一種抗氧化大鯢多肽口服液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種具有高抗氧化性能的大鯢多肽，該多肽分子量不大于5000 Da。本發(fā)明還提供了一種大鯢多肽抗氧化口服液，該口服液的原料，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，包括：大鯢多肽液20-50%、白砂糖8-12%、蘋果汁3-5%、檸檬酸0.01-0.03%、β-環(huán)狀糊精0.5-1%、黃原膠0.05-0.15%，余量為純凈水；該大鯢多肽液中大鯢多肽的分子量不大于5000 Da，按質(zhì)量體積比，該大鯢多肽液中大鯢多肽的濃度為1%-2.5%。本發(fā)明還提供了制備該大鯢多肽抗氧化口服液的方法，該方法通過(guò)利用復(fù)合酶對(duì)大鯢肉進(jìn)行酶解處理，并控制分子量的分布范圍，得到了具有顯著抗氧化功能的口服液。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單、適于規(guī)模生產(chǎn)。
【專利說(shuō)明】一種抗氧化大鯢多肽口服液及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于口服液領(lǐng)域，具體涉及一種抗氧化大鯛多肽口服液及其制備方法。 技術(shù)背景
[0002] 大鯛（Giant Salamander)是世界上現(xiàn)存最大的也是最珍貴的兩棲動(dòng)物，被稱為 "活化石"。近年來(lái)，大鯛的人工養(yǎng)殖已越來(lái)越受人們重視，隨著大鯛人工飼養(yǎng)技術(shù)的成熟和 推廣，大鯛產(chǎn)量顯著提高，國(guó)家有關(guān)部門已經(jīng)批準(zhǔn)人工飼養(yǎng)大鯛二代可以進(jìn)行加工及銷售， 但目前市場(chǎng)上大鯛深加工產(chǎn)品基本沒(méi)有，研究報(bào)道也很少見(jiàn)。
[0003] 近年來(lái)，天然抗氧化肽因其安全無(wú)毒且具有一定的保健功能而備受人們的親睞。 天然抗氧化肽具有重金屬清道夫和過(guò)氧化氫分解促進(jìn)劑的作用，可降低自氧化速率，減少 脂肪過(guò)氧化氫含量，減少自由基的生成。其不僅具有較強(qiáng)的抗氧化性，而且具有很高的安全 性，被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥及化妝品等行業(yè)。
[0004] 然而，在現(xiàn)有技術(shù)中，對(duì)大鯛是否可以制備抗氧化產(chǎn)品還沒(méi)有達(dá)成共識(shí)，這限制了 大鯛的利用。
[0005] 因此，對(duì)大鯛進(jìn)行深入研究，并利用大鯛開(kāi)發(fā)出可抗氧化的產(chǎn)品，成為了迫在眉睫 的需求。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的之一是提供一種具有抗氧化性能的大鯛多 肽，該多肽的分子量不大于5000 Da。
[0007] 本發(fā)明的目的之二在于提供一種大鯛多肽抗氧化口服液，該口服液的原料，按質(zhì) 量百分?jǐn)?shù)計(jì)，包括：大鯛多肽液20-50%、白砂糖8-12%、蘋果汁3-5%、檸檬酸0. 01-0. 03%、 β -環(huán)狀糊精0. 5-1%、黃原膠0. 05-0. 15%，余量為純凈水；所述大鯛多肽液中大鯛多肽的分 子量不大于5000 Da，按質(zhì)量體積比，所述大鯛多肽液中大鯛多肽的濃度為1%-2. 5%。
[0008] 所述大鯛多肽液是以大鯛肉為原料制得，制備方法包括如下步驟： 1) 選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入質(zhì)量為大鯛肉2倍 的純凈水進(jìn)行勻漿處理； 2) 按質(zhì)量比2:1的比例，將純凈水加入步驟1)勻漿處理后的大鯛肉，再加入復(fù)合酶進(jìn) 行酶解，復(fù)合酶用量為浙干大鯛肉質(zhì)量的〇. 5%-2%，酶解溫度為50-60°C，酶解時(shí)間為5-7h， 酶解完畢加熱酶解液到90°C以上滅酶10_20min，得大鯛酶解多肽液； 3) 微濾：將步驟2)所得大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 μ m微濾膜進(jìn)行微濾，取濾液； 4) 超濾：將步驟3)所得濾液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛多肽液。
