺酸酯、4-甲氧基苯磺酸酯、4-硝基苯磺酸酯、2-氯苯磺酸酯等，鹵素如溴、氯、碘等，以及其它相關(guān)基團。優(yōu)選的烷基化劑為1，2-二溴乙烷，而且每等量底物使用至少2等量，優(yōu)選大于2等量1，2-二溴乙烷。
此烷基化反應(yīng)所用的堿性溶液優(yōu)選含有溶在惰性溶劑(如甲基乙基酮(MEK)或N，N-二甲基甲酰胺)中的碳酸鉀。在這種溶液中，式IIId化合物中的苯甲酰基部分的4-羥基基團轉(zhuǎn)化成酚鹽離子，此離子置換有關(guān)烷基化劑的離去基團。
此反應(yīng)最好通過加熱含有反應(yīng)物和試劑的堿性溶液來進(jìn)行，并使之進(jìn)行完全。當(dāng)使用MEK作為優(yōu)選溶劑時，反應(yīng)時間為大約6小時至約20小時。
而后用常規(guī)技術(shù)使得自該步的反應(yīng)產(chǎn)物(即式IIIe化合物)與1-哌啶、1-吡咯烷、甲基-1-吡咯烷、二甲基-1-吡咯烷、4-嗎啉、二甲胺、二乙胺或1-六亞甲基亞胺反應(yīng)，形成式IIId化合物。優(yōu)選哌啶鹽酸鹽與式IIIe化合物在惰性溶劑(如無水N，N-二甲基甲酰胺)中反應(yīng)并加熱至約60℃至約110℃。當(dāng)混合物加熱到約90℃的優(yōu)選溫度時，上述反應(yīng)僅需要約30分鐘至約1小時。然而，改變反應(yīng)條件將影響反應(yīng)進(jìn)行完全所需要的時間。當(dāng)然，此反應(yīng)步驟的進(jìn)程可以通過標(biāo)準(zhǔn)色譜技術(shù)監(jiān)測。
其中苯甲?；糠值?-羥基被脫保護(hù)的式IIIe化合物、IIIc化合物在此可共同地稱作式IIIf化合物(如下所示)
其中R1a為-H、-OH、或-O(C1-C4烷基)；R2為C1-C6烷基或C5-C7環(huán)烷基，它們?nèi)芜x地被1-3個選自下面的取代基取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、氨基、硝基和鹵素；M為-CH2CH2-或-CH＝CH-；和Y1為-OH、-OCH3或-O(CH2)n-Z，其中n為2或3，且Z為離去基團；或它們的可藥用鹽。
這類式IIIf化合物為新的且可用作制備本發(fā)明的式I藥物活性化合物的中間體。
式IIId化合物為如下文流程II中所示的制備式Ia和Ib藥物活性化合物的一種方法的起始物質(zhì)。
流程II
其中R1a、R1b、R2、R3、M和n的定義同上。
在流程II中，將式IIId化合物或其鹽加到合適溶劑中并與還原劑(例如氫化鋁鋰(LAH))反應(yīng)。雖然游離堿形式的式IIId化合物可用于此反應(yīng)中，但其酸加成鹽，優(yōu)選鹽酸鹽往往更適宜。
此反應(yīng)中所用還原劑的量應(yīng)足以還原式IIId化合物的羰基形成式Ia甲醇化合物，而且還應(yīng)足以轉(zhuǎn)化式IIId化合物的鹽成游離堿形式(在未采用游離堿的情況下)。一般來說，每當(dāng)量底物使用大大過量的還原劑。
合適的溶劑包括在還原條件下保持惰性的任何溶劑或溶劑混合物。適宜的溶劑包括乙醚、二噁烷、和四氫呋喃(THF)。優(yōu)選這些溶劑為無水形式。尤其優(yōu)選無水四氫呋喃。
該步中所采用的溫度應(yīng)足以使還原反應(yīng)完全進(jìn)行。一般約17℃至約25℃范圍下的室溫就比較適當(dāng)。
此步的反應(yīng)時間應(yīng)是反應(yīng)發(fā)生所必需的時間量。該反應(yīng)典型地進(jìn)行約1小時至約20小時。最適宜的時間可通過用常規(guī)色譜方法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程確定。
得自該反應(yīng)步驟的甲醇產(chǎn)物(任選地按下所述脫保護(hù))是新的，而且可用于這里所描述的方法中。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠認(rèn)識到，甲醇碳是手性的。因此，本發(fā)明還涉及式Ia化合物和其中X為-CH(OH)的式I化合物的對映體。
在制得本發(fā)明的甲醇之后，將這種化合物加到惰性溶劑如乙酸乙酯中，接著加入強質(zhì)子酸如鹽酸，產(chǎn)生式Ib新化合物。此反應(yīng)典型地在約17℃-約25℃的室溫下進(jìn)行，而且一般僅進(jìn)行數(shù)分鐘至約1小時就反應(yīng)完全。最終產(chǎn)物的結(jié)晶用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行。
末端被護(hù)羥基的脫烷基化/脫保護(hù)可以在式Ia化合物制備之前，在式Ib化合物制備之前，或在用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的方法制得被護(hù)的式Ib化合物之后進(jìn)行。但優(yōu)選在被護(hù)的式Ib化合物形成之后脫烷基化。
流程II中所示的反應(yīng)提供了新的式Ia和Ib藥物活性化合物，其中R1a為氫、羥基或C1-C4烷氧基和R2為C1-4烷基或C5-C7環(huán)烷基，它們?nèi)芜x地被1-3個選自下面的取代基取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、氨基、硝基和鹵素。優(yōu)選的式Ia和Ib化合物為這些，其中R1a為甲氧基或羥基，R2為環(huán)己基或環(huán)己醇，R3為1-哌啶基，以及n為2。其中尤其優(yōu)選其中R1a為羥基，R2為環(huán)己醇，R3為1-哌啶基，以及n為2的式Ia或Ib化合物。這些優(yōu)選化合物，以及其它式Ia和Ib化合物均可用作藥劑或可被進(jìn)一步衍生化，以得到其它式I化合物，它們也可用于實施本發(fā)明方法。
作為流程II中所示反應(yīng)的替換方法，可使用一步法通過還原相應(yīng)的式III酮制備本發(fā)明的式Ib化合物。更具體講，是當(dāng)R1a為-O(C1-C4烷基)時，該羥基保護(hù)基可在使用本方法之前除去，或在此一步還原法進(jìn)行之后可任選地就地除去。另外，該方法的產(chǎn)物可任選地用已知方法或用本文所述的方法成鹽。
在此方法中，將式V化合物或其鹽
其中R1a、R2、R3和n的定義同上，與還原劑如氫化鋁鋰或Red-Al[雙(2-甲氧基乙氧基-氫化鋁鈉)]在沸點為約160℃至約200℃的溶劑存在下反應(yīng)。當(dāng)式IIIc化合物用于本發(fā)明方法中時，反應(yīng)一完成就按照上述方法用下式化合物進(jìn)行烷基化R3-(CH2)n-Q其中R3的定義同上。
對于此還原反應(yīng)，反應(yīng)中所用還原劑的量應(yīng)足以還原式IIIc或IIId化合物的羰基形成式Ib化合物。一般來說，每當(dāng)量底物使用大大過量的還原劑。
本方法中所用的溶劑需要具有比較高的沸點約160℃-約200℃，如象溶劑正丙基苯、二甘醇二甲醚(1，1′-氧基雙[2-甲氧基-乙烷])和茴香醚所代表的那些。當(dāng)制備其中R1a為-OCH3和-C6H4-4′-O(C1-C4烷基)的式Ib化合物時，上述溶劑中的正丙基苯為優(yōu)選溶劑。當(dāng)R1a為-OH時，優(yōu)選不僅可用作溶劑還可用作還原劑的Red-Al。
此反應(yīng)中所使用的溫度應(yīng)足以完成還原反應(yīng)。優(yōu)選將反應(yīng)混合物加熱回流約15分鐘至約6小時，隨后使之冷卻到環(huán)境溫度，用標(biāo)準(zhǔn)方法[例如，參見Fieser和Fieser，有機合成試劑(Reagents for Organic Synthesis)，卷1，第584頁(1968)]以及本文實施例中進(jìn)一步描述的方法后處理，此反應(yīng)一般進(jìn)行約10分鐘至約1小時，最適宜的反應(yīng)時間可通過用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程確定。
一步反應(yīng)的式Ib產(chǎn)物按本文所述的方法提取。得自此反應(yīng)的優(yōu)選的式Ib化合物與上面所述的優(yōu)選的式Ib化合物相同。并可用作本文所述方法的藥物活性物質(zhì)，或者可被衍生化以得到其它也可用于本發(fā)明方法的新的式I化合物。
例如，當(dāng)R1a為C1-C4烷基羥基保護(hù)基(例如，流程1的方案之一所提供的未脫烷基化的情況)時，這類基團可用如特別是實施例6中所述的標(biāo)準(zhǔn)脫烷基技術(shù)除去，以制備特別優(yōu)選的式Ib化合物。
其它優(yōu)選的式I化合物可通過公知的方法用式-O-CO-(C1-C6烷基)，或-O-SO2-(C4-C6烷基)部分取代新形成的式Ib化合物，或如上所述的式Ia化合物中的R1a而制得。例如參見USP 4,358,593。
例如，當(dāng)想要-O-CO-(C1-C6烷基)基團時，可將式Ia或Ib的6-羥基化合物與試劑如酰氯、溴化合物、氰化物、或疊氮化物反應(yīng)，或與合適的酸酐或混合酐反應(yīng)。反應(yīng)適宜在在堿性溶劑如吡啶、盧剔定、喹啉或異喹啉中進(jìn)行，或在叔胺溶劑如三乙胺、三丁胺、甲基哌啶等溶劑中進(jìn)行。反應(yīng)也可以在惰性溶劑中進(jìn)行，這些溶劑如乙酸乙酯、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二噁烷、二甲氧基乙烷、乙腈、丙酮、甲乙酮等溶劑中進(jìn)行，其中加有至少一當(dāng)量酸清除劑(下述化合物除外)，如叔芳胺。如果需要，還可使用?；呋瘎┤?-二甲氨基吡啶或4-吡咯烷基吡啶。例如，參見Haslam等人，四面體(Tetrahedron)，362409-2433(1980)。
