專(zhuān)利名稱(chēng)：一種隱孔菌菌粉的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物的生產(chǎn)方法，特別是一種隱孔菌菌粉的生產(chǎn)方法。
隱孔菌Cryptoporus volvatus(peck)Hubbard屬于非褶菌目，多孔菌科，隱孔菌屬，只有單一的一個(gè)隱孔菌種。具有平喘、止咳、祛痰、抗過(guò)敏、抗感染等藥用功效，是一種高效、低毒、無(wú)副作用的藥物。其植物形態(tài)、生長(zhǎng)環(huán)境、生物學(xué)特性、藥用功效等已在國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)雜志中作過(guò)多次報(bào)道，如《藥用真菌隱孔菌的生物學(xué)特性研究》(作者華啟洪、孫靜、沈禮，“中國(guó)中藥雜志”1991年第16卷第12期)；《中藥隱孔菌揮發(fā)油成分研究》(作者華啟洪、金國(guó)梁、沈禮，“中國(guó)藥學(xué)雜志”1993年第28卷第2期)；《中藥隱孔菌的化學(xué)成分》作者華啟洪、金國(guó)梁，“植物資源與環(huán)境”1993.2(1)60-61頁(yè))。《隱孔菌生產(chǎn)的抗腫瘤多糖》(Antitumor polysaccharigdesproduced by Cryptoporus)[作者Usno，Saburo等，japen，kekai7894，021，1978；C.A.Vol，89，195409h).《隱孔菌生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)素》(Nutritional reguirents forgrowth of Cryptoporus volvatus)作者Peffey，ThomasM.Can.J.Bot.1989.67(8)，2532-4，1989；C.A.Voi.111.211745v。《云南本草》(作者蘭茂，云南人民出版社出版，)見(jiàn)附件。野生隱孔菌在黑龍江、河北、湖北、福建、廣東、廣西、海南島、四川、云南、西藏、陜西、吉林、浙江、江西等省均有分布，但比較分散，采集加工困難，而且藥源數(shù)量稀少。隱孔菌菌種可由野生隱孔菌經(jīng)組織分離、馴化培養(yǎng)獲得，也可以直接向中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所購(gòu)買(mǎi)(見(jiàn)附件證明)，因此隱孔菌已經(jīng)多次在國(guó)內(nèi)外期刊文獻(xiàn)中使用，為本領(lǐng)域的專(zhuān)業(yè)人員所熟知，菌種也可以任意購(gòu)得，可以認(rèn)為隱孔菌菌種是公眾能夠得到的，所以該菌種的生產(chǎn)方法申請(qǐng)專(zhuān)利時(shí)，不需要提交中國(guó)專(zhuān)利局指定的單位保藏。我國(guó)支氣管哮喘的患病率占總?cè)丝诘?.29％左右，達(dá)四、五千萬(wàn)人之多，且尚有日益增多的趨勢(shì)，目前臨床上使用的藥物有一定的副作用和毒性，尤其對(duì)心血管的副作用更大，雖然隱孔菌具有很好的平喘、止咳功效，且低毒無(wú)副作用，可以成為一種優(yōu)良的平喘、止咳藥物。但尚未有工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)隱孔菌藥物的報(bào)導(dǎo)。
本發(fā)明的目的就是要提供一種隱孔菌菌粉的規(guī)?；a(chǎn)方法。
