專(zhuān)利名稱(chēng)：：氨基酸衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及到氨基酸衍生物。本發(fā)明的氨基酸衍生物為具有下列式Ⅰ的化合物及其藥用酸加成鹽。(其中R表示芐氧羰基或2-喹啉基羰基)式Ⅰ的化合物及其藥用酸加成鹽為新型的、并具備有價(jià)值的藥理特性的化合物，具體說(shuō)，其可以抑制病毒起源的蛋白酶，可用于預(yù)防或治療病毒感染，尤其是由HIV及其它后病毒引起的感染。本發(fā)明的內(nèi)容包括式Ⅰ的化合物及前述的鹽，以及用作有效的治療物質(zhì)，上述化合物及其鹽的制備方法，用于該方法中的中間體，含有該化合物及其鹽的藥物，該化合物及鹽在控制和預(yù)防疾病中的應(yīng)用，尤其是用于治療或預(yù)防病毒感染，以及應(yīng)用該化合物及其鹽制備用于治療或預(yù)防病毒感染的藥物。式Ⅰ化合物的藥用酸加成鹽包括與無(wú)機(jī)酸所形成的鹽，例如，無(wú)機(jī)酸包括氫鹵酸、如鹽酸或氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或與有機(jī)酸所形成的鹽，有機(jī)酸包括例如乙酸、枸椽酸、馬來(lái)酸、富馬酸、酒石酸、甲磺酸、對(duì)甲苯磺酸等。根據(jù)本發(fā)明所述方法，前述的式Ⅰ的化合物及其藥用酸加成鹽的制備是通過(guò)(a)2-〔(3-(s)-氨基-2(R)-羥基-4-苯丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺(如下式)與具有下式的酸或其反應(yīng)衍生物反應(yīng)，或(其中，R同前述定義)(b)還原具有下式的化合物，且從所得混合物中分離出所需的2(R)-羥基異構(gòu)體，或(其中，R同前述定義)(c)2-〔3(s)-〔(L-天冬酰胺酰)氨基〕-2(R)-羥基-4-苯丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺(如下式)與生成芐氧基羰基或2-喹啉基羰基的試劑反應(yīng)，及(d)如需要，將所得的式Ⅰ的化合物轉(zhuǎn)變成藥用酸加成鹽。方法(a)中，式Ⅱ的化合物與式Ⅲ的酸的反應(yīng)可按肽化學(xué)中已知方法進(jìn)行，因此，當(dāng)使用式Ⅲ的酸時(shí)，反應(yīng)優(yōu)選在縮合劑，如羥基苯并三唑和二環(huán)己基碳化二亞胺存在下進(jìn)行，該反應(yīng)通常在惰性有機(jī)溶劑中如醚(如乙醚，四氫呋喃等)或二甲基甲酰胺，且在低溫下，適宜在約-10℃-+5℃間，尤其在約0℃時(shí)進(jìn)行，適用的式Ⅲ酸的反應(yīng)衍生物為例如相應(yīng)的酰基鹵(如?；?，酸酐，混合酸酐;活化酯等，當(dāng)使用反應(yīng)衍生物時(shí)，反應(yīng)在有機(jī)堿(如N-乙基嗎啉，二異丙基乙胺等)存在下，在惰性有機(jī)溶劑如鹵代脂肪烴(如二氯甲烷等)或醚(如乙醚、四氫呋喃等)中，和在低溫下進(jìn)行，適宜的溫度為-10℃～+5℃，特別是約在0℃時(shí)。方法(b)中式Ⅳ化合物的還原可按已知的羰基還原為羥基的方法進(jìn)行，因此，還原反應(yīng)可使用絡(luò)合金屬氫化物，如堿金屬硼氫化物特別是硼氫化鈉，于適宜的有機(jī)溶劑，如醇(如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇等)中進(jìn)行。還原通常在室溫下進(jìn)行，按常規(guī)方法，可從所得混合物中分離出所需的2(R)-羥基異構(gòu)體，如層析法等。方法(c)中，用于生成芐氧基羰基的試劑為芐基氯甲酸酯，用于生成2-喹啉基羰基的試劑是其相應(yīng)的酸或反應(yīng)衍生物，如相應(yīng)的酰基鹵(如?；?