形成上述式I化合物末端R1基團的?；磻?yīng)在約-25℃至約100℃的中等溫度下進(jìn)行，且通常是在惰性氣氛如氮氣氛下進(jìn)行。不過，環(huán)境溫度通常足以使該反應(yīng)進(jìn)行。
這種羥基的?；部梢酝ㄟ^用合適羧酸在惰性有機溶劑中的酸催化反應(yīng)或者通過加熱進(jìn)行?？墒褂玫乃岽呋瘎┤缌蛩?，多磷酸，甲磺酸等。
上述式I化合物的R1部分還可以通過形成合適酸的活性酯而構(gòu)成，如由這些公知試劑如二環(huán)己基碳化二亞胺、酰基咪唑、硝基酚、五氯苯酚、N-羥基琥珀酰亞胺和1-羥基苯并三唑所形成的的酯。例如參見，日本化學(xué)會志(Bull.Chem.Soc.Japan)，381979(1965)和Chem.Ber.，788和2024(1970)。
上述能形成-O-CO-(C1-C6烷基)部分的每種方法均在如上所述的溶劑中進(jìn)行。這些在反應(yīng)過程中不產(chǎn)生酸產(chǎn)物的方法當(dāng)然不需要在反應(yīng)混合物中使用酸清除劑。
當(dāng)需要這些式I化合物，即其中式Ia或Ib化合物的R1a部分被轉(zhuǎn)化成式-O-SO2-(C4-C6烷基)基團時，可將式Ia或Ib的6-羥基化合物與例如磺酸酐或合適的磺酸衍生物(如磺酰氯、磺酰溴)或磺酰銨鹽按King和Monoir在美國化學(xué)會會志(J.Am.Chem.Soc.)，97，2566-2567(1975)中所教導(dǎo)的那樣進(jìn)行反應(yīng)。6-羥基化合物還可以與合適的磺酸酐或混合磺酸酐反應(yīng)。這類反應(yīng)在象如上所討論的與酰基鹵等類似物的反應(yīng)中所述的條件下進(jìn)行。
具有各種定義取代基的式Ia和Ib化合物，以及如上所述的它們的衍生物共同地稱作本發(fā)明式I化合物。
盡管游離堿形式的式I化合物可用于本發(fā)明方法中，但優(yōu)選制備和使用其可藥用鹽形式。因此，本發(fā)明方法中所用的化合物主要與各種有機和無機酸形成可藥用的酸加成鹽，且包括藥物化學(xué)中通常使用的生理上可接受的鹽。這類鹽也構(gòu)成了本發(fā)明的一部分。用于形成這類鹽的典型的無機酸包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、連二磷酸等。也可以使用衍生自有機酸的鹽，這些有機酸如脂族一元和二元羧酸，苯基取代的鏈烷羧酸，羥基鏈烷羧酸和羥基鏈烷二酸、芳香酸、脂族和芳族磺酸。因此這類可藥用鹽包括乙酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰-乙酰氧基苯甲酸鹽、萘-2-苯甲酸鹽、溴化物、異丁酸鹽、苯丁酸鹽、β-羥基丁酸鹽、丁炔-1，4-二羧酸鹽、己炔-1，4-二羧酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、氯化物、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、乙醇酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對苯二酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫二鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、內(nèi)炔酸鹽、丙酸鹽、苯丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、焦硫酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磺酸鹽、苯磺酸鹽、對-溴苯磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、對-甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等。優(yōu)選的鹽為鹽酸鹽。
可藥用的酸加成鹽一般是通過式I化合物與等摩爾量或過量的酸反應(yīng)而形成。反應(yīng)物一般是在互溶劑(如乙醚或乙酸乙酯)中化合。鹽通常是在約1小時至約10天的時間內(nèi)從溶液中沉淀出來，而且可通過過濾或用常規(guī)方法除去溶劑的方式分離。
與由其衍生出的化合物相比，可藥用鹽一般具有增強的溶解性特性，因此通常更適于制成液體或溶劑。
下述實施例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明化合物的制備。但下述實施例并不以任何理由限制本發(fā)明的范圍。
下述實施例中的NMR數(shù)據(jù)是用GE 300MHz NMR儀測定的，而且使用無水d-6 DMSO作為溶劑，但另有說明除外。
制備例1[3，4-二氫-2-羥基-6-甲氧基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮
-78℃下，向6-甲氧基-2-四氫萘酮(9.12g，51.7mmol)在四氫呋喃(100ml)中的攪拌溶液內(nèi)加入4-[2-(哌啶基)乙氧基]苯甲酸鹽酸鹽(15.7g，51.7mmol)。向此混合物中加入六甲基硅胺化鋰(104ml 1M四氫呋喃溶液，103.51mmol)，其加入速率應(yīng)保持溫度低于-65℃。反應(yīng)在-78℃下攪拌1小時，然后用氯化銨飽和水溶液中止反應(yīng)。真空除去四氫呋喃之后，加入乙醚，所得混合物用氫氧化鈉水溶液連續(xù)提取。水相用鹽酸酸化。酸性提取液通過加入碳酸氫鈉飽和水溶液使其呈堿性，爾后用乙醚洗。干燥(硫酸鈉)合并的有機提取液，過濾，并濃縮，得到4.0g(19％)所要產(chǎn)物，為暗黃色油。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.44(m，2H)，1.61(m，4H)，2.50(m，4H)，2.58(t，J＝6.6，7.1，2H)，2.77(t，J＝6.1，6.0，2H)，2.92(t，J＝7.1，6.7，2H)，3.76(s，3H)，4.12(t，J＝6.0，6.0，2H)，6.44(dd，J＝2.7，8.6，1H)，6.64(d，J＝8.7，1H)，6.71(d，J＝2.6，1H)，6.80(d，J＝7.1，2H)，7.48(d，J＝7.0，2H).EA 計算值C 73.68，H 7.17，N3.44.實測值C 73.13，H 7.22，N 3.39；MS(FD)m/e 407(M+)；IR 1605.94cm-1.制備例2[3，4-二氫-2-乙基-6-甲氧基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮
0℃下，向氫化鈉(0.60g，60％油分散物，15.1mmol)在50ml四氫呋喃中的攪拌溶液內(nèi)加入氯磷酸二苯酯(3.30mL，15.1mmol)和制備例1的產(chǎn)物(5.6g，13.72mmol)在四氫呋喃(50mL)中的混合物。反應(yīng)2.5小時后，用氯化銨飽和水溶液驟冷所得溶液。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋并用氯化銨飽和水溶液、氫氧化鈉和氯化鈉溶液連續(xù)提取。干燥(硫酸鈉)有機提取液并過濾。濃縮得到黑色油，將其溶于四氫呋喃(150mL)，并冷卻此溶液至-78℃，加入溴化銅-二甲硫配合物(4.34g，21.1mmol)，繼之加入溴化乙基鎂(7.0mL，3.0M溶液，21.1mmol)。如果需要的話，再加入等當(dāng)量溴化乙基鎂和溴化銅-二甲硫配合物。在烯醇磷酸酯中間體完全消耗去之后，將反應(yīng)溫?zé)嶂?30℃，用氯化銨飽和水溶液驟冷中止反應(yīng)。隨后用乙酸乙酯提取混合物，并將合并的有機提取液用氯化銨飽和水溶液、1N氫氧化鈉水溶液以及鹽水洗滌。所得黑色油通過快速色譜法純化(硅膠，氯仿-5％甲醇/氯仿梯度洗脫)，得到3.48g(60％)所要產(chǎn)物，為暗黃色油。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.98(t，J＝7.5，7.5，3H)，1.43-1.56，(m，2H)，1.58-1.63(m，4H)，2.08(q，J＝，2H)，2.37(t，J＝7.6，8.3，2H)，2.49(m，4H)，2.78(t，J＝6.0，5.9，2H)，2.88(t，J＝8.2，7.6，2H)，3.75(s，3H)，4.15(t，J＝6.0，6.0，2H)，6.53(dd，J＝2.7，8.5，1H)，6.68(d，J＝8.4，1H)，6.72(d，J＝2.4，1H)，6.88(d，J＝8.8，2H)，7.93(d，J＝8.7，2H)；EA計算值C 77.29，H 7.93，N 3.34，實測值C77.15，H 8.18，N 3.32；MS(FD)m/e 419(M+)；IR(氯仿)1653.21cm-1.