本發(fā)明的任務(wù)是以如下方式完成的一種隱孔菌菌粉的生產(chǎn)方法，其特點(diǎn)在于(a)將保存在4±1℃條件下的已知隱孔菌菌種Cryptoporusvolvatus(peck)Hubbard通過(guò)無(wú)菌操作移植到下述培養(yǎng)基中，在23—30℃條件下活化培養(yǎng)6-7天，培養(yǎng)基的組分和含量為葡萄糖 10-50g玉米粉 5-20g酵母粉 0.5-2gKH2PO40.5-2gMgSO40.2-1gVB13.0-5.0mg瓊脂20g水 1000ml上述培養(yǎng)基的PH值為4—7，消毒滅菌，然后(b)將上述活化后的隱孔菌菌絲移入內(nèi)裝200-250ml下述培養(yǎng)基的1000ml三角燒瓶中，在振蕩頻率為150-220rmp、溫度為23—30℃條件下在旋轉(zhuǎn)式搖瓶機(jī)中振蕩培養(yǎng)5天，培養(yǎng)基的組分及含量為
葡萄糖 20-50g玉米粉 10-20g酵母粉 1-3gKH2PO40.1-1gMgSO40.05-0.5gVB13.0-5.0mg水 1000ml上述培養(yǎng)液的PH值為4-7，消毒滅菌，然后(c)在100l3的種子罐中裝入等于或小于70％罐容量的下述培養(yǎng)液，用壓差法移接相當(dāng)于罐容量5-10％搖瓶培養(yǎng)的隱孔菌菌絲液，在通風(fēng)量為1∶0.2-1.0(v/v分鐘)，葉輪攪拌速度為100-200rpm，罐壓0.5-1.0kg/cm2，溫度23-30℃條件下培養(yǎng)48h，培養(yǎng)液的組分及含量為葡萄糖 50-400g玉米漿 4-15g蛋白胨 1-8g酵母膏 1-3gKH2PO40.5-2gMgSO40.25-1.0g(NH4)2SO42-8g水 1000ml上述養(yǎng)液的PH值為4-7，消毒滅菌，然后(d)在1000l3-5000l3的發(fā)酵罐中裝入等于或小于70％罐容量的下述培養(yǎng)液，再裝入5-10％罐容量的種子罐培養(yǎng)的隱孔菌菌絲液，在通風(fēng)量為1∶0.2-0.6(v/v分鐘)，葉輪攪拌速度為100-200rpm，罐壓0.5-1.0kg/cm2，溫度為23-30℃條件下培養(yǎng)發(fā)酵4天，培養(yǎng)液的組分及含量為葡萄糖 50-400g玉米漿 4-15g蛋白胨 1-8g酵母膏 1-3gKH2PO40.5-2gMgSO40.25-1.0g(NH4)2SO42-8g水 1000ml上述培養(yǎng)液的PH值為4-7，消毒滅菌，然后(e)將上述發(fā)酵罐內(nèi)的隱孔菌菌絲液體壓濾，所得隱孔菌菌絲體濾餅在70-100℃條件下烘干、粉碎、過(guò)篩得到顆粒小于60目的隱孔菌菌粉。
本發(fā)明方法和已知技術(shù)相比，所采用的隱孔菌菌種易得，由于它通過(guò)三級(jí)通氣發(fā)酵進(jìn)行自我繁殖而被大量獲得，其得率達(dá)到0.4-1.2％。本發(fā)明方法所采用的培養(yǎng)基，培養(yǎng)液中的碳源和氮源組分價(jià)格很便宜、含量也不高，因此生產(chǎn)成本很低。將用本發(fā)明方法生產(chǎn)的隱孔菌菌粉裝入膠囊即可構(gòu)成《平喘膠囊》藥物，按年產(chǎn)隱孔菌菌粉4T計(jì)，可生產(chǎn)57萬(wàn)盒平喘膠囊(0.29g×24/盒＝6.96g/盒)，每盒成本約3元，出廠(chǎng)價(jià)為21元/盒，稅后利潤(rùn)為14.94元/盒，總利潤(rùn)為850萬(wàn)元。按我國(guó)4-5千萬(wàn)病人中有1％，服平喘膠囊一個(gè)療程(9?！?5天)計(jì)，每年預(yù)計(jì)銷(xiāo)售量為240萬(wàn)盒，總年利潤(rùn)約3600萬(wàn)元，因此具有很好的經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明方法無(wú)污染，因此也有很好的環(huán)境效益。
