專利名稱：大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從大越豆芋花中同時(shí)制備皂苷和多糖的方法及其用途。
背景技術(shù)：
大越豆芋C^io1S americana Medikus)屬多年生豆科植物，又稱Potato bean、American ground nut,纏繞藤本,5_7片小葉一復(fù)葉，紫色小花,蝶形花冠，原產(chǎn)于美國西部，地下塊莖作為無性繁殖或食用，是一種天然的高蛋白、高鈣食品。由于具有其極高的營養(yǎng)和保健作用60年代被日本政府引進(jìn)和開發(fā)，并被廣泛應(yīng)用于各種食品或食品配料中，已經(jīng)成為日本家喻戶曉的保健食品，主要對現(xiàn)代生活方式病(如高血壓、糖尿病、肥胖、骨質(zhì)疏松等)具有明顯改善效果，并具有抗癌和抗HIV活性成分。目前，大越豆芋已成功引種至中國，在浙江省杭州地區(qū)、寧波地區(qū)、溫州地區(qū)、金華地區(qū)均有栽培和利用。但目前，未發(fā)現(xiàn)有對大越豆芋皂苷和多糖的提取方法與用途的相關(guān)報(bào)道。此外，大越豆芋花目前基本處于廢棄狀態(tài)，未能開發(fā)利·用，造成了資源的浪費(fèi)。目前在別的植物上有皂苷和多糖同時(shí)提取的工藝的報(bào)道，如中國專利(申請?zhí)?01110029129. 1，申請公布號CN102178720A)公開了一種從絞股藍(lán)中同時(shí)制備總皂營和多糖的方法，但存在純度低等方面的不足。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種成本低、原料綜合利用，并且對環(huán)境污染小的同時(shí)制備豆芋花皂苷和多糖的方法，并提供用該方法制備的大越豆芋花皂苷和多糖在制備具有抗氧化、血糖調(diào)節(jié)作用的藥物或功能食品中的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案如下
大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于按以下步驟
1)采摘大越豆芋花，清洗，干燥，粉碎，過40目篩，得到大越豆芋花粉末；
2)大越豆芋花粉末，按照料液比1:10-1:20，加入濃度為70%-90%乙醇，在50-80°C回流提取1-3次，每次時(shí)間1-3小時(shí)，過濾，得上清液和濾渣；
3)上清液，揮干后用水溶解，石油醚脫脂，正丁醇萃取，取正丁醇部分經(jīng)大孔吸附樹脂吸附洗脫后，濃縮，干燥得到豆芋花皂苷粉；
4)濾渣，揮干溶媒，用其重量10-20倍的蒸餾水，于70-90°C回流提取1-3次，每次時(shí)間2-3小時(shí)，過濾，收集合并濾過液；
5)濾過液脫色、脫蛋白，濃縮，加入乙醇，靜置過夜進(jìn)行醇沉，收集沉淀，透析后，用DEAE-纖維素柱層析，分別用蒸餾水、0. 1M，0. 3M，0. 5M NaCl溶液洗脫液，收集0. 3M-0. 5MNaCl洗脫液，透析，濃縮，干燥，得豆芋花多糖。所述的大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于步驟2)所述料液比為1:15-1:20，優(yōu)選為1:20 ;乙醇濃度為80-90%，優(yōu)選90% ；回流提取溫度為60_70°C，優(yōu)選700C ;回流提取2次，每次時(shí)間2小時(shí)。所述的大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于步驟3)所述的大孔吸附樹脂為DlOl或AB-8，洗脫所采用的洗脫液為質(zhì)量濃度為60%-90%的乙醇。所述的大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于步驟5)所述的脫色方法為活性炭脫色或過氧化氫脫色；所述的脫蛋白方法為sevage法、三氯乙酸法、氯化鈉法或氯化鈣法；所述的醇沉為加入乙醇使醇沉濃度為75-95% ;所述透析采用3KD透析膜。所述的大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于步驟I)、步驟3)和步驟5)所述的干燥方法為冷凍干燥或真空干燥。所述的大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于所述洗脫液為質(zhì)量濃度75%的乙醇。所述的大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于醇沉濃度為90-95%。上述方法同時(shí)制備了大越豆芋花總皂苷和多糖，制備得到的大越豆芋花皂苷和多糖可達(dá)到較高的提取率和純度，其中大越豆芋花皂苷產(chǎn)量可達(dá)到2-3. 5%，純度為90-97% ；大越豆芋花多糖產(chǎn)量可達(dá)到0. 5-2%，純度為94-98%。制備得到的大越豆芋 花總皂苷可以作為制備抗氧化活性的藥物或功能食品添加齊U，大越豆芋花多糖可以作為制備調(diào)節(jié)血糖的藥物或功能食品添加劑，如大越豆芋花多糖用于制備治療糖尿病等藥物。上述制備方法提取的活性成分作為清除自由基、調(diào)節(jié)血糖、血脂等藥品和功能食品配料使用，療效好，應(yīng)用范圍廣，安全無毒性，大越豆芋花活性成分作為一類天然藥物、保健食品功能因子、膳食補(bǔ)充劑的綠色寶庫，若能加以開發(fā)利用，可以為開發(fā)抗氧化劑，調(diào)節(jié)血糖紊亂提供新途徑，也對發(fā)展我國的區(qū)域經(jīng)濟(jì)和人民的健康提供技術(shù)支持。綜上所述，本發(fā)明具有步驟簡單、得率高、成本低的優(yōu)點(diǎn)，而且本發(fā)明從大越豆芋花中同時(shí)制備得到兩類物質(zhì)，原料利用率高，而且所制備的大越豆芋花總皂苷和多糖純度高，活性強(qiáng)，用途廣泛，不僅可單獨(dú)使用還可以與其他天然藥物配合使用。