制備例3[3，4-二氫-2-(4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基環(huán)己基)-6-甲氧基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮
按和制備例2的產(chǎn)物相同的方法，采用含制備例1產(chǎn)物(13.06g，20.42mmol)、溴化銅-二甲硫配合物(12.59g，61.26mmol)，反式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基環(huán)己基溴化鎂[通過向鎂屑(3.00g，123mmol)的無水四氫呋喃(150ml)懸浮液中加入溶在150ml四氫呋喃中的反式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-溴環(huán)己烷，使混合物放熱回流，隨后攪拌4小時而制得]的料液制備。得到4.6g(37％)所要產(chǎn)物，為暗黃色油。MS(FD)m/e-603(M+)。
制備例4[3，4-二氫-2-己基-6-甲氧基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮
按與制備例2中所示相同的方法，采用含制備例1產(chǎn)物(13.0g，20.42mmol)，溴化銅-二甲硫配合物(12.59g，61.26mmol)，溴化1-己基鎂溶液[采用鎂屑(3.00g，123mmol)、1-溴-正己烷(8.6ml，61.26mmol)和150ml無水四氫呋喃，按與制備3中制備所述格利雅試劑相同的方法制備]的料液進(jìn)行制備。得到3.5g(36％)所要產(chǎn)物，為暗黃色油。MS(FD)m/e 475(M+)。
制備例5[3，4-二氫-2-乙基-6-羥基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮
環(huán)境溫度下，向制備例2的產(chǎn)物(3.40g，8.10mmol)在二氯甲烷(200ml)的攪拌溶液中加入乙硫醇(3.00mL，40.5mmol)，接著加入氯化鋁(5.40g，40.5mmol)。劇烈攪拌0.5小時之后，暗紅色溶液用碳酸氫鈉飽和水溶液驟冷。所得混合物用碳酸氫鈉飽和水溶液及鹽水提取。干燥(硫酸鈉)有機提取液，過濾并濃縮。所得黑色油通過快速色譜純化(硅膠，2％至5％MeOH/CHCl3梯度洗脫)，得到2.00g(61％)所要產(chǎn)物，為黃色泡沫。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ.97(t，J＝7.5，7.4，3H)，1.42-1.47(m，2H)，1.63(m，4H)，2.07(q，J＝，2H)，2.35(t，J＝8.6，8.2，2H)，2.54(m，4H)，2.80(m，4H)，4.12，(t，J＝5.8，5.7，2H)，6.42(dd，J＝2.5，7.3，1H)6.60(m，2H)6.76(d，J＝8.8，2H)，7.87(d，J＝8.7，2H)；MS(FD)m/e 405(M+)；IR(CHCl3)1653，3597.70cm-1.
制備例6[3，4-二氫-2-(4-反式-羥基環(huán)己基)-6-羥基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽
按和制備例5中所示相同的方法，采用制備3的產(chǎn)物(4.5g，7.46mmol)、氯化鋁(8.6g，64.4mmol)氯化鋁、乙硫醇(3.4ml，46.0mmol)，在二氯甲烷(200ml)中制備，得到1.9g(54％)所要產(chǎn)物，為淺黃色泡沫。
EA計算值C 75.76，H 7.84，N 2.94，實測值C 75.51，H7.79，N 2.97.
MS(FD)m/e 475(M+)；IR-1653.21cm-1，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.20-1.24(m，2H)，1.57-1.76(m，8H)，2.03-2.18(m，2H)，2.25-2.30(m，1H)，2.37(t，J＝7.5，7.6，2H)，2.64-2.70(m，4H)，2.83-2.94(m，5H)，3.59-3.64(m，2H)，4.25(t，J＝5.6，5.6，2H)，6.51(dd，J＝8.3，2.5，2.5，1H)，6.67(d，J＝8.3，1H)，6.70(d，J＝2.3，1H)，6.85(d，J＝8.8，2H)，7.97(d，J＝8.6，2H).
制備例7[3，4-二氫-2-己基-6-羥基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽
按和制備例1中所示相同的方法，采用制備例4的產(chǎn)物(3.4g，7.15mmol)，氯化鋁(4.8g，35.79mmol)，乙硫醇(2.7ml，35.79mmol)和二氯甲烷(200ml)反應(yīng)制備，得到0.25g(8％)所要產(chǎn)物，為黃色泡沫。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.92(t，J＝6.4，6.3，3H)，1.27-1.38(m，6H)，1.47-1.58(m，4H)，1.73-1.77(m，4H)，2.16(t，J＝8.2，7.2)，2.44(t，J＝7.5，8.2)，2.69-2.76(m，4H)，2.88-2.97(m，4H)，4.25(t，J＝5.8，5.6，2H)，6.53(dd，J＝8.2，2.5，2.4，1H)，6.67，(d，J＝8.3，1H)，6.73(d，J＝2.2，1H)，6.86(d，J＝8.7，2H)，7.38(s，1H)，7.97(d，J＝8.6，2H)；IR(CDCl3)1600；MS(FD)m/e 461(M+).
實施例1[2-乙基-6-羥基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲烷鹽酸鹽
0℃下，向制備例5的產(chǎn)物(2.00g，4.93mmol)在四氫呋喃(100ml)中的攪拌溶液內(nèi)緩慢加入氫化鋁鋰(10.4mL，1.0M四氫呋喃溶液，10.4mmol)。溫?zé)岱磻?yīng)至環(huán)境溫度，攪拌2小時，然后用酒石酸鉀鈉飽和水溶液驟冷中止反應(yīng)。加入乙酸乙酯后，將有機提取液用酒石酸鉀鈉飽和水溶液、水和鹽水依次洗滌。干燥(硫酸鈉)有機提取液，過濾并濃縮，得到甲醇，為白色泡沫，此產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化便可繼續(xù)反應(yīng)。因此，將此泡沫溶于乙酸乙酯，隨后將溶液用氫氯酸氣體飽和。環(huán)境溫度下飽和18小時后，混合物用碳酸氫鈉飽和水溶液驟冷。分離各層，干燥(硫酸鈉)有機提取液，過濾并濃縮。所得黃色泡沫用快速色譜純化(硅膠，2至10％ MeOH/CHCl3梯度洗脫)，得到0.91g(47％)所要產(chǎn)物，為黃色泡沫。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.81(t，J＝7.5，7.5，3H)，1.45(m，2H)，1.64(m，4H)，2.58(m，4H)，2.79(m，4H)，4.04(t，J＝6.0，6.0，2H)，4.36(s，2H)，6.65(d，J＝8.6，2H)，6.88(d，J＝8.6，2H)，6.96(dd，J＝2.6，9.2，1H)，7.07(d，J＝2.6，1H)，7.30(d，J＝8.5，1H)，7.53(d，J＝8.5，1H)，7.73(J＝9.1，1H)；EA計算值C 80.17，H 8.02，N3.60.實測值C 80.18，H 8.02，N 3.54；MS(FD)m/e 390(M+)；IR(CHCl3)1510，3597cm-1.
實施例2[2-(4-環(huán)己基)-6-羥基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲烷鹽酸鹽
和實施例1中所述相同的方法，采用制備例6的產(chǎn)物(1.1g，2.31mmol)，氫化鋁鋰(9.2ml 1M四氫呋喃溶液，9.2mmol)和無水四氫呋喃(100ml)制備，酸化粗反應(yīng)產(chǎn)物(100ml 1N HCl/100ml四氫呋喃)，得到0.3g(34％)所要產(chǎn)物，為淺棕色固體。
MS(FD)m/e 460(M+)；IR 3163.66cm-1；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.15-1.21(m，2H)，1.29-1.59(m，10H)，1.82-1.87(m，2H)，2.46-2.54(m，4H)，2.57(t，J＝5.8，5.7，2H)，2.85-2.90(m，1H)，3.13(d，J＝4.8，1H)，3.93(t，J＝5.9，5.9，2H)，4.31(s，2H)，4.52(d，J＝4.3，1H)，6.75(d，J＝8.6，2H)，6.89-7.02(m，4H)，7.33(d，J＝8.7，1H)，7.53(d，J＝8.7，1H)，7.77(d，J＝9.2，1H)，9.57(s，1H).