用本發(fā)明方法生產(chǎn)的隱孔菌菌粉所作的藥理試驗(yàn)如下試驗(yàn)單位(浙江醫(yī)科大學(xué)杭州分校)1、鎮(zhèn)咳試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法小白鼠氨水引咳法
※5％阿拉伯樹(shù)膠1毫升/公斤。※※可待因50毫克/公斤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小白鼠服本發(fā)明方法生產(chǎn)的隱孔菌菌粉后，其在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的P值小于0.05，表明鎮(zhèn)咳效果顯著，以大劑量試驗(yàn)的效果為最佳。
2、祛痰作用實(shí)驗(yàn)方法采用小白鼠酚紅法。
5％阿拉伯樹(shù)膠1毫升/公斤。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用本發(fā)明方法生產(chǎn)的隱孔菌菌粉其祛痰效果很好，小、中、大劑量組在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的P值均小于0.01，具有非常顯著的效果。
3、平喘作用實(shí)驗(yàn)方法采用藥物性豚鼠哮喘模型，藥物引喘法
實(shí)驗(yàn)表明，劑量在208毫克/公斤和2380毫克/公斤時(shí)，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的P值均小于0.01，表明本發(fā)明方法生產(chǎn)的隱孔菌菌粉的平喘效果非常顯著。
4、對(duì)豚鼠卵蛋白過(guò)敏性哮喘的拮抗作用實(shí)驗(yàn)方法采用豚鼠過(guò)敏性支氣管痙攣試驗(yàn)法。
生理鹽水※※含(生藥)39.21毫克/毫升實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明方法生產(chǎn)的隱孔菌菌粉對(duì)抗過(guò)敏的作用非常顯著，其在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的P值小于0.01。
5、隱孔菌菌粉毒性生試驗(yàn)(1)急性毒性試驗(yàn)(LD50)口服(粉劑)LD50＞66克/公斤，最大耐授量39克/公斤～50.7克/公斤
30.98毫克/公斤，22.77毫克/公斤(2)長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)(三個(gè)月)實(shí)驗(yàn)結(jié)果服藥三個(gè)月后血液學(xué)檢查和血清生化測(cè)定的各項(xiàng)指標(biāo)都正常，病理切片觀(guān)察，無(wú)異常發(fā)現(xiàn)，證明菌粉對(duì)心、肝、腎、脾、腦、睪丸或卵巢和造血系統(tǒng)等25個(gè)器官組織均無(wú)毒性反應(yīng)。
6、臨床資料病例采自杭州市一院內(nèi)科門(mén)診成年及13歲以下支氣管哮喘的患者。11例均為反復(fù)發(fā)作性或長(zhǎng)期持性呼吸困難伴有肺部哮鳴音者。服用本發(fā)明方法生產(chǎn)的隱孔菌菌粉膠囊，成人每日三次，每次服三顆(每顆含隱孔菌菌粉0.29g)，兒童減半，服2-3周為一個(gè)療程，隨后評(píng)定效果。