具體實(shí)施例方式現(xiàn)結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例1 :
大越豆芋花總皂苷提取工藝優(yōu)化
豆芋花去梗清雜后冷凍干燥，低溫保存；提取前用快速水分測定儀測定花樣中的實(shí)際水分含量，試樣皂苷含量及抗氧化性能均折合成花干基計(jì)算。工藝流程豆芋花粉末一在一定條件下回流提取一趁熱過濾一洗渣一定容一分析測試。總皂苷含量的測定方法如下
精密稱取熊果酸對照品2. 5mg,加無水乙醇定容至IOmL,即得250 u g/mL熊果酸標(biāo)準(zhǔn)液。精密吸取對照品溶液0，100，150，200，250，300，350，400 U I分別置于5mL容量瓶中，揮干溶劑，分別加入新配制的5%香草醛-冰乙酸200 u 1，高氯酸800 Ul，搖勻，置60°C水浴15min，取出放置冰水中冷卻，精密加入4ml冰乙酸，定容至刻度，混勻，20min后在548nm波長處測定吸收度A。以吸收度(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Y= 0. 0458X-0. 0002 (R2=O. 9998)。樣品皂苷含量的測定按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線制定方法測定吸收度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測液的總皂苷含量。大越豆芋花總皂苷不同提取參數(shù)設(shè)定及分析結(jié)果見表I。
權(quán)利要求
1.大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于按以下步驟1)采摘大越豆芋花，清洗，干燥，粉碎，過40目篩，得到大越豆芋花粉末；2)大越豆芋花粉末，按照料液比1:10-1:20，加入濃度為70%-90%乙醇，在50_80°C回流提取1-3次，每次時(shí)間1-3小時(shí)，過濾，得上清液和濾渣；3)上清液，揮干后用水溶解，石油醚脫脂，正丁醇萃取，取正丁醇部分經(jīng)大孔吸附樹脂吸附洗脫后，濃縮，干燥得到豆芋花皂苷粉；4)濾渣，揮干溶媒，用其重量10-20倍的蒸餾水，于70-90°C回流提取1_3次，每次時(shí)間2-3小時(shí)，過濾，收集合并濾過液；5)濾過液脫色、脫蛋白，濃縮，加入乙醇，靜置過夜進(jìn)行醇沉，收集沉淀，透析后，用 DEAE-纖維素柱層析，分別用蒸餾水、O. 1M，0. 3M，0. 5M NaCl溶液洗脫液，收集O. 3M-0. 5M NaCl洗脫液，透析，濃縮，干燥，得豆芋花多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于步驟2)所述料液比為1:15-1:20，優(yōu)選為1:20;乙醇濃度為80-90%，優(yōu)選90%;回流提取溫度為 60-70°C，優(yōu)選70°C ;回流提取2次，每次時(shí)間2小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于步驟3)所述的大孔吸附樹脂為DlOl或AB-8，洗脫所采用的洗脫液為質(zhì)量濃度為60%-90%的乙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于步驟 5)所述的脫色方法為活性炭脫色或過氧化氫脫色；所述的脫蛋白方法為sevage法、三氯乙酸法、氯化鈉法或氯化鈣法；所述的醇沉為加入乙醇使醇沉濃度為75-95% ;所述透析采用 3KD透析膜。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于步驟I)、步驟3)和步驟5)所述的干燥方法為冷凍干燥或真空干燥。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于所述洗脫液為質(zhì)量濃度75%的乙醇。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，其特征在于醇沉濃度為90-95%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述方法制備得到的大越豆芋花總皂苷作為制備抗氧化活性的藥物或功能食品添加劑的應(yīng)用，大越豆芋花多糖作為制備調(diào)節(jié)血糖的藥物或功能食品添加劑的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述方法制備得到的大越豆芋花總皂苷在清除DPPH自由基、ABTS+自由基、· OH自由基、02_ ·自由基上的應(yīng)用。
10.大越豆芋花多糖作為制備治療糖尿病藥物的應(yīng)用。
全文摘要
大越豆芋花總皂苷、多糖同時(shí)制備的方法，涉及植物提取技術(shù)領(lǐng)域，包括以下步驟1)原料采集、清洗、干燥；2)乙醇回流提，過濾，得上清液和濾渣；3)上清液，石油醚脫脂，正丁醇萃取，吸附洗脫后，濃縮，干燥得到豆芋花皂苷粉；4)濾渣，揮干溶媒，用水回流提取后，過濾，收集合并濾過液；5)濾過液脫色、脫蛋白，濃縮，醇沉，透析，濃縮，干燥，得豆芋花多糖。本發(fā)明具有步驟簡單、得率高、成本低的優(yōu)點(diǎn)，而且本發(fā)明從大越豆芋花中同時(shí)制備得到的總皂苷和多糖，純度高，活性強(qiáng)，可以在制備具有抗氧化、血糖調(diào)節(jié)作用的藥物或功能食品中得到廣泛應(yīng)用。
文檔編號A61P3/10GK103040917SQ20121057401
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月26日
發(fā)明者倪勤學(xué), 張有做, 舒恩成, 許光治, 高前欣, 楊冬冬 申請人:浙江農(nóng)林大學(xué)