實施例3[2-(1-己基)-6-羥基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲烷鹽酸鹽
按和實施例1中所述相同的方法，采用制備例7的產(chǎn)物(1.1g，2.39mmol)，氫化鋁鋰(7.2ml 1.0M四氫呋喃溶液，7.2mmol)和四氫呋喃(150ml)進(jìn)行制備。酸化粗反應(yīng)混合物(100ml 1N HCl/100ml四氫呋喃)，得到0.10g(9％)所要產(chǎn)物，為淺黃色泡沫。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.97(t，J＝6.7，6.7，3H)，1.31-1.80(m，14H)，2.69-2.96(m，8H)，4.16(t，J＝5.9，5.8，2H)，4.47(s，2H)，6.76(d，J＝8.6，2H)，7.00(d，J＝8.5，2H)，7.07(dd，J＝9.0，2.5，2.5，1H)，7.19(d，J＝2.6，1H)，7.39(d，J＝8.7，1H)，7.63(d，J＝8.4，1H)，7.85(d，J＝9.2，1H).
制備例8[3，4-二氫-2-環(huán)己基-6-甲氧基萘-1-基][4-[甲氧基苯基]甲酮
0℃下，向氫化鈉(1.48g 60％礦物油分散物，36.9mmol)在四氫呋喃(100ml)中的攪拌懸浮液中緩慢加入氯磷酸二苯酯(7.65g，36.9mmol)和制備例1的產(chǎn)物(10.4g，33.5mmol)在四氫呋喃(100ml)中的溶液。1.5小時后，再加入5ml氯磷酸二苯酯，并使反應(yīng)進(jìn)行2.5小時，然后用氯化銨飽和水溶液驟冷終止。所得的混合物用乙酸乙酯提取，并將合并的有機提取液用氯化銨飽和水溶液和鹽水依次洗滌。干燥(硫酸鈉)有機提取液，過濾并濃縮。所得黃色油用快速色譜純化(硅膠，20-35％乙酸乙酯/己烷梯度洗脫)，得到11.2g烯醇磷酸酯，為黃色油，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化可直接用于隨后的步驟中。因此，將粗制烯醇磷酸酯溶于四氫呋喃(150mL)中并冷卻至-78℃。向此攪拌溶液中加入溴化銅-二甲硫配合物(4.20g，20.46mmol)，接著加入溴化環(huán)己基鎂(10.2mL 2.0M四氫呋喃溶液，5.1mmol)。2小時后，再加入5mL溴化環(huán)己基鎂。將所得溶液在-78℃下攪拌1小時，然后溫?zé)嶂?20℃，隨后用氯化銨飽和水溶液驟冷?；旌衔镉靡宜嵋阴ヌ崛?，并用氯化銨飽和水溶液和鹽水洗滌。干燥(硫酸鈉)有機部分，過濾并濃縮。所得的油狀物通過快速色譜純化(硅膠，100％己烷-10％乙酸乙酯/己烷梯度洗脫)，得到所要產(chǎn)物和苯酚的混合物。將此物料溶于乙醚，用1N氫氧化鈉水溶液提取。干燥(硫酸鈉)有機提取液，過濾并濃縮，得到3.25g(26％)所要產(chǎn)物，為黃色油。
1H NMR(300MHz CDCl3)δ1.08(m，2H)，1.32-1.37(m，2H)，1.51-1.64(m，6H)，2.20(m，1H)，2.33(t，J＝8.1，7.5，2H)，2.83(t，J＝8.0，7.6，2H)，3.75(s，3H)，3.85(s，3H)，6.53(dd，J＝2.7，8.5，1H)，6.67(d，J＝8.4，1H)，6.72(d，J＝2.5，1H)6.90(d，J＝8.7，2H)，7.95(d，J＝8.8，2H)；MS(FD)m/e 376(M+)；IR(CHCl3)1654.17cm-1.
制備例9[3，4-二氫-2-環(huán)己基-6-甲氧基萘-1-基][4-[羥基苯基]甲酮
0℃下，向乙硫醇(0.91mL，12.4mmol)在乙醚(30mL)中的攪拌溶液內(nèi)逐滴加入n-BuLi(6.70mL 1.6M己烷溶液，10.72mmol)。反應(yīng)0.5小時后，濃縮混合物至干。向此白色固體中加入制備例8產(chǎn)物(3.10g，8.24mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液，并將所得混合物加熱至90℃。反應(yīng)4小時后，將混合物冷卻至環(huán)境溫度，用氯化銨飽和水溶液驟冷，并濃縮。所得物料溶于乙酸乙酯，用氯化銨飽和水溶液提取。干燥(硫酸鈉)有機部分，過濾并濃縮。所得油通過快速色譜純化(硅膠，10％-30％乙酸乙酯/己烷梯度洗脫)，得到1.56g(81％收率，基于未回收的起始物質(zhì))所要苯酚，為黃色油。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.06-1.68(m，10H)，2.20(m，1H)，2.37(t，J＝7.3，8.4，2H)，2.83(t，J＝8.0，7.7，2H)3.75(s，3H)，6.54(dd，J＝2.7，1H)，2.68(d，J＝8.5，1H)，6.72(d，J＝2.7，1H)，6.82(d，J＝8.7，2H)，7.91(d，J＝8.6，2H)；；MS(FD)m/e 362(M+)；IR(CDCl3)1651.28cm-1.
實施例4[3，4-二氫-2-環(huán)己基-6-甲氧基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮
環(huán)境溫度下，向制備例9的產(chǎn)物(1.93g，5.32mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(40mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入N-(氯乙基)哌啶鹽酸鹽(0.98g，5.32mmol)，接著加入無水碳酸鉀(3.68g，26.60mmol)。反應(yīng)18小時后，加入乙酸乙酯并用水和鹽水依次提取反應(yīng)物。干燥(硫酸鈉)有機提取液，過濾并濃縮。所得棕色油通過快速色譜純化(150g硅膠，CHCl3-5％MeOH/CHCl3梯度洗脫)，得到2.40g(95％)所要產(chǎn)物，為橙色泡沫。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.08(m，2H)，1.32-1.65(m，14H)，2.19(m，1H)，2.33(t，J＝7.5，8.1，2H)，2.51(m，4H)，2.77-2.85(m，4H)，3.75(s，3H)，4.15(t，J＝6.0，5.9，2H)，6.55(dd，J＝2.7，8.5，1H)，6.67(d，J＝8.5，1H)，6.71(d，J＝2.5，1H)，6.88(d，J＝8.7，2H)，7.93(d，J＝8.7，2H)；MS(FD)m/e 474(M+)；IR(CDCl3)1653cm-1.
實施例5[2-環(huán)己基-6-甲氧基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲烷
0℃下，向?qū)嵤├?的產(chǎn)物(2.10g，4.44mmol)在四氫呋喃(50mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入氫化鋁鋰(8.9mL 1.0M四氫呋喃溶液，8.9mmol)。1.5小時后，小心地用酒石酸鉀鈉飽和水溶液驟冷終止反應(yīng)，接著加入乙酸乙酯。所得混合物用酒石酸鉀鈉飽和水溶液和鹽水依次提取。干燥(硫酸鈉)有機提取液，過濾并濃縮。將所得油溶于乙酸乙酯(100mL)，隨后將此溶液用氯化氫氣體飽和，然后環(huán)境溫度攪拌45分鐘，隨后用碳酸氫鈉飽和水溶液驟冷。將此溶液用碳酸氫鈉飽和水溶液提取，干燥(硫酸鈉)，過濾并濃縮。所得物料通過快速色譜純化(200g硅膠，5％ MeOH/CHCl3)，得到黃色泡沫，此產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化可直接使用。因此，將粗制反應(yīng)產(chǎn)物溶于乙醚中，并將該溶液用氯化氫氣體飽和。0.5小時后，濃縮混合物，得到1.73g(85％)所要產(chǎn)物，為粘稠油。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.31-2.76(m，16H)，2.74(t，J＝6.1，6.1，2H)，2.93(m，4H)，3.90(s，3H)，4.04(t，J＝6.1，6.1，2H)，4.42(s，2H)，6.76(d，J＝8.6，2H)，6.96(d，J＝8.6，2H)，7.05(dd，J＝2.6，9.2，1H)，7.11(d，J＝2.7，1H)，7.46(d，J＝8.6，1H).66(d，J＝8.6，1H)，7.83(d，J＝9.2，1H).EA計算值C 75.36，H 8.16，N 2.84；實測值C 75.57，H7.99，N 2.63；MS(FD)m/e 457(M+-HCl)；IR(CHCl3)1628.23cm-1.