試驗(yàn)結(jié)果，本組11例治后止咳、祛痰、平喘顯效高達(dá)81.8％，好轉(zhuǎn)者9.2％，其中顯效者經(jīng)隨訪(fǎng)二個(gè)月臨床癥狀無(wú)發(fā)作，且兩肺哮鳴音消失。11例患者治療前后測(cè)得CAMP及其比值(CAMP/CGMP)相比較有明顯差異(P＜0.05)，治療后顯見(jiàn)CAMP增高。臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，其療效與藥理試驗(yàn)的結(jié)果完全一致。表明本發(fā)明方法生產(chǎn)的隱孔菌菌粉作為藥物具有很好的社會(huì)效益。
以下提供用本發(fā)明方法生產(chǎn)隱孔菌菌粉的三個(gè)實(shí)施例。
實(shí)施例一(a)將保存在5℃條件下的已知隱孔菌菌種Cryptoporusvolvatus(peck)Hubbard通過(guò)無(wú)菌操作移植到下述培養(yǎng)基中，在23℃條件下培養(yǎng)6天，菌絲已長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)斜面。
培養(yǎng)基配方葡萄糖10g玉米粉5g
酵母粉0.5gKH2PO40.5gMgSO40.2gVB13.0mg瓊脂 20g水1000ml上述培養(yǎng)基配方PH值為4菌絲生長(zhǎng)情況菌絲灰白色，纖細(xì)、稀疏、生長(zhǎng)緩慢，生長(zhǎng)勢(shì)較差，(b)將上述活化隱孔菌菌種的菌絲移入內(nèi)裝200m1下述液體培養(yǎng)基的1000ml三角燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)式搖瓶機(jī)振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為100rpm，在23℃條件下振蕩培養(yǎng)5天。菌絲生長(zhǎng)緩慢，培養(yǎng)基中形成一定數(shù)量的菌球，液體培養(yǎng)基配方葡萄糖20g玉米粉10g酵母粉1gKH2PO41gMgSO40.5gVB13.0mg水1000ml上述培養(yǎng)基的PH值為4(c)在100l3的種子罐中裝入60％罐容量的下述培養(yǎng)液，用壓差法移接相當(dāng)于罐容量5％搖瓶培養(yǎng)的隱孔菌菌絲液，在通風(fēng)量為1∶0.2(v/v分鐘)葉輪攪拌速度為100rpm，罐壓為0.5公斤/cm2，溫度為23℃條件下培養(yǎng)48h，
培養(yǎng)液的配方為葡萄糖50g玉米漿4g蛋白胨1g酵母膏1gKH2PO40.5gMgSO40.25g(NH4)2SO42g水1000ml上述培養(yǎng)液的PH值為4，消毒滅菌，然后(d)在1000ml的發(fā)酵罐中裝入60％罐容量的下述培養(yǎng)液，再裝入5％罐容量的種子罐培養(yǎng)的隱孔菌菌絲液，在通風(fēng)量為1∶0.2(V/V分鐘)，葉輪攪拌速度為100rpm，罐壓為0.5公斤/cm2，培養(yǎng)溫度為22℃，發(fā)酵培養(yǎng)4天，培養(yǎng)液配方為葡萄糖50g玉米漿4g蛋白胨1g酵母膏1gKH2PO40.5gMgSO40.25g(NH4)2SO42g水1000ml上述培養(yǎng)液的PH值為4，消毒滅菌，然后(e)將上述發(fā)酵罐內(nèi)的隱孔菌菌絲液用板框壓濾，得到隱孔菌菌絲體的濾餅，在80℃的烘房?jī)?nèi)烘干，經(jīng)過(guò)粉碎，用60目篩子過(guò)篩得到隱孔菌菌粉，其得率為0.4-0.5％。