[0009] 優(yōu)選的，所述口服液的原料，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，包括：大鯛多肽液50 %、白砂糖10 %、蘋果汁4 %、檸檬酸0. 025 %、β -環(huán)狀糊精1 %、黃原膠0. 1 % ;所述大鯛多肽液中大鯛多 肽的分子量不大于5000 Da，所述大鯛多肽液中大鯛多肽的濃度為1%。
[0010] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種抗氧化大鯛多肽口服液的制備方法，該方法包括 步驟： 1) 選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入質(zhì)量為大鯛肉2倍 的純凈水進(jìn)行勻漿處理； 2) 按質(zhì)量比2:1的比例，將純凈水加入步驟1)勻漿處理后的大鯛肉，再加入復(fù)合酶進(jìn) 行酶解，復(fù)合酶用量為浙干大鯛肉質(zhì)量的〇. 5%-2%，酶解溫度為50-60°C，酶解時(shí)間為5-7h， 酶解完畢加熱酶解液到90°C以上滅酶10_20min，得大鯛酶解多肽液； 3) 微濾：將步驟2)所得大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 μ m微濾膜進(jìn)行微濾，取濾液； 4) 超濾：將步驟3)所得濾液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛多肽液，備 用； 5) 先將大鯛多肽液、白砂糖、蘋果汁、檸檬酸、β -環(huán)狀糊精和水混合均勻，再加入黃原 膠，并混合均勻，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，各組分的比例為：大鯛多肽液20-50%、白砂糖8-12%、蘋 果汁3-5%、檸檬酸0. 01-0. 03%、β -環(huán)狀糊精0. 5-1%、黃原膠0. 05-0. 15%，余量為純凈水； 6) 將步驟5)所得物采用500目濾布過(guò)濾，然后進(jìn)行灌裝； 7) 將步驟6)所得物進(jìn)行高溫高壓殺菌，殺菌方式為：升溫lOmin，110-115°C、0. 07MPa 殺菌15-40min，分級(jí)冷卻IOmin,冷卻至中心溫度小于40°C，即得大鯛多肽抗氧化口服液成 品； 所述復(fù)合酶，按質(zhì)量比計(jì)，由以下酶組成：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：風(fēng)味蛋白酶 =2:1:1 復(fù)合酶中包含內(nèi)切酶、外切酶，可以控制分子量，提高低分子量肽的得率；采用優(yōu)化得 到的酶解工藝條件，可提高水解度和原料利用率； 通過(guò)復(fù)合酶的配置和酶解工藝的調(diào)整，本發(fā)明能獲得高的多肽得率，更重要的是，能獲 得較高的分子量低于5000Da多肽的得率，為有效利用大鯛制取抗氧化多肽奠定了基礎(chǔ)。 [0011] 采用微濾處理，是為了除去水解液中的大分子物質(zhì)和雜質(zhì)，防止堵塞超濾膜，提高 超濾分離效率。經(jīng)試驗(yàn)表明分子量低于5000的大鯛肽抗氧化性(清除DPPH自由基和羥基 自由基）比分子量高于5000分別高37. 6%和26. 3%左右； 口服液中添加白糖、檸檬酸、蘋果汁和β-環(huán)狀糊精是為了調(diào)節(jié)口服液口味，掩蔽異 味。添加黃原膠是為了保持口服液穩(wěn)定，防止口服液在儲(chǔ)藏期間出現(xiàn)沉淀。
[0012] 本發(fā)明的有益效果： 1、 本發(fā)明采用人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，通過(guò)控制酶解工藝和超濾，控制分子量分布，得 到大量的抗氧化肽，具有較強(qiáng)的抗氧化活性，再輔以白砂糖、蘋果汁、檸檬酸、β -環(huán)狀糊精 和黃原膠，制成營(yíng)養(yǎng)豐富、酸甜適中、風(fēng)味獨(dú)特，并具有顯著抗氧化功能的大鯛多肽抗氧化 口服液； 2、 多肽得率高，特別是可以獲得較高的分子量小于5000Da的多肽的得率； 3、 本發(fā)明用于制備大鯛多肽抗氧化口服液的方法工藝簡(jiǎn)單、操作性強(qiáng)，適合于規(guī)?；?生產(chǎn)。

【具體實(shí)施方式】