實施例6[2-環(huán)己基-6-羥基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲烷鹽酸鹽
在可重復(fù)密封的反應(yīng)容器中，將實施例5產(chǎn)物(0.50g，1.01mmol)在二氯甲烷(10mL)中的冰冷(0℃)溶液用三氯化硼氣體飽和。密封反應(yīng)容器并溫?zé)峄旌衔镏镰h(huán)境溫度。6.5小時后，溶液小心地用甲醇驟冷，然后用乙酸乙酯稀釋。有機液部分用碳酸氫鈉飽和水溶液和鹽水提取，干燥(硫酸鈉)，過濾并濃縮。所得油通過快速色譜純化(50g硅膠，2％ MeOH/CHCl3)，并按實施例5所述制備鹽酸鹽，得到0.10g(35％收率，基于未回收的起始物質(zhì))。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.27-1.81(m，16H)，2.50(m，4H)，2.79(t，J＝5.5，5.7，2H)，2.90(m，1H)，4.05(t，J＝5.9，5.8，2H)，4.38(s，2H)，6.67(d，J＝8.5，2H)，6.91(d，J＝8.5，2H)，6.96(dd，J＝2.7，9.2，1H)，7.07(d，J＝2.5，1H)，7.41(d，J＝8.7，1H)，7.56(d，J＝8.7，1H)，7.78(d，J＝9.06，1H)；EA計算值C 81.27，H 8.41，N 3.16；實測值C80.57，H 8.10，N 3.47；MS(FD)m/e 444(M+).
制備例10[3，4-二氫-2-環(huán)己基-6-羥基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮
按和制備例5中所述相同的方法，采用實施例4的產(chǎn)物(7.7g，16.3mmol)，氯化鋁(10.8g，81.3mmol)和乙硫醇(6.0mL，81.3mmol)在二氯甲烷(200mL)中反應(yīng)制備，得到1.35g所要產(chǎn)物，為褐色固體。
EA計算值C 78.4，H 8.11，N3.05，實測值C 78.90，H 7.38，N.2.83，MS(FD)459(M+)；IR(kBr)3347，1598cm-1；H NMR(CDCl3)7.99(d，J＝9Hz，2H)，6.80(d，J＝9Hz，2H)，6.70(d，J＝2Hz，1H)，6.65(d，J＝9Hz，1H)6.50(dd，J＝9.3Hz，2H)，4.20(t，J＝6.1Hz，2H，2.2-3.0(一系列多重峰7H)，1-1.8(一系列多重峰16H).
實施例7[3，4-二氫-2-環(huán)己基-6-羥基萘-1-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲醇
0℃下，向制備例10的產(chǎn)物(30mg，0.6mmol)在四氫呋喃(5mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入氫化鋁鋰(0.2mL 1M四氫呋喃溶液，0.2mmol)。溫?zé)崛芤褐潦覝?，反?yīng)4小時后用碳酸氫鈉飽和水溶液驟冷中止?；旌衔镉靡宜嵋阴ヌ崛?，用鹽水洗滌合并的有機提取液，干燥(MgSO4)，并濃縮。用徑向色譜法純化(SiO2，5％MeOH/CH2Cl2)，得到22mg(73％)所要產(chǎn)物，為黃色固體。
1H NMR(丙酮-d6)7.40(d，J＝8.0Hz，2H)，7.31(d，J＝7.0Hz，1H)，6.89(d，J＝8.0Hz，2H)，6.81(9，1H)，6.42(dd，J＝8.0，2.5Hz，1H)，6.20(s，1H)，4.15(t，J＝6.0Hz，3H)，2.95(M，1H)，2.80(t，J＝6.0Hz，2H)，2.50-2.60(m，6H)，2.20(m，2H)，1.20-1.80(16H).
在說明本發(fā)明方法的實施例中，使用絕經(jīng)期后模型，測定不同治療物對循環(huán)脂質(zhì)的效應(yīng)。
從Charles River實驗室(Portage，MI)得到75日齡雌性Sprague Dawley大鼠(重200-225g)。在Charles River實驗室將動物兩側(cè)中的任一側(cè)卵巢切除(OVX)或接受Sham外科手術(shù)，并于1周后發(fā)運。到達(dá)后，將它們以每籠每組3或4只的數(shù)量放入到金屬籠中，并允許自由進(jìn)食(食物中鈣含量為約0.5％)和飲水一周。室溫保持在22.2±1.7℃，最小相對濕度為40％。屋中光周期為12小時有光，12小時黑暗。
劑量方案及組織收集 一周適應(yīng)期后(即卵巢切除2周后)，開始每天給予試驗化合物?？诜o藥懸浮在1％羧甲基纖維素或溶在20％環(huán)糊精中的17α-乙炔雌二醇或試驗化合物，另有說明除外。對動物每天用藥，連續(xù)4天。按照此劑量方案，動物體重增加，用氯胺酮∶甲苯噻嗪(2∶1，V∶V)混合物麻醉動物，并通過心臟穿刺采集血樣。然后用CO2窒息處死動物，通過正中切口取出子宮，測定子宮濕重。
膽固醇分析 室溫下使血樣凝集結(jié)塊2小時，繼之以3000rpm離心10分鐘得到血清。采用Boehringer Mannheim Diagnostics高壓膽固醇測定儀測定血清膽固醇。簡言之，膽固醇被氧化成膽甾-4-烯-3-酮和過氧化氫。在過氧化酶存在下，過氧化氫隨后與苯酚和4-氨基非那宗反應(yīng)，產(chǎn)生對喹諾酮亞胺染料，利用分光光度計在500nm處辨認(rèn)此染料。然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算膽固醇的濃度。整個測定采用Biomek自動操作裝置自動進(jìn)行。
子宮嗜曙紅細(xì)胞過氧化酶(EPO)測定將子宮在4℃保存至進(jìn)行酶促分析。然后在50倍體積的含0.005％曲通X-100的50mM Tris緩沖液(pH-8.0)中均化。一加入溶在Tries緩沖液中的0.01％過氧化氫和10mM鄰苯二胺(最終濃度)，就在450nm處測量吸光度的增值1分鐘。子宮中嗜曙紅細(xì)胞的存在是化合物具有雌激素活性的標(biāo)志。在反應(yīng)曲線的最初線性部分上測得每15秒間隔的最大速度。
化合物來源 17α-乙炔基雌二醇購自Sigma Chemical Co.，St. Louis，MO。
式I化合物對血清膽固醇的影響和興奮劑/非興奮劑活性的測定下表1中所示的數(shù)據(jù)顯示了卵巢切除大鼠，用17α-乙炔基雌二醇(EE2；一種可購得的口服形式雌激素)處理的大鼠和用一些本發(fā)明化合物處理的大鼠之間的比較結(jié)果。當(dāng)以0.1mg/kg/天劑量口服施用時，雖然EE2能引起血清膽固醇含量降低，但它們也對子宮產(chǎn)生刺激作用，以致EE2子宮重量明顯重于卵巢切除的受試動物的子宮重量。這種子宮應(yīng)答雌激素的作用是本領(lǐng)域人員公知的。
本發(fā)明化合物較之卵巢切除對照組動物不僅能普遍地降低血清膽固醇水平，而且對于大多數(shù)受試的式I化合物來說，子宮重量僅有最低程度的增加或僅有略微程度減輕。和本領(lǐng)域中公知的雌激素類化合物相比，血清膽固醇的降低且對子宮重量無不良影響的優(yōu)點是非常難得的并且也是所希望的。
正如下表中的數(shù)據(jù)所示的那樣，動情性也可通過評價嗜曙紅細(xì)胞浸潤到子宮中的反應(yīng)答而評定。在卵巢切除大鼠的基質(zhì)層中沒有觀測到本發(fā)明化合物會增加嗜曙紅細(xì)胞的數(shù)量，而雌二醇則會在嗜曙紅細(xì)胞浸潤方面引起顯著的預(yù)期增加。
下表1中的所示數(shù)據(jù)反映了每處理組5至6只大鼠的反應(yīng)。
表1劑量 子宮重量 子宮EPO 血清膽固醇化合物 mg/kg (相對于OVX的增長率％)(V.max) (相對于OVX的降低率％)EE20.1 86.3 116.4 81.4實施例1 0.1 -3.36.6 20.31.03.0 12.0 23.110.0 60.2 12.0 38.6實施例2 0.1 32.04.8 57.81.0 17.14.8 71.810.06.73.6 34.9實施例4 0.1 32.02.1 65.51.0 30.78.1 56.610.0 24.2 10.6 58.3實施例5 0.1 21.2 21.2 77.61.0 10.44.2 76.310.06.45.3 65.8實施例6 0.1 65.7 17.7 57.41.0 22.84.2 46.810.0 22.04.5 63.9除證明本發(fā)明化合物(尤其是當(dāng)與雌二醇相比時)的優(yōu)點以外，上述數(shù)據(jù)還清楚地表明式I化合物不為雌激素類似物。此外，對于任何治療，均沒有觀測到有害的毒理作用(都存活)。