實(shí)施例二(a)將保存在4℃條件下的已知隱孔菌菌種Cryptorusvolvatus(peck)Hubbard通過(guò)無(wú)菌操作移植到下述培養(yǎng)基中，在26℃條件下培養(yǎng)6天，菌絲已長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方葡萄糖 35g玉米粉 10g酵母粉 1gKH2PO41gMgSO40.5gVB14.6mg瓊脂 20g水 1000ml上述培養(yǎng)基的PH值為6菌絲生長(zhǎng)情況菌絲生長(zhǎng)十分旺盛，菌絲粗壯，純白色，氣生菌絲濃密，生長(zhǎng)勢(shì)好，(b)將活化的隱孔菌菌種的菌絲移入內(nèi)裝250毫升下述培養(yǎng)基的1000ml的三角燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)式搖瓶機(jī)振蕩培養(yǎng)。振蕩頻率為150rpm，在26℃條件下振湯培養(yǎng)5天、菌絲生長(zhǎng)快，培養(yǎng)基中菌絲濃，菌球大小均勻，直徑約0.3-0.4mm，培養(yǎng)液清、淡黃色，培養(yǎng)基配方葡萄糖 35g玉米粉 15g
酵母粉 2gKH2PO40.5gMgSO40.1gVB14.6mg水 1000ml上述培養(yǎng)基的PH值為6，消毒滅菌，然后(c)在100l3種子罐中裝入70％罐容量的下述培養(yǎng)液，用壓差法移接相當(dāng)于罐容量10％搖瓶培養(yǎng)的隱孔菌菌絲液，在通風(fēng)量為1∶0.3(v/v分鐘)，葉輪攪拌速度為150rpm，罐壓為1kg/cm2，溫度為26℃條件下培養(yǎng)48h，培養(yǎng)液的配方為葡萄糖 350g玉米漿 10g蛋白胨 5g酵母膏 2gKH2PO41gMgSO40.5g(NH4)2SO45g水 1000ml上述培養(yǎng)液的PH值為6，消毒滅菌，然后(d)在5000l3的發(fā)酵罐中裝入70％罐容量的下述培養(yǎng)液，再裝入10％罐容量的種子罐培養(yǎng)的隱孔菌菌絲液，在通風(fēng)量為1∶0.3(v/v分鐘)，葉輪攪拌速度為150rpm，罐壓為1kg/cm2，培養(yǎng)溫度為26℃，發(fā)酵培養(yǎng)4天，發(fā)酵產(chǎn)物有濃郁芳香撲鼻的揮發(fā)性氣味，顏色棕色，
培養(yǎng)液配方葡萄糖 350g玉米漿 10g蛋白胨 5g酵母膏 2gKH2PO41gMgSO40.5g(NH4)2SO45g水 1000ml上述培養(yǎng)液的PH值為6，消毒滅菌，然后(e)將上述發(fā)酵罐內(nèi)的隱孔菌菌絲液體用板框壓濾，得到隱孔菌菌絲體濾餅，在90℃的烘房?jī)?nèi)烘干，經(jīng)粉碎并用60目篩子過(guò)篩，得到隱孔菌菌粉，本實(shí)施例隱孔菌菌粉的得率高達(dá)1.2％，所用培養(yǎng)液組分的含量居中，生產(chǎn)成本也最低。
實(shí)施例三(a)將保存在3℃條件下的已知隱孔菌菌種Cryptoporusvolvatus(peck)Hubbard通過(guò)無(wú)菌操作移植到下述培養(yǎng)基中，在30℃條件下培養(yǎng)7天，培養(yǎng)基配方葡萄糖 50g玉米粉 20g酵母粉 2gKH2PO42gMgSO41gVB15.0mg
瓊脂 20g水 1000ml上述培養(yǎng)基的PH值為7菌絲生長(zhǎng)情況菌絲生長(zhǎng)較快，菌絲纖細(xì)，稀疏，灰白色，生長(zhǎng)勢(shì)較差。
(b)將上述活化隱孔菌菌種的菌絲移入內(nèi)裝250毫升已滅菌的下述培養(yǎng)液的1000ml三角燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)式搖瓶機(jī)振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為200rpm，在30℃條件下振蕩培養(yǎng)5天，菌絲生長(zhǎng)情況比實(shí)施例二差，培養(yǎng)基配方葡萄糖 50g玉米粉 20g酵母粉 3gKH2PO40.1gMgSO40.05gVB15.0mg水 1000ml上述培養(yǎng)基的PH值為7，消毒滅菌，然后(c)在100l3的種子罐中裝入65％罐容量的下述培養(yǎng)液，用壓差法移接相當(dāng)于罐容量7％搖瓶培養(yǎng)的隱孔菌菌絲液，在通風(fēng)量為1∶0.6(v/v分鐘)，葉輪攪拌速度為200rpm，罐壓為1kg/cm2，溫度為30℃的條件下培養(yǎng)48h，培養(yǎng)液配方葡萄糖 400g玉米漿 15g