，酸酐，混合酸酐、活化酯等。式Ⅴ的化合物與前述試劑的反應(yīng)按與前述方法(a)相同的方法進(jìn)行。方法(d)中的式Ⅰ的化合物轉(zhuǎn)變成藥用酸加成鹽的反應(yīng)可按常規(guī)方法進(jìn)行，即用無(wú)機(jī)酸;如氫鹵酸(如鹽酸或氫溴酸)，硫酸，硝酸，磷酸等;或用有機(jī)酸如乙酸，檸檬酸、馬來(lái)酸、富馬酸、酒石酸、甲磺酸，對(duì)甲苯磺酸等處理該化合物。用做方法(a)的起始物的式Ⅱ的化合物為新的，其為本發(fā)明一項(xiàng)內(nèi)容。分子式Ⅱ化合物的制備可按下列方法進(jìn)行，如將下式化合物(其中，R1代表氨基保護(hù)基(如叔丁氧基羰基，或芐氧基羰基)，而X代表氯或溴原子〕與下式的N-叔丁基-十氫-(4as，8as)異喹啉-3(s)-羧酰胺反應(yīng)，將所得的下式化合物還原，(其中，R1同前述定義)從所得混合物中分離出所需的2(R)-羥基異構(gòu)體，且從所得的下式化合物中去掉R1基，得到式Ⅱ的化合物。(其中，R1同前述定義)當(dāng)R1代表芐氧基羰基時(shí)的式Ⅵ化合物與式Ⅶ化合物的反應(yīng)可按已知方法進(jìn)行。如在惰性有機(jī)溶劑中，如鹵代脂肪烴(如二氯甲烷)，在堿存在下(如三烷基胺，如三乙基胺等)，且方便地在室溫下進(jìn)行。式Ⅷ的化合物還原為式Ⅸ化合物，隨后將所需的2(R)-羥基異構(gòu)體分離，該反應(yīng)可按前述之本發(fā)明方法(b)進(jìn)行(如式Ⅳ化合物還原，并從所得混合物中分離出所需的2(R)-羥基異構(gòu)體)。從式Ⅸ化合物斷裂去R1基的反應(yīng)也可按已知方法進(jìn)行，例如使用強(qiáng)無(wú)機(jī)酸如氫鹵酸或強(qiáng)有機(jī)酸(如三氟醋酸等)，方便地于0℃到室溫下進(jìn)行?？蓺浠瘮嗔训陌被Ｗo(hù)基R1還可以用氫在貴金屬催化劑(如鈀催化劑如鈀-碳)存在下，在該反應(yīng)條件下呈惰性的有機(jī)溶劑或溶劑混合物中進(jìn)行(如烷醇如乙醇，異丙醇等)烷基羧酸酯如乙酸乙酯等)，可方便地在約室溫下進(jìn)行。式Ⅱ化合物的另一個(gè)制備方法為首先將下式化合物與前述的式Ⅶ化合物反應(yīng)，(其中R1同前述定義)該反應(yīng)便于在惰性有機(jī)溶劑如醇(如甲醇等)，二甲基甲酰胺等中進(jìn)行，在較高溫度下，約60℃～120℃進(jìn)行，隨后，如前述方法，去掉反應(yīng)產(chǎn)物(前述之式Ⅸ化合物)中的R1基。方法(b)中用做起始物的分子式Ⅳ的化合物可按下法制備，如從式Ⅷ化合物中去掉氨基保護(hù)基R1，將所得產(chǎn)物與式Ⅲ的酸或其反應(yīng)衍生物反應(yīng)，該反應(yīng)可按與方法(a)類(lèi)似的方法進(jìn)行。方法(c)中用做起始物的式Ⅴ的化合物為新的，其為本發(fā)明的另一項(xiàng)內(nèi)容。式Ⅴ的化合物可通過(guò)從式Ⅰ的化合物中去掉芐氧基羰基R(其中R代表芐氧基羰基或叔丁氧基羰基)，得到與式Ⅰ相對(duì)應(yīng)的化合物，但其中R代表叔丁氧基羰基。該R為叔丁氧基羰基的化合物可通過(guò)式Ⅱ的化合物與N-(叔丁氧基羰基)-L-天冬酰胺按方法(a)的方法反應(yīng)制備。上述斷裂反應(yīng)與前述的從式Ⅷ的化合物中斷裂R1基的方法類(lèi)似。式Ⅲ的起始物及其反應(yīng)衍生物以及式Ⅵ，Ⅶ，和Ⅹ的化合物到目前為止尚不屬已知化合物或其類(lèi)似物，其可按與已知化合物類(lèi)似的方法或按實(shí)施例中將要敘述的方法或與其類(lèi)似方法制備。而方法(c)中所用的試劑通常為已知化合物。如前所述，式Ⅰ的化合物及其藥用酸加成鹽抑制病毒起源的蛋白酶，可用于治療或預(yù)防病毒感染，尤其是由HIV及其它后病毒引起的感染。本發(fā)明化合物對(duì)HIV蛋白酶的體外抑制由下列試驗(yàn)得到驗(yàn)證。