骨質(zhì)疏松試驗方法按照下述的一般制備方法，每天處理大鼠，連續(xù)35天(每處理組6只大鼠)，在第36天用二氧化碳窒息處死動物。35天的時間足以使骨質(zhì)密度最大程度地減少(按本文所述測定)。動物處死時，取出子宮，剝離去外部組織，為了證實與卵巢切除有關(guān)的雌激素的減少，在測定濕重之前排出液體內(nèi)容物。由于卵巢切除，子宮重量通常減少約75％。爾后將子宮放入10％中性福爾馬林緩沖液中以待進(jìn)行其后的組織學(xué)分析。
切開右股骨，通過影像分析方法(NIH影像)在遠(yuǎn)干骺端上產(chǎn)生數(shù)字化X-射線并分析。這些動物脛骨的近端切面也可通過定量計算機控制斷層掃描術(shù)掃描。
根據(jù)上述方法，對受試動物口服施用溶于20％羥丙基β-環(huán)糊精中的本發(fā)明化合物和乙炔基雌二醇(EE2)。表2中所示的近端脛骨的干骺端數(shù)據(jù)為與未切除和切除了卵巢的試驗動物相比的本發(fā)明式I化合物的治療結(jié)果。結(jié)果以對骨質(zhì)脫失的百分保護(hù)率報道，對于各組動物，它們用下述方程式計算％保護(hù)＝[(BMD試驗BMDOVX)/(BMDsham-BMDOVX)×100。
表2脛骨BMDpQCT化合物/治療物 劑量/kg(保護(hù)率％)EE20.1mg60.9*實施例6 0.01mg23.10.1mg52.61.0mg30.13.0mg59.6**P＜＝0.5，對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行的雙尾Student T測驗。
總之，與未切除卵巢的載體處理的對照組動物相比，卵巢切除的試驗動物的脛骨密度明顯降低?？诜┯靡胰不贫?EE2)能防止這種脫失，但該治療總是存在著刺激子宮的危險性。
本發(fā)明化合物還能以普通的劑量依賴性方式防止骨損失。因此，本發(fā)明化合物可用于治療絕經(jīng)期后綜合癥，特別是骨質(zhì)疏松癥。
MCF-7增值測定將MCF-7乳腺癌細(xì)胞(ATCC HTB 22)保存在補加有10％胎牛血清(FBS)(V/V)、L-谷氨酰胺(2mM)、丙酮酸鈉(1mM)，HEPPS{(N-[2-羥基乙基]哌嗪-N′-[2-乙磺酸]10mM}、非必需氨基酸和牛胰島素(1μg/ml)的MEM(基本培養(yǎng)基，無酚紅，Sigma，St.Louis，MO)(維持培養(yǎng)基)中。在測定前10天，將MCF-7細(xì)胞轉(zhuǎn)移到補加有替代10％ FBS的10％解吸了葡聚糖包衣的活性炭的胎牛血清(DCC-FBS)的維持培養(yǎng)基中(測定培養(yǎng)基)以耗盡內(nèi)在儲存的膽固醇。采用細(xì)胞分離介質(zhì)(Ca++/Mg++，無HBSS(無酚紅)，補加有10mM HEPES和2mM EDTA〕從維持燒瓶內(nèi)移出MCF-7細(xì)胞。用測定培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次并調(diào)節(jié)至80,000個細(xì)胞/mL。取大約100μL(8,000個細(xì)胞)加到平底微量培養(yǎng)孔(Coster 3596)中，并在37℃和5％ CO2保濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)移后粘著和平衡。在測定培養(yǎng)基中制備一系列藥物稀釋液或以DMSO作為稀釋液對照物，并取50μL轉(zhuǎn)至三個微量培養(yǎng)孔中，繼之加入50μL測定培養(yǎng)基至最終體積200μL。在37℃和5％ CO2保濕培養(yǎng)箱中再培養(yǎng)48小時后，微量培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)物用氘化胸苷(1μCi/孔)脈沖4小時。通過在-70℃冷凍24小時使培養(yǎng)停止，接著融化，并采用Skatron半自動細(xì)胞采集器采集微量培養(yǎng)物。樣品采用Wallac BetaPlaceβ計數(shù)器通過液體閃爍法計數(shù)。下表4中的結(jié)果給出了某些本發(fā)明化合物的IC50值。
表3化合物(相關(guān)的實施例) IC50nM1 10.02 1.05 10.06 0.6DMRA誘導(dǎo)的乳腺癌的抑制使購自Harlan Industries，Indianapolis，Indiana的雌性Sprague-Dawley大鼠產(chǎn)生雌激素依賴性乳腺腫瘤。在約55天齡時，給這些大鼠單劑量口服投藥20mg 7，12-二甲基苯并[a]蒽(DMBA)。在DMBA給藥6周后，每隔一周觸摸乳腺以診斷腫瘤的出現(xiàn)。一旦有一個或多個腫瘤出現(xiàn)，用度量卡尺測量每個腫瘤的最大和最小直徑，記錄測量結(jié)果，并選擇動物進(jìn)行試驗。均勻分布處理組和對照組中不同直徑大小的腫瘤的大鼠，使平均直徑大小的腫瘤均衡分布在各試驗組之間。每一試驗中，對照組和試驗組均包含5-9只動物。
式I化合物或以溶在2％阿拉伯膠中的注射液形式腹膜內(nèi)注射施用，或者口服施用。口服施用時，可將化合物溶于或懸浮在0.2mL玉米油中。每種處理物，包括阿拉伯樹膠和玉米油對照處理物，對于每只試驗動物均每天施用1次。在最初腫瘤測量和試驗動物選擇之后，按照上述方法每周測量腫瘤大小一次。對動物的治療和測量持續(xù)3-5周，隨后測量腫瘤的最終面積。對于每一化合物和對照處理物，測量腫瘤平均直徑的變化。
子宮纖維變性試驗方法試驗1對3-20個患有子宮纖維變性的婦女施用本發(fā)明化合物?；衔锏氖┯昧繛?.1-1000mg/天，用藥期限為3個月。
在用藥期間和直到停藥后三個月這段時間內(nèi)觀測對這些婦女的子宮纖維變性的治療效果。
試驗2重復(fù)和試驗1同樣的方法，只是用藥期限變?yōu)?個月。
試驗3重復(fù)和試驗1同樣的方法，只是用藥期變限為1年。
試驗4A.在豚鼠體內(nèi)誘發(fā)纖維瘤對性成熟的雌性豚鼠進(jìn)行長期雌激素刺激以誘導(dǎo)平滑肌瘤。每周對動物注射施用雌二醇3-5次，連續(xù)施用2-4個月，或直到有腫瘤形成為止。連續(xù)3-16周每天施用包括本發(fā)明化合物或載體的治療物，然后處死動物并收集子宮，分析腫瘤消退情況。
B.在裸鼠體內(nèi)移植入人子宮平滑肌瘤組織將人平滑肌瘤組織移植到性成熟的閹割雌性裸鼠的腹膜腔和/或子宮的子宮肌層內(nèi)。提供外源雌激素以誘導(dǎo)移植組織的生長。在某些情況下，在移植之前先將收集到的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。通過每天胃灌洗提供包括本發(fā)明化合物或載體的治療物，連續(xù)灌洗3-16周，并移出植入物，觀測腫瘤的生長或消退情況。處死動物，采集子宮并評估器官的狀態(tài)。
試驗5A.采集人體子宮纖維瘤組織并在體外保存，作為初級非轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物。通過無菌網(wǎng)或篩擠壓該外科手術(shù)樣品，或者挑去周圍組織以得到單細(xì)胞懸浮液。將細(xì)胞置于含有10％血清和抗菌素的培養(yǎng)基中。在有或無雌激素存在下分別測定生長率。評估細(xì)胞產(chǎn)生補體成分C3的能力和它們對生長因子和生長激素的應(yīng)答情況。在體外培養(yǎng)物中，測定用黃體制劑、GnRH、本發(fā)明化合物和載體處理后細(xì)胞的增值反應(yīng)。每周測量膽固醇雌激素受體的濃度，以確定重要的細(xì)胞特性是否在體外得以保持。采用從5-25個病人體內(nèi)得到的組織。
在至少一個上述試驗中具有的活性就標(biāo)志著本發(fā)明化合物對子宮纖維變性的治療是強有效的。
子宮內(nèi)膜異位試驗方法在試驗1和2中，測定本發(fā)明化合物施用14天和21天后對外植內(nèi)原組織生長的作用。
試驗1采用12-30只成年CD種雌性大鼠作為試驗動物。將它們等數(shù)量分成三組。監(jiān)測所有動物的動情周期。在動情期開始時對每只雌鼠施行外科手術(shù)。將每組雌鼠的左子宮角移去，并將其分成眾多小塊，隨后將這些小塊松散地縫合在鄰近腸系膜血流的不同位點上。另外，將第二組雌鼠的卵巢切除。
在外科手術(shù)后的當(dāng)天，給第一組和第二組動物腹膜內(nèi)注射水，連續(xù)14天，而同時對第三組動物腹膜內(nèi)注射1.0mg/千克體重的本發(fā)明化合物，處理期相同。經(jīng)過14天處理之后，將每只雌鼠處死，并且如果需要的話，取出子宮內(nèi)膜移出物、腎上腺、殘余的子宮和卵巢，用于組織學(xué)檢查。稱重卵巢和腎上腺。
試驗2采用12-30只成年CD種雌性大鼠作為試驗動物。將它們等數(shù)量分成2組。監(jiān)測所有動物的動情周期。在動情期開始時對每只雌鼠施行外科手術(shù)。將每組雌鼠的左子宮角移去，并將其分成眾多小塊，隨后將這些小塊松散地縫合在鄰近腸系膜血流的不同位點上。