蛋白胨8g酵母膏3gKH2PO42gMgSO41g(NH4)2SO48g水1000ml上述培養(yǎng)液PH值為7，消毒滅菌，然后(d)在1000l3發(fā)酵罐中裝入65％罐容量的下述培養(yǎng)液，再裝入7％罐容量的種子罐培養(yǎng)的隱孔菌菌絲液，在通風(fēng)量為1∶0.6(v/v分鐘)，葉輪攪拌度為200rpm，罐壓為1kg/cm2，培養(yǎng)溫度為30℃條件下發(fā)酵培養(yǎng)4天，培養(yǎng)液配方葡萄糖400g玉米漿15g蛋白胨8g酵母膏3gKH2PO42gMgSO41g(NH4)2SO48g水1000ml上述培養(yǎng)液PH值為7(e)將所得發(fā)酵液經(jīng)板框壓濾得隱孔菌菌絲體濾餅，在100℃烘房烘干，經(jīng)粉碎，用60目篩子過(guò)篩，得到隱孔菌菌粉。
本實(shí)施例的碳源和氮源的用量均較高，培養(yǎng)基PH值偏高，培養(yǎng)溫度取上限，生產(chǎn)得率不高，只有0.4-0.5％。
權(quán)利要求
1.一種隱孔菌菌粉的生產(chǎn)方法，其特征在于(a)將保存在4±1℃條件下已知的隱孔菌菌種Cryptoporusvolvatus(peck)Hubbard通過(guò)無(wú)菌操作移植到下述培養(yǎng)基中，在23-30℃條件下活化培養(yǎng)6-7天，培養(yǎng)基的組分和含量為葡萄糖10-50g玉米粉5-20g酵母粉0.5-2gKH2PO40.5-2gMgSO40.2-1gVB13.0-5.0mg瓊脂 20gH2O 1000ml上述培養(yǎng)基的PH值為4-7、消毒滅菌，然后，(b)將上述活化后的隱孔菌菌絲移入內(nèi)裝200-250ml下述培養(yǎng)液的1000ml三角燒瓶中、在振蕩頻率為150-220rmp、溫度為23-30℃條件下在旋轉(zhuǎn)式搖瓶機(jī)中振蕩培養(yǎng)5天，培養(yǎng)液的組分和含量為葡萄糖20-50g玉米粉10-20g酵母粉1-3gKH2PO40.1-1gMgSO40.05-0.5gVB13.0-5.0mg水 1000ml上述培養(yǎng)液的PH值為4-7、消毒滅菌，然后(c)在100l3的種子罐中裝入等于或小于70％罐容量的下述培養(yǎng)液，用壓差法移接相當(dāng)于罐容量5-10％搖瓶培養(yǎng)的隱孔菌菌絲液，在通風(fēng)量為1∶0.2-1.0(v/v分鐘)、葉輪攪拌速度為100-200rpm、罐壓0.5-1.0kg/cm2，溫度23-30℃條件下培養(yǎng)48h，培養(yǎng)液的組分及含量為葡萄糖 50-400g玉米粉 4-15g蛋白胨 1-8g酵母膏 1-3gKH2PO40.5-2gMgSO40.25-1g(NH4)2SO42-8g水 1000ml上述培養(yǎng)液的PH值為4-7，消毒滅菌，然后(d)在1000-5000l3的發(fā)酵罐中裝入等于或小于70％罐容量的下述培養(yǎng)液，再裝入5-10％罐容量的種子罐培養(yǎng)的隱孔菌菌絲液，在通風(fēng)量為1∶0.2-0.6(v/v分鐘)，葉輪攪拌速度為100-200rpm，罐壓0.5-1.0kg/cm2，溫度為23-30℃條件下培養(yǎng)發(fā)酵4天，培養(yǎng)液的組分及含量為葡萄糖 50-400g玉米漿 4-15g蛋白胨 1-8g酵母膏 