[0013] 實(shí)施例1 一種大鯛多肽抗氧化功能口服液的制備經(jīng)過(guò)下列步驟： a、大鯛多肽液的制備 a. 1、原料的處理選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入其 質(zhì)量2倍的純凈水進(jìn)行勻漿處理； a. 2、酶解將步驟a. 1勻漿處理后的大鯛肉再加入其質(zhì)量2倍的水進(jìn)行稀釋，加入中性 蛋白酶、木瓜蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的復(fù)合酶進(jìn)行酶解，其酶用量為原料質(zhì)量的1% (w/w)，復(fù) 合酶其組成質(zhì)量比為：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：風(fēng)味蛋白酶=2:1:1。酶解溫度為55°C，酶 解時(shí)間為5h，酶解完畢加熱酶解液到90°C以上保持滅酶15min，得大鯛酶解多肽液； a. 3、微濾將步驟a. 2得到的大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 μ m微濾膜進(jìn)行微濾，即得透明的 大鯛多肽液，其中，按質(zhì)量體積比，大鯛多肽液中大鯛多肽的濃度為1% ; a. 4、超濾將步驟a. 3得到的大鯛多肽液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛 多肽液，備用； b、 調(diào)配稱取步驟a. 4得到的大鯛多肽液50%，稱量白砂糖10%、蘋果汁5%、檸檬酸 0. 03%、β -環(huán)狀糊精1%和純凈水，混合后攪拌至全部溶解，最后按黃原膠0. 15%稱量黃原 膠溶液，攪拌混合均勻，所有組分的百分比加起來(lái)為100%，。
[0014] c、過(guò)濾、灌裝將步驟b調(diào)配好的混合液采用500目濾布過(guò)濾，然后進(jìn)行灌裝； d、殺菌、冷卻將步驟c灌裝好的口服液進(jìn)行高溫高壓殺菌，殺菌方式：升溫lOmin， 115°C、0. 07MPa殺菌30min，分級(jí)冷卻lOmin，冷卻至中心溫度小于40°C，即得成品。
[0015] 實(shí)施例2 一種大鯛多肽抗氧化功能口服液的制備經(jīng)過(guò)下列步驟： a、大鯛多肽液的制備 a. 1、原料的處理選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入其 質(zhì)量2倍的純凈水進(jìn)行勻漿處理； a. 2、酶解將步驟a. 1勻漿處理后的大鯛肉再加入其質(zhì)量2倍的水進(jìn)行稀釋，加入中性 蛋白酶、木瓜蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的復(fù)合酶進(jìn)行酶解，其酶用量為原料質(zhì)量的2 %(w/w)，復(fù) 合酶其組成質(zhì)量比為：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：風(fēng)味蛋白酶=2:1:1。酶解溫度為50°C，酶 解時(shí)間為6h，酶解完畢加熱酶解液到90°C以上保持滅酶20min，得大鯛酶解多肽液； a. 3、微濾將步驟a. 2得到的大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 μ m微濾膜進(jìn)行微濾，即得透明的 大鯛多肽液； a. 4、超濾將步驟a. 3得到的大鯛多肽液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛 多肽液，備用； b、 調(diào)配稱取步驟a. 4得到的大鯛多肽液40%，稱量白砂糖8%、蘋果汁4%、檸檬酸 0. 015%、β -環(huán)狀糊精0. 8%和純凈水，混合后攪拌至全部溶解，最后按黃原膠0. 1%稱量黃 原膠溶液，攪拌混合均勻。
[0016] c、過(guò)濾、灌裝將步驟b調(diào)配好的混合液采用500目濾布過(guò)濾，然后進(jìn)行灌裝； d、殺菌、冷卻將步驟c灌裝好的口服液進(jìn)行高溫高壓殺菌，殺菌方式：升溫lOmin， 115°C、0. 07MPa殺菌20min，分級(jí)冷卻lOmin，冷卻至中心溫度小于40°C，即得成品。
[0017] 實(shí)施例3 一種大鯛多肽抗氧化功能口服液的制備經(jīng)過(guò)下列步驟： a、大鯛多肽液的制備 a. 1、原料的處理選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入其 質(zhì)量2倍的純凈水進(jìn)行勻漿處理； a. 2、酶解將步驟a. 1勻漿處理后的大鯛肉再加入其質(zhì)量2倍的水進(jìn)行稀釋，加入中性 蛋白酶、木瓜蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的復(fù)合酶進(jìn)行酶解，其酶用量為原料質(zhì)量的〇. 5% (w/w)， 復(fù)合酶其組成質(zhì)量比為：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：風(fēng)味蛋白酶=2:1:1。