專利名稱：一種靶向于mir-150的抗白血病小分子化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及藥物設(shè)計方面。
背景技術(shù)：
MicroRNA (微小RNA)是一種長度為19 25核苷酸單鏈的內(nèi)源性非編碼性小RNA。 它主要通過與靶標基因3'非翻譯區(qū)的完全或不完全配對，抑制其翻譯，從而參與調(diào)控個體發(fā)育、細胞凋亡、增殖及分化等生命活動。在病理條件下，microRNA可通過調(diào)控其靶標基因及其參與的信號通路，影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，發(fā)揮著類似于癌基因或抑癌基因的功能。實驗表明在很多腫瘤中，一些類型的microRNA是高表達的，這些高表達的microRNA與腫瘤的侵入性、轉(zhuǎn)移性等有一定的相關(guān)性。這些microRNA為腫瘤診斷和治療提供了新的策略。目前抑制microRNA功能的普遍方法是采用反義抑制的原理。實驗證明，與成熟體microRNA完全互補或與前體microRNA—些區(qū)域互補的經(jīng)過修飾的RNA可以有效的抑制 microRNA功能。一些體內(nèi)實驗證明，這種抑制RNA通過體內(nèi)注射也有效果。因此具有一定的臨床應用價值。然而，反義抑制方法存在體內(nèi)給藥困難的問題。目前的各種向體內(nèi)運送RNA方法， 包括化學轉(zhuǎn)染試劑以及病毒載體等，都存在效率和安全性問題，因此一直無法達到臨床應用的要求。而傳統(tǒng)的小分子化合物藥物則在給藥方面存在明顯的優(yōu)勢，或注射或口服，簡單有效。因此我們認為小分子化合物抑制劑將比傳統(tǒng)的反義抑制RNA更有潛力成為靶向 microRNA的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有抑制腫瘤細胞生長或誘導腫瘤細胞凋亡活性的化合物。本發(fā)明的第一方面，提供了一種2，4- 二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈的用途，用于制備治療腫瘤、抑制腫瘤細胞生長、和/或誘導腫瘤細胞凋亡的化合物。在另一優(yōu)選例中，所述的致凋亡化療藥物包括腫瘤壞死因子，更佳地為人TNFa。在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤或腫瘤細胞是表達名為mir-150的microRNA的腫瘤或腫瘤細胞。較佳地，所述的腫瘤選自下組乳腺癌、肺癌、胃癌、細腸癌、前列腺癌、肝癌； 更佳的腫瘤選自下組白血病。在另一優(yōu)選例中，提供了一種2，4_ 二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈的用途， 用于制備人mir-150的抑制劑。


圖1是小分子化合物2，4-二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈的結(jié)構(gòu)式。
具體實施方式
本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，發(fā)現(xiàn)部分腫瘤細胞內(nèi)mir-150的表達往往升高，抑制mir-150的表達和功能可以抑制腫瘤細胞的增殖和體內(nèi)外的致瘤活性。本發(fā)明人運用軟件從數(shù)萬個侯選化合物中篩出了若干個可能會和mir-150結(jié)合的小分子化合物， 首次得到了一個可以強烈增強TNF-a癌細胞系MCF-7增殖抑制作用的化合物2，4- 二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。具體而言，本發(fā)明人的研究表明，mir-150在白血病組織中的選擇性高表達，而在正常組織中未見表達，提示mir-150可能與白血病密切相關(guān)。因此本發(fā)明的研究表明，抗凋亡作用的分子mir-150在細胞生長調(diào)控、細胞凋亡、 腫瘤發(fā)生等過程中發(fā)揮重要作用。因此，mir-150很可能在臨床腫瘤的診斷和治療中作為潛在的候選靶標。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明人篩選了大量的化合物，從而獲得了一種可能有效抑制腫瘤的小分子化合物，所述的小分子化合物特異性地在蛋白水平靶向抗凋亡分子-mir-150。活性成分2,4-二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈小分子化合物及其藥學上可以接受的鹽和活性衍生物。2，4_ 二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈是一種指向mir-150的先導化合物。一類特別優(yōu)選的鹽是鈉鹽或鉀鹽。實施例1小分子化合物2，4- 二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈的篩選
采用計算機輔助的虛擬方法進行。首先用生物信息學的方法利用計算機軟件建立mir-150的三維結(jié)構(gòu)模型，然后用 D0CK4. 0 (美國Kimtz實驗室)對化合物庫(約20萬種)進行篩選，根據(jù)打分取最好的100 個。繼續(xù)使用Flex軟件進行對接，根據(jù)打分取前50個。接著利用Autodock軟件以Flex 對接的構(gòu)象為起始構(gòu)象進行對接。最后選定一個化合物，即2，4_ 二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈。實施例2小分子化合物2，4- 二氨基-6-(3-甲氧基苯)_5_嘧啶腈對腫瘤細胞的生長抑制本實施例采用了常規(guī)的MTT法，方法如下先將MCF-7細胞30000個細胞/孔的密度鋪96孔板過夜，然后把小分子化合物以不同濃度單獨與人TNF-a聯(lián)合加入。40小時后每孔加入MTT(5mg/ml) IOul，37度孵育4小時后用150ul 二甲亞楓溶液紫色結(jié)晶后放置于酶標儀以570吸光度檢測。結(jié)果顯示，2,4- 二氨基-6- (3-甲氧基苯)_5_嘧啶腈可以在5_10ul終濃度顯著增強TNF-a對細胞增殖的抑制，而其本身未對細胞造成顯著的毒性作用的化合物。以上是對本發(fā)明的描述而非限定，基于本發(fā)明思想的其它實施方式，均在本發(fā)明的保護范圍之中。
權(quán)利要求
1.一種2，4-二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈的用途，其特征在于，用于制備治療腫瘤、抑制腫瘤細胞生長、和/或誘導腫瘤細胞凋亡的化合物。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的腫瘤或腫瘤細胞是表達mir-150的白血病腫瘤或腫瘤細胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于生物信息學和計算機技術(shù)相結(jié)合的藥物虛擬篩選平臺而合成的靶向抑制mir-150合成的新型抗腫瘤小分子先導化合物。該小分子化合物具有滲透性好，毒副作用小，結(jié)構(gòu)簡單，易于合成等優(yōu)點。而且可以和腫瘤壞死因子(TNF-α)聯(lián)用，增強后者的腫瘤殺傷效應，從而起到治療腫瘤的作用，所以有望發(fā)展成為一種抗腫瘤新藥。
文檔編號A61P35/02GK102319249SQ201010599108
公開日2012年1月18日 申請日期2010年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月17日
發(fā)明者曾華宗 申請人:上海聚類生物科技有限公司