1-3gKH2PO40.5-2gMgSO40.25-1g(NH4)2SO42-8g水 1000ml上述培養(yǎng)液的PH值為4-7，消毒滅菌，然后(e)將上述發(fā)酵罐內(nèi)的隱孔菌菌絲液體壓濾，所得隱孔菌菌絲體濾餅在70-100℃條件下烘干、粉碎、過(guò)篩得到顆粒小于60目的隱孔菌菌粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的隱孔菌菌粉的生產(chǎn)方法，其特征在于(a)將保存在4℃條件下的已知隱孔菌菌種通過(guò)無(wú)菌操作移植到下述培養(yǎng)基中，在26℃條件下培養(yǎng)6天，培養(yǎng)基配方葡萄糖 35g玉米粉 10g酵母粉 1gKH2PO41gMgSO40.5gVB14.6mg瓊脂 20g水 1000ml上述培養(yǎng)基的PH值為6(b)將活化的隱孔菌菌種的菌絲移入內(nèi)裝250ml下述培養(yǎng)基的1000ml的三角燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)式搖瓶機(jī)振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為150rmp，在26℃條件下振蕩培養(yǎng)5天培養(yǎng)基配方葡萄糖 35g玉米粉 15g酵母膏 2gKH2PO40.5gMgSO40.1gVB14.6mg水 1000ml上述培養(yǎng)基的PH值為6，消毒滅菌，然后(c)在100l3種子罐中裝入70％罐容量的下述培養(yǎng)液，用壓差法移接相當(dāng)于罐容量10％搖瓶培養(yǎng)的隱孔菌菌絲液，在通風(fēng)量為1∶0.3(v/v分鐘)，葉輪攪拌速度為150rpm，罐壓為1kg/cm2，溫度為26℃條件下培養(yǎng)48h，培養(yǎng)液的配方為葡萄糖 350g玉米漿 10g蛋白胨 5g酵母膏 2gKH2PO41gMgSO40.5g(NH4)2SO45g水 1000ml上述培養(yǎng)液的PH值為6，消毒滅菌，然后(d)在5000l3的發(fā)酵罐中裝入70％罐容量的下述培養(yǎng)液，再裝入10％罐容量種子罐培養(yǎng)的隱孔菌菌絲液，在通風(fēng)量為1∶0.3(v/v分鐘)，葉輪攪拌速度為150rpm，罐壓為1kg/cm2，培養(yǎng)溫度為26℃，發(fā)酵培養(yǎng)4天，培養(yǎng)液配方為葡萄糖350g玉米漿10g蛋白胨5g酵母膏2gKH2PO41gMgSO40.5g(NH4)2SO45g水1000ml上述培養(yǎng)液的PH值為6，消毒滅菌，然后(e)將上述發(fā)酵罐內(nèi)的隱孔菌菌絲液體用板框壓濾，得到隱孔菌菌絲體濾餅，在90℃的烘房?jī)?nèi)烘干，經(jīng)粉碎并用60目篩子過(guò)篩，得到隱孔菌菌粉。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種隱孔菌菌粉的生產(chǎn)方法。隱孔菌菌絲在23-30℃、pH為4-7的培養(yǎng)基中培養(yǎng)6-7天；移入帶培養(yǎng)液的燒瓶中振蕩培養(yǎng)5天(頻率150-220rpm、溫度23-30℃)；用壓差法將菌絲液移入帶培養(yǎng)液的種子罐中培養(yǎng)48h(通風(fēng)量1∶0.2-1.0(v/v分鐘)，葉輪攪拌速度100-200rpm，罐壓0.5-1.0kg/cm
文檔編號(hào)A61K36/185GK1121111SQ9411722
公開(kāi)日1996年4月24日 申請(qǐng)日期1994年10月15日 優(yōu)先權(quán)日1994年10月15日
發(fā)明者華啟洪, 金國(guó)梁, 孫靜 申請(qǐng)人:華啟洪, 金國(guó)梁, 孫靜