酶解溫度為60°C， 酶解時(shí)間為7h，酶解完畢加熱酶解液到90°C以上保持滅酶20min，得大鯛酶解多肽液； a. 3、微濾將步驟a. 2得到的大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 μ m微濾膜進(jìn)行微濾，即得透明的 大鯛多肽液； a. 4、超濾將步驟a. 3得到的大鯛多肽液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛 多肽液，備用； b、 調(diào)配稱取步驟a. 4得到的大鯛多肽液20%，稱量白砂糖12%、蘋果汁3%、檸檬酸 0. 01%、β -環(huán)狀糊精0. 5%和純凈水，混合后攪拌至全部溶解，最后按黃原膠0. 05%稱量黃 原膠溶液，攪拌混合均勻。
[0018] c、過(guò)濾、灌裝將步驟b調(diào)配好的混合液采用500目濾布過(guò)濾，然后進(jìn)行灌裝； d、殺菌、冷卻將步驟c灌裝好的口服液進(jìn)行高溫高壓殺菌，殺菌方式：升溫lOmin， 115°C、0. 07MPa殺菌20min，分級(jí)冷卻lOmin，冷卻至中心溫度小于40°C，即得成品。
[0019] 試驗(yàn)例1 1、大鯛多肽清除DPPH自由基的能力測(cè)定 取 2mL 不同濃度（lmg/mL，2mg/mL，3mg/mL，4mg/mL，5mg/mL，6mg/mL，7mg/mL)的 樣液，加入2mL 0. lmmol/L DPPH溶液（DPPH溶于無(wú)水乙醇中），混合均勻后在室溫下避光反 應(yīng)20min，在波長(zhǎng)517nm處測(cè)吸光值A(chǔ)i?？瞻捉M為2mL無(wú)水乙醇代替DPPH溶液，加入2mL樣 液，混合均勻后反應(yīng)20min，在波長(zhǎng)517nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)」。對(duì)照組為2mL DPPH溶液加入2 mL無(wú)水乙醇，在波長(zhǎng)517nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)。。
[0020] 計(jì)算公式：清除率=[1_ (Ai-Aj) /AJ*100% 2大鯛多肽清除OH ·能力的測(cè)定 取ImL 1. 865 mmol/L鄰二氮菲溶液(稱取0. 0369g鄰二氮菲溶解于IOmL無(wú)水乙醇中 中，并定容于IOOmL容量瓶中）和2mL不同濃度梯度（0. 5g/L，lg/L，2g/L，4g/L，8g/L) 的樣品液，充分混合均勻后加入ImL I. 865mmol/L的FeSO4 (取0. 0129g FeSO4. 7H20溶解于 蒸餾水中，并與25mL容量瓶中定容)，混合均勻后加入ImL 0.03% (V/V) H2O2，混合溶液在 37°C水浴60 min后，536 nm下測(cè)其吸光值為A#。以去離子水代替樣品液來(lái)重復(fù)以上操 作，在536 nm測(cè)得吸光度Affi;以去離子水代替樣品液和H2O2溶液重復(fù)上述操作，在536 nm 測(cè)其吸光值為A未損。
[0021] 清除率（％)= (A樣-A損v( A未損-A損）X 100%。式中：A樣為樣品組的吸光值；A $為損傷管的吸光值;為未損傷管的吸光值。
[0022] 試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

【權(quán)利要求】
1. 一種具有高抗氧化性能的大鯛多肽，其特征在于，所述大鯛多肽的分子量不大于 5000 Da〇
2. -種大鯛多肽抗氧化口服液，其特征在于：所述口服液的原料，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)， 包括：大鯛多肽液20-50%、白砂糖8-12%、蘋果汁3-5%、檸檬酸0. 01-0. 03%、0 -環(huán)狀糊精 0. 5-1%、黃原膠0. 05-0. 15%，余量為純凈水；所述大鯛多肽液中大鯛多肽的分子量不大于 5000 Da，按質(zhì)量體積比，所述大鯛多肽液中大鯛多肽的濃度為1%-2. 