專利名稱：一種獸用疫苗的即用型佐劑、制備及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及獸用疫苗佐劑領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)方佐劑制備方法及其含該復(fù)方佐劑的疫苗制備方法。
背景技術(shù)：
油性佐劑疫苗是已公知的可有效強(qiáng)化免疫性的疫苗，是目前國內(nèi)外疫苗市場(chǎng)上產(chǎn)品最多的類型之一，含油佐劑疫苗有三種劑型:油包水(W/0)型、水包油(0/W)型和水包油包水(W/0/W)型。油包水(W/0)型疫苗應(yīng)用最普遍，該劑型的顯著優(yōu)點(diǎn)是可獲得高水平持久的免疫增強(qiáng)效果；缺點(diǎn)是較粘稠，注射較困難，同時(shí)由于疫苗中白油含量相對(duì)較高，常常導(dǎo)致嚴(yán)重的接種副反應(yīng)、形成無菌性化膿損害和接種部位周圍的肉芽腫，可產(chǎn)生外部可見的浮腫、腫脹、硬結(jié)和壞死。有研究報(bào)道，油包水 (W/0)劑型疫苗在接種部位有留存的可能，因而妨礙了疫苗的使用。豬、犬、貓等動(dòng)物對(duì)該劑型疫苗尤其敏感，這也限制了其在生產(chǎn)實(shí)際中的應(yīng)用。水包油包水(W/0/W)劑型疫苗同時(shí)具有W/0型和0/W型的優(yōu)點(diǎn)，效果很好。常規(guī)的做法是先制備W/0型疫苗，再經(jīng)第二次分散到水相中制備而成。目的是降低黏度，既便于注射又具有良好的免疫原性。但制備技術(shù)上難度較大，疫苗穩(wěn)定性差。為減少乳劑中的油含量，降低粘度、易于注射，開發(fā)了新型佐劑，并建立了水包油(0/W)劑型疫苗。但是，該劑型的疫苗應(yīng)用并不普遍，僅僅在人用疫苗應(yīng)用方面有商業(yè)化，如MF59佐劑用于流感疫苗的制作，在動(dòng)物疫苗上尚未推廣應(yīng)用。原因在于水包油(0/W)劑型疫苗的免疫原性弱，僅誘導(dǎo)動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生較弱的免疫應(yīng)答，尚不能滿足養(yǎng)殖業(yè)疫病的防控需求。同時(shí)現(xiàn)有水包油(0/W)劑型疫苗無緩控緩釋的作用，一次免疫不能連續(xù)激發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)，免疫持續(xù)期很短。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種獸用疫苗的即用型佐劑，是水包油型佐劑，成分簡單、劑型穩(wěn)定，使用方便；該佐劑與抗原配制成的疫苗，穩(wěn)定性好，副反應(yīng)小，免疫效果好，保護(hù)期長。本發(fā)明的另一目的是提供上述獸用疫苗的即用型佐劑的制備方法。本發(fā)明的再一目的是提供含有獸用疫苗的即用型佐劑的水包油型疫苗。本發(fā)明的目的采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。一種獸用疫苗的即用型佐劑，按照質(zhì)量百分含量由下列物質(zhì)組成:
油 5%-30%，
親水性表面活性劑0.1%-10%，
親油性表面活性劑0.1%-10%，
高分子膠束物質(zhì)0.1%-10%，水 40%-90%。所述油為白油、角鯊?fù)楹徒酋徬┲械囊环N或者兩種的混合物。所述親水性表面活性劑為吐溫80、普魯尼克121或其混合物。所述親油性表面活性劑為司本80、司本85或其混合物。所述高分子膠束物質(zhì)為殼聚糖、卡波姆971P、羥甲基纖維素和二甲基雙十八烷基溴化銨中的一種或者兩種的混合物。一種所述獸用疫苗的即用型佐劑的制備方法，該方法具體如下:分別稱取各組分，混合后乳化，除菌即得所述獸用疫苗的即用型佐劑。所述乳化方法為膠體磨擠壓法、微射流法或高壓均質(zhì)法。一種含有所述獸用疫苗的即用型佐劑的水包油型疫苗。所述水包油型疫苗由質(zhì)量比為1:0.5-2的即用型佐劑和滅活抗原水溶液組成。所述滅活抗原水溶液為豬口蹄疫滅活病毒液或豬圓環(huán)病毒滅活病毒液。有益效果:
本發(fā)明提供的獸用疫苗的即用型佐劑，是水包油型佐劑，成分簡單、劑型穩(wěn)定，使用方便。由于油的用量由70%降至30%以下，顯著減小了對(duì)動(dòng)物的毒副反應(yīng)，有效解決了疫苗副反應(yīng)的問題。高分子膠束物質(zhì)通過離子吸附和微孔包裹的機(jī)制，顯著提高抗原的儲(chǔ)留和遞呈能力，有效解決了水包油(0/W)劑型疫苗免疫活性弱、持續(xù)期短的問題。即用型佐劑中油的使用量降低，易于注射。

本發(fā)明即用型佐劑的制備方法，工藝簡單，成本低，得到的劑型穩(wěn)定。采用獸用疫苗的即用型佐劑制備的水包油型疫苗，穩(wěn)定期長，易儲(chǔ)存，免疫效果好，保護(hù)期延長，易于注射，副反應(yīng)很小。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但本發(fā)明并不受這些實(shí)施例的限制。普魯尼克121 (Pluronic L 121)購自上海生工生物有限公司。實(shí)施例1佐劑的制備 配方1:
白油10 g，
吐溫 800.5g，
司本 850.5g,
殼聚糖2.0g,
卡波姆971P0.1g,
水83.9g。配方2:
角鯊?fù)?0 g，
普魯尼克1210.5g,
司本 800.5g,
卡波姆971P3.0g,
水83.0g。
配方3:
角鯊?fù)?0 g，角鯊烯IOg
普魯尼克121 5g，吐溫800.3g,
司本805g,司本850.3g,
羥甲基纖維素1.0g，二甲基雙十八烷基溴化銨 l.0g，
水67.4g。配方4:·
角鯊?fù)?5g，白油15g，
普魯尼克121 0.2g，吐溫808.8g,
司本 800.2g,司本 858.8g,
羥甲基纖維素 2.0g，卡波姆971P 3.0g,
水47.0g。配方5:
角鯊?fù)? g，
普魯尼克121 0.1g,
司本 800.1g,
卡波姆971P1.0g，二甲基雙十八烷基溴化銨 9.0g，
水84.8g。配方6:
角鯊?fù)?0 g，
普魯尼克121 IOg,
司本80IOg,
卡波姆971P 3.0g,
水47.0g。分別用配方1-6采用如下方法制備相應(yīng)的即用型佐劑:按配方量分別稱取各組分，冰水浴過夜后混合均勻，用機(jī)械乳化法乳化，0.22um濾膜過濾除菌后，分別得到即用型佐劑1-6，4度保存?zhèn)溆?。機(jī)械乳化法為膠體磨擠壓法、微射流法或高壓均質(zhì)法。乳化結(jié)束后，在3000rmp離心IOmin,無水相析出為合格。實(shí)施例2 水包油型豬口蹄疫疫苗的制備及其性質(zhì) (I)即用型佐劑的制備
按實(shí)施例1方法制得即用型佐劑1-6。ISA206佐劑購自SEPPIC公司。( 2 )準(zhǔn)備豬口蹄疫滅活病毒液
豬口蹄疫滅活病毒液(0型，II)由金宇保靈生物藥品有限公司提供，滅活前每0.2毫升病毒液中病毒含量為107_°LD5(l/0.2暈升。該豬口蹄疫滅活病毒液是按照《獸用生物質(zhì)量質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)匯編》(2006-2008)相關(guān)要求制備。豬口蹄疫滅活病毒液(0型，II)簡稱為豬口蹄疫滅活病毒液。(3)水包油型豬口蹄疫疫苗的制備
在無菌條件下，將即用型佐劑1-6分別與豬口蹄疫滅活病毒液混合，手搖均勻得水包油型豬口蹄疫疫苗1-6。其中水包油型豬口蹄疫疫苗I中即用型佐劑I與豬口蹄疫滅活病毒液的質(zhì)量比為1:0.5。水包油型豬口蹄疫疫苗2中即用型佐劑2與豬口蹄疫滅活病毒液的質(zhì)量比為1:2。水包油型豬口蹄疫疫苗3-6中即用型佐劑與豬口蹄疫滅活病毒液的質(zhì)量比為1:1。用ISA206佐劑替代本發(fā)明即用型佐劑制備對(duì)照疫苗A，ISA206佐劑與豬口蹄疫滅活病毒液按質(zhì)量比1:1在乳化缸內(nèi)混合，3000rpm乳化30分鐘制備對(duì)照疫苗A。(4)疫苗物理性狀的比較