在外科手術(shù)后大約50天，給第一組的動物腹膜內(nèi)注射水，連續(xù)21天，而同時對第二組動物腹膜內(nèi)注射1.0mg/千克體重的本發(fā)明化合物，處理期相同。經(jīng)過21天處理之后，將每只雌鼠處死，取出子宮內(nèi)膜移出物和腎上腺并稱重。測量作為生長標(biāo)志的移出物。監(jiān)測動情周期。
試驗3A.手術(shù)誘發(fā)子宮內(nèi)膜異位采用對子宮內(nèi)膜組織的自體移植誘導(dǎo)大鼠和/或兔子的子宮內(nèi)膜異位。對生殖成熟的雌性動物進(jìn)行兩側(cè)卵巢切除術(shù)，并提供外源性雌激素，由此產(chǎn)生特定和恒定的激素水平。向5-150只動物的腹膜內(nèi)移植自體子宮內(nèi)膜組織并提供雌激素以誘發(fā)移植組織生長。通過每天灌洗胃提供包括本發(fā)明化合物的治療物，連續(xù)灌洗3-16周，移出植入物并測量腫瘤的生長或消退情況。處死動物，收集完整的子宮角，評估子宮內(nèi)膜的狀態(tài)。
B.在裸鼠體內(nèi)植入人子宮內(nèi)膜組織將得自人子宮內(nèi)膜損傷處的組織移植到性成熟的閹割雌性裸鼠的腹膜內(nèi)。提供外源雌激素以誘導(dǎo)移植組織的生長。在某些情況下，在移植之前先將收集到的子宮內(nèi)膜細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。通過每天胃灌洗提供包括本發(fā)明化合物或載體的治療物，連續(xù)灌洗3-16周，并移出植入物，測量腫瘤的生長或消退情況。殺死動物，采集子宮并評估整個子宮內(nèi)膜的狀態(tài)。
試驗4A.將從人子宮內(nèi)膜損傷處采集到的組織體外保存，作為初級非轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物。通過無菌網(wǎng)或篩擠壓該外科樣品，或者挑去周圍組織以得到單細(xì)胞懸浮液。將細(xì)胞置于含有10％血清和抗菌素的培養(yǎng)基中。在有或無雌激素存在下分別測定生長率。評估細(xì)胞產(chǎn)生補體成分C3的能力和它們對生長因子和生長激素的應(yīng)答情況。在體外培養(yǎng)物中，測定用黃體制劑、GnRH、本發(fā)明化合物和載體處理后細(xì)胞的增值反應(yīng)。每周測量膽固醇雌激素受體的水平，以確定重要的細(xì)胞特性是否在體外得以保持。采用從5-25個病人體內(nèi)得到的組織。
在至少一個上述試驗中具有的活性就標(biāo)志著本發(fā)明化合物對子宮內(nèi)膜異位的治療是強有效的。
抑制主動脈平滑肌細(xì)胞增值/再狹窄的試驗方法本發(fā)明化合物具有抑制主動脈平滑肌細(xì)胞增值的能力。這可采用培養(yǎng)的兔主動脈平滑肌細(xì)胞證實，增值通過測量DNA合成測定。細(xì)胞按Ross在細(xì)胞生物學(xué)雜志(J.of Cell Bio.)，50172(1971)中所述的移出方法得到。將細(xì)胞平鋪于96孔微量滴定板5天。培養(yǎng)物長滿使其停止生長。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)至含0.5-2％貧血小板血漿、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素，1mC/ml3H-胸苷、20ng/ml血小板衍化生長因子和不同濃度本發(fā)明化合物的Dulbecco改性的Eagle培養(yǎng)基(DMEM)中。在二甲亞砜中制備本發(fā)明化合物的儲液，然后在上述測定介質(zhì)中稀釋到適當(dāng)濃度(0.01-30nM)。然后將細(xì)胞在37℃、5％ CO2/95％空氣下培養(yǎng)24小時。在24小時結(jié)束時將細(xì)胞固定在甲醇中。爾后按Bonin等在Exp.Cell Res.，181475-482(1989)中所述的閃爍計數(shù)法測定結(jié)合到DNA中的3H-胸苷。
本發(fā)明化合物對主動脈平滑肌細(xì)胞增值的抑制可通過測定它們對指數(shù)增長的細(xì)胞的作用進(jìn)一步證明。將兔主動脈平滑肌細(xì)胞接種于含10％胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素的DMEM的12孔組織培養(yǎng)板中。24小時后，細(xì)胞被附著，將培養(yǎng)基用含10％血清、2mML-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素和所需濃度的化合物的DMEM替代。使細(xì)胞生長4天。用胰蛋白酶處理細(xì)胞，并采用ZMCoulter計數(shù)器測定每次培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)。
本發(fā)明化合物在上述試驗中所具有的活性標(biāo)志著它們能有效地用于治療再狹窄。
本發(fā)明還提供了減輕婦女絕經(jīng)期后綜合癥的方法，該方法包括采用式I化合物的前述方法，而且還進(jìn)一步包括對婦女施用有效量雌激素和孕激素。這些治療物特別適用于治療骨質(zhì)疏松和降低血清膽固醇，這是由于患者會接受各種藥物的益處，同時本發(fā)明化合物能抑制雌激素和孕激素的不良副作用。在下面的任一絕經(jīng)期后試驗中，聯(lián)合治療的活性是指聯(lián)合治療可用于緩解婦女的絕經(jīng)期后綜合癥。
可從市場上購得各種形式的雌激素和孕激素?；诖萍に氐乃幇?，例如，乙炔基雌激素(0.01-0.03mg/天)、炔雌醇(0.05-0.15mg/天)和結(jié)合雌激素如Premarin(Wyeth-Ayerst；0.3-2.5mg/天)。基于孕激素的藥包括，例如，6α-甲-17-羥孕酮如Provera(Upjohn；2.5-10mg/天)、異炔諾酮(1.0-10.0mg/天)和炔諾酮(0.5-2.0mg/天)。優(yōu)選的基于雌激素的化合物為馬雌激素，而異炔諾酮和炔諾酮則是優(yōu)選的基于孕激素藥物。
以各種雌激素和孕激素為基質(zhì)的藥物施用方法與本領(lǐng)域中已知的方法一致。本發(fā)明的大多數(shù)方法是每天1-3次連續(xù)施用式I化合物。然而，周期療法對于子宮內(nèi)膜異位的治療特別有用，或者可用于緊急治療疾病的疼痛發(fā)作。對再狹窄的治療可局限于在諸如血管成形術(shù)的醫(yī)療手段進(jìn)行之后的短時間(1-6個月)間隔內(nèi)。
本文所用的術(shù)語“有效量”是指減輕本文所述的各種病理癥狀所需的本發(fā)明化合物的量。本發(fā)明化合物的特定施用劑量當(dāng)然由圍繞疾病的多種特定因素決定，包括例如施用化合物的種類、施用途徑、病人的狀態(tài)，以及所治療的病癥。典型的日劑量為約5mg/天-約600mg/天本發(fā)明化合物的無毒劑量水平。通常優(yōu)選的日劑量為約15mg/天-約80mg/天。
本發(fā)明化合物可通過多種途徑施用，包括口服、直腸、經(jīng)皮、皮下、靜脈、肌內(nèi)和經(jīng)鼻等途徑施用。這些化合物優(yōu)選在施用之前先加以配制，制劑種類的選擇由主治醫(yī)師決定。因此，本發(fā)明的另一方面提供了含有有效量式I化合物或其可藥用鹽的藥物組合物，其中，還任選地含有有效量雌激素或孕激素，以及可藥用載體、稀釋劑或賦形劑。
這種制劑中活性成分的總量為制劑重量的0.1％-99.9％。術(shù)語“可藥用”是指載體、稀釋劑、賦形劑和鹽必須和制劑其它成分相容，而且對受者無害。
本發(fā)明的藥物制劑可按照本領(lǐng)域中公知的方法采用公知且易得到的成分制備。例如，將式I化合物(和或不和雌激素或孕激素一起)與常規(guī)的賦形劑、稀釋劑或載體一同配制成片劑、膠囊、懸浮液、粉末等劑型。適于這類制劑的賦形劑、稀釋劑和載體的實例包括下列填料和填充劑如淀粉、蔗糖、甘露糖醇，和硅衍生物；粘合劑如羧甲基纖維素和其它纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；濕潤劑如甘油；崩解劑如碳酸鈣和碳酸氫鈉；阻滯溶解的物質(zhì)如石蠟；吸收促進(jìn)劑如季銨化合物；表面活性劑如鯨蠟醇、硬脂酸單甘油酯；吸附載體如高嶺土和膨潤土；以及潤滑劑如滑石，硬脂酸鈣和硬脂酸鎂以及聚乙二醇固體。
本發(fā)明化合物還可以配制成酏劑或適合常規(guī)口服施用的溶液，或配制成適合非腸道施用，例如通過肌內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)途徑施用的溶液。另外，本發(fā)明化合物非常適合配制成持續(xù)釋放制劑等劑型。這些制劑可如此構(gòu)成，以使活性成分在一段時間內(nèi)僅或優(yōu)選在特定的生理部位釋放。包衣、包封和保護(hù)性材料可用例如聚合物或石蠟制備。
通常式I化合物可單獨或與本發(fā)明藥物一起結(jié)合在常規(guī)制劑中施用。下述制劑實施例僅用來說明本發(fā)明，而不能認(rèn)為是對本發(fā)明范圍的限制。