5%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的口服液，其特征在于，所述大鯛多肽液是以大鯛肉為原料制 得，制備方法包括如下步驟： 1) 選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入質(zhì)量為大鯛肉2倍 的純凈水進(jìn)行勻漿處理； 2) 按質(zhì)量比2:1的比例，將純凈水加入步驟1)勻漿處理后的大鯛肉，再加入復(fù)合酶進(jìn) 行酶解，復(fù)合酶用量為浙干大鯛肉質(zhì)量的〇. 5%-2%，酶解溫度為50-60°C，酶解時(shí)間為5-7h， 酶解完畢加熱酶解液到90°C以上滅酶10_20min，得大鯛酶解多肽液； 3) 微濾：將步驟2)所得大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 y m微濾膜進(jìn)行微濾，取濾液；4)超 濾：將步驟3)所得濾液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛多肽液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的口服液，其特征在于，所述口服液的原料，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)， 包括：大鯛多肽液50 %、白砂糖10 %、蘋果汁4 %、檸檬酸0. 025 %、0 -環(huán)狀糊精1 %、黃原 膠0.1 %;所述大鯛多肽液中大鯛多肽的分子量不大于5000 Da，按質(zhì)量體積比，所述大鯛多 肽液中大鯛多肽的濃度為1 %。
5. -種大鯛多肽抗氧化口服液的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟： 1) 選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入質(zhì)量為大鯛肉2倍 的純凈水進(jìn)行勻漿處理； 2) 按質(zhì)量比2:1的比例，將純凈水加入步驟1)勻漿處理后的大鯛肉，再加入復(fù)合酶進(jìn) 行酶解，復(fù)合酶用量為浙干大鯛肉質(zhì)量的〇. 5%-2%，酶解溫度為50-60°C，酶解時(shí)間為5-7h， 酶解完畢加熱酶解液到90°C以上滅酶10_20min，得大鯛酶解多肽液； 3) 微濾：將步驟2)所得大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 y m微濾膜進(jìn)行微濾，取濾液； 4) 超濾：將步驟3)所得濾液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛多肽液，備 用； 5) 先將大鯛多肽液、白砂糖、蘋果汁、檸檬酸、3 -環(huán)狀糊精和水混合均勻，再加入黃 原膠溶液，并混合均勻，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，各組分的比例為：大鯛多肽液20-50%、白砂糖 8-12%、蘋果汁3-5%、檸檬酸0. 01-0. 03%、0 -環(huán)狀糊精0. 5-1%、黃原膠0. 05-0. 15%，余量為 純凈水； 6) 將步驟5)所得物采用500目濾布過(guò)濾，然后進(jìn)行灌裝； 7) 將步驟6)所得物進(jìn)行高溫高壓殺菌，殺菌方式為：升溫lOmin，于110-115°C、 0. 07MPa殺菌15-40min，分級(jí)冷卻lOmin，冷卻至中心溫度小于40°C，即得大鯛多肽抗氧化 口服液成品； 所述復(fù)合酶，按質(zhì)量比計(jì)，由以下酶組成：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：風(fēng)味蛋白酶 =2:1:1。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中，復(fù)合酶用量為浙干大鯛 肉質(zhì)量的2 %，酶解溫度為55°C，酶解時(shí)間為6 h，酶解完畢加熱酶解液到90°C以上滅酶15 min〇
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟5)中，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，所述各組分 的比例為：大鯛多肽液50 %、白砂糖10 %、蘋果汁4 %、檸檬酸0. 025 %、0 -環(huán)狀糊精1 %、 黃原膠0. 1 %，余量為純凈水。
【文檔編號(hào)】A61K9/08GK104432083SQ201510007657
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2015年1月8日 優(yōu)先權(quán)日:2015年1月8日
【發(fā)明者】冉旭, 徐陽(yáng), 李靜, 曾里, 孫強(qiáng) 申請(qǐng)人:四川大學(xué)