檢測(cè)水包油型豬口蹄疫疫苗1-6及對(duì)照疫苗A的物理性狀，比較各疫苗的穩(wěn)定性。具體結(jié)果見表I。表I水包油型豬口蹄疫疫苗1-6與對(duì)照疫苗A的物理性狀比較
權(quán)利要求
1.一種獸用疫苗的即用型佐劑，按照質(zhì)量百分含量由下列物質(zhì)組成:油 5%-30%， 親水性表面活性劑0.1%-10%， 親油性表面活性劑0.1%-10%， 高分子膠束物質(zhì)0.1%-10%，水 40%-90%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述獸用疫苗的即用型佐劑，其特征在于:所述油為白油、角鯊?fù)楹徒酋徬┲械囊环N或者兩種的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述獸用疫苗的即用型佐劑，其特征在于:所述親水性表面活性劑為吐溫80、普魯尼克121或其混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述獸用疫苗的即用型佐劑，其特征在于:所述親油性表面活性劑為司本80、司本85或其混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述獸用疫苗的即用型佐劑，其特征在于:所述高分子膠束物質(zhì)為殼聚糖、卡波姆971P、羥甲基纖維素和二甲基雙十八烷基溴化銨中的一種或者兩種的混合物。
6.一種權(quán)利要求1-5之一所述獸用疫苗的即用型佐劑的制備方法，其特征在于該方法具體如下:分別稱取各組分，混合后乳化，除菌即得所述獸用疫苗的即用型佐劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述獸用疫苗的即用型佐劑的制備方法，其特征在于所述乳化方法為膠體磨擠壓法、微射流 法或高壓均質(zhì)法。
8.一種含有權(quán)利要求1-5之一所述獸用疫苗的即用型佐劑的水包油型疫苗。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述水包油型疫苗，其特征在于:所述水包油型疫苗由質(zhì)量比為1:0.5-2的即用型佐劑和滅活抗原水溶液組成。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述應(yīng)用，其特征在于所述滅活抗原水溶液為豬口蹄疫滅活病毒液或豬圓環(huán)病毒滅活病毒液。
全文摘要
本發(fā)明提供一種獸用疫苗的即用型佐劑、制備及其應(yīng)用，涉及獸用疫苗佐劑領(lǐng)域。所述即用型佐劑，由下列物質(zhì)組成油5%-30%，親水性表面活性劑0.1%-10%，親油性表面活性劑0.1%-10%，高分子膠束物質(zhì)0.1%-10%，水40%-90%。本發(fā)明還提供即用型佐劑的制備方法，分別稱取各組分，混合后乳化，除菌即得所述獸用疫苗的即用型佐劑。本發(fā)明還提供含有即用型佐劑的水包油型疫苗。本發(fā)即用型佐劑，是水包油型佐劑，成分簡單、劑型穩(wěn)定，使用方便，易于注射。本發(fā)明即用型佐劑的制備方法，工藝簡單，成本低，得到的劑型穩(wěn)定；水包油型疫苗，穩(wěn)定期長，易儲(chǔ)存，免疫效果好，保護(hù)期延長，易于注射，副反應(yīng)很小。
文檔編號(hào)A61K9/107GK103071153SQ20131002101
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2013年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月21日
發(fā)明者張金秋, 盧宇, 鄧碧華, 呂芳, 侯繼波 申請(qǐng)人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院