制劑下述制劑中，“活性成分”是指式I化合物或其鹽。制劑1明膠膠囊硬明膠膠囊采用下述組分制備成分 用量(mg/膠囊)活性成分 0.1-1000淀粉，NF 0-650可流動淀粉粉末 0-650硅氧烷液體350厘池0-15
上述制劑可在合理的范圍內(nèi)變化。
采用下述組分制備片劑制劑2片劑成分 用量(mg/片)活性成分 2.5-1000微晶纖維素200-650霧化二氧化硅 10-650硬脂酸5-15將上述組分混合并壓制成片。
另一方面，每片中含2.5-1000mg活性成分的片劑可按下所述制備制劑3片劑成分 含量(mg/片)活性成分 25-1000淀粉 45微晶纖維素35聚乙烯吡咯烷酮4(10％水溶液)羧甲基纖維素鈉 4.5硬脂酸鎂 0.5滑石 1將活性成分、淀粉和纖維素通過No.45目U.S.篩并充分混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與所得的粉末混合，然后使之通過No.14目U.S.篩。將如此得到的顆粒在50-60℃下干燥并通過No.18目U.S.篩。將羧甲基淀粉鈉，硬脂酸鎂和滑石預(yù)先通過No.60U.S.篩，爾后再加到顆粒中，混合后用壓片機壓制，得到片劑。
每5ml劑量中含0.1-1000mg藥物的懸浮液按下所述制備制劑4懸浮液成分 含量(mg/5ml)活性成分 0.1-1000mg羧甲基纖維素鈉 50mg糖漿 1.25mg苯甲酸溶液0.10mL調(diào)味劑 適量著色劑 適量加純水至 5mL將藥物通過No.45目U.S.篩并與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合，形成潤滑漿料。用水稀釋苯甲酸溶液、調(diào)味劑和著色劑并在攪拌下加到漿料中。然后加入足量水至需要體積。
制備含下述組分的氣溶膠溶液制劑5氣溶膠成分 含量(％重量)活性成分0.25乙醇25.75推進(jìn)劑22(氯二氟甲烷)70.00將活性成分與乙醇混合并將混合物加到部分推進(jìn)劑22中，冷卻至30℃，轉(zhuǎn)移到填充裝置中。然后將需要量混合物填充到不銹鋼容器內(nèi)，用剩余的推進(jìn)劑稀釋。爾后再對容器安裝閥裝置。
栓劑按下所述制備制劑6栓劑成分 含量(mg/栓劑)活性成分250飽和脂肪酸甘油酯2,000將活性成分通過No.60目U.S.篩，爾后懸浮在用最低必需熱量預(yù)融化的飽和脂肪酸甘油酯中。隨后將混合物傾入2g公稱容量的栓劑模中，并使之冷卻。
靜脈制劑按下所述制備制劑7靜脈注射液成分 含量活性成分 50mg等滲鹽水 1,000mg將含上述組分的溶液以約1mL/分鐘速率靜脈注射給患者。制劑8復(fù)合膠囊I成分 含量(mg/膠囊)活性成分 50馬雌激素 1Avicel pH101 50淀粉1500 117.50硅油 2吐溫80 0.50Cab-O-Sil0.25制劑9復(fù)合膠囊II成分 含量(mg/膠囊)活性成分 50異炔諾酮 5Avicel pH101 82.50淀粉1500 90硅油 2吐溫800.50制劑10復(fù)合片劑成分 含量(mg/膠囊)活性成分 50馬雌激素 1玉米淀粉NF 50聚烯吡酮，K29-32 6Avicel pH101 41.50Avicel pH102 136.50交聯(lián)聚烯吡酮(Crospovidone)XL10 2.50硬脂酸鎂 0.50Cab-O-Sil0.50
權(quán)利要求
1.式I化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物
其中R1為-H、-OH、-O(C1-C4烷基)、-OCOC6H5、-OCO(C1-C6烷基)、或-OSO2(C4-C6烷基)；R2為C1-C6烷基或C5-C7環(huán)烷基，它們?nèi)芜x地被1-3個選自下面的取代基取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、氨基、硝基和鹵素；X為-CH(OH)-或-CH2-；M為-CH2CH2-或-CH＝CH-；n為2或3；和R3為1-哌啶基、1-吡咯烷基、甲基-1-吡咯烷基、二甲基-1-吡咯烷基、4-嗎啉代、二甲氨基、二乙基氨基、或1-六亞甲基亞氨基。
2.權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物，其中n為2。
3.權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物，其中R3為1-哌啶基。
4.權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物，其中R1為-OH或-OCH3。
5.權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物，其中R2為C1-C6烷基，乙基或己基。
6.權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物，其中X為-CH(OH)-或-CH2-。
7.權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物，其中M為-CH2CH2-、-CH＝CH-、-CH2-CH2-、-CH＝CH-。
8.一種藥物組合物，該組合物包括權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物，和任選的有效量雌激素或孕激素，以及可藥用的載體、稀釋劑或賦形劑。
9.一種緩解絕經(jīng)期后綜合癥癥狀的方法，該方法包括對需要這種治療的婦女施用有效量權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物。
10.權(quán)利要求9的方法，其中絕經(jīng)期后綜合癥病理癥狀導(dǎo)致骨質(zhì)疏松、心血管病和雌激素依賴性癌癥。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述的心血管病為血脂過多。
12.權(quán)利要求10的方法，其中所述的雌激素依賴性癌癥為乳腺癌或子宮癌。
13.一種抑制子宮纖維變性疾病的方法，包括對需要這種治療的婦女施用有效量權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物。
14.一種抑制子宮內(nèi)膜異位的方法，包括對需要這種治療的婦女施用有效量權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物。
15.一種抑制主動脈平滑肌細(xì)胞增殖的方法，包括對需要這種治療的婦女施用有效量權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物。
16.一種抑制再狹窄的方法，包括對需要這種治療的婦女施用有效量權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物。
17.一種緩解絕經(jīng)期后綜合癥癥狀的方法，該方法包括權(quán)利要求9中所述的方法，而且還進(jìn)一步包括對所述婦女施用有效量雌激素或孕激素。
18.式IIIf化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物
其中R1a為-H、-OH或-O(C1-C4烷基)；R2為C1-C6烷基或C5-C7環(huán)烷基，它們?nèi)芜x地被1-3個選自下面的取代基取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、氨基、硝基和鹵素；M為-CH2CH2-或-CH＝CH-；和Y1為-OH、-OCH3或-O(CH2)n-Z，其中n為2或3，且Z為離去基團。
19.權(quán)利要求18的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物，其中R1為-OH、-O(C1-C4烷基)、-OCH3。
20.權(quán)利要求18的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物，其中R2為C1-C6烷基、乙基、己基或環(huán)烷基。
21.權(quán)利要求18的化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物，其中Y1為-OH、-OCH3或-O(CH2)n-Z，其中n為2或3，且Z為離去基團。
全文摘要
本發(fā)明提供了式(Ⅰ)化合物或其可藥用的鹽:其中:R
文檔編號A61P3/00GK1198668SQ96197331
公開日1998年11月11日 申請日期1996年7月26日 優(yōu)先權(quán)日1995年7月31日
發(fā)明者J·A·多格, K·J·法黑, C·D·喬內(nèi)斯, C·W·盧加爾 申請人:伊萊利利公司