HIV蛋白酶是從大腸桿菌中得到，該細(xì)菌的可溶性提取物經(jīng)硫酸銨分餾(0～30%)得到部分純化。蛋白酶活性用保護(hù)的六肽，琥珀酰-絲-亮-天冬酰胺-酪-脯-異亮異丁酰胺(S1)或保護(hù)的七肽琥珀酰-纈-絲-谷氨酰胺-天冬酰胺-苯丙-脯-異亮異丁酰胺(S2)為底物測(cè)定。底物的斷裂可通過(guò)分光光度檢測(cè)N端脯氨酸，計(jì)算H-脯-異亮-異丁酰胺的產(chǎn)量來(lái)定量。將1.25mM底物溶于含有0.125mg/ml吐溫20的125mM檸檬酸鹽緩沖液中(PH5.5)，往80μl該緩沖底物中加10ul不同濃度的試驗(yàn)化合物溶液(溶于甲醇或二甲基亞砜，用含0.1%吐溫20的水稀釋)和10μl蛋白酶。于37℃進(jìn)行一段時(shí)間消化后，加1ml顯色劑(含30μg/ml靛紅和1.5mg/ml2-(4-氯苯甲酰基)苯甲酸的含10%丙酮的乙醇(體積比)進(jìn)行測(cè)定。溶液于水溶中加熱，著色的殘余物重新溶于1ml含1%焦棓酚、33%水的丙酮(重量/體積/體積)中，用分光光度法在599nm測(cè)定溶液的光密度。將試驗(yàn)化合物存在時(shí)H-脯-異亮異丁酰胺的生成量與對(duì)照品進(jìn)行比較。利用所用的不同濃度試驗(yàn)化合物的曲線(xiàn);測(cè)定50%抑制(I50)所需的試驗(yàn)化合物濃度。式Ⅰ化合物的體外抗病毒活性于下列檢測(cè)中得到證實(shí)。抗HIV活性該檢測(cè)使用生長(zhǎng)于C8166細(xì)胞(一種人CD4+T淋巴細(xì)胞系)中的HILV-Ⅲ(RF株)，使用RPMI1640培養(yǎng)基，含有碳酸氫鹽緩沖液、抗生素及10%胎牛血清。細(xì)胞混懸液用10倍于TCD50的病毒感染，于37℃進(jìn)行吸附90分鐘，細(xì)胞用培養(yǎng)基洗3次，試驗(yàn)在6ml的組織培養(yǎng)管中進(jìn)行，每管盛有含2×105感染細(xì)胞的1.5ml培養(yǎng)基，根據(jù)試驗(yàn)化合物的溶解性，將其溶于水溶性培養(yǎng)基或二甲基亞砜中，并加15ul該溶液于培養(yǎng)管中，培養(yǎng)物于37℃、和空氣中含有5%二氧化碳的濕潤(rùn)的環(huán)境中孕育72小時(shí)，隨后將培養(yǎng)物離心，將可分量的上清液用NOnidetP40溶解，并經(jīng)抗原捕獲檢測(cè)，使用具有抗病毒蛋白24特殊活性的初級(jí)抗血清和辣根過(guò)氧化物酶檢測(cè)系統(tǒng)，分光光度法測(cè)定所產(chǎn)生的顏色，且對(duì)試驗(yàn)物質(zhì)的濃度畫(huà)圖，測(cè)定導(dǎo)致50%保護(hù)的濃度(I50)。為確定抗病毒的選擇性，基于染料吸收、代謝或放射標(biāo)記的氨基酸結(jié)合的細(xì)胞毒性檢測(cè)可與上述檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行。利用式Ⅰ化合物進(jìn)行上述試驗(yàn)所得結(jié)果列于下列表中表化合物IRI50HIV蛋白酶的抑制(uM)抗HIV活性(nM)S1S2芐氧基羰基2－喹啉基羰基≤0.024≤0.033≤0.0027≤0.00037202</tables>式Ⅰ的化合物及其藥用酸加成鹽可以藥用，(如以藥物制劑的形式)。該藥物制劑可以腸道給藥如口服(如片劑。包衣片劑、糖衣丸劑、硬及軟明膠膠囊劑、溶液劑、乳劑或混懸劑)，經(jīng)鼻給藥(如鼻噴霧劑)或直腸給藥(如栓劑)。但是也可經(jīng)非腸道給藥，如肌注或靜注(如注射液劑型)。為了制備片劑、包衣片、糖衣丸及軟硬明膠囊，式Ⅰ的化合物及其藥用酸加成鹽可用藥用惰性的，無(wú)機(jī)或有機(jī)賦形劑處理，可使用乳糖，玉米淀粉或其衍生物，滑石，硬脂酸或其鹽等做為片劑、糖衣丸、硬明膠膠囊的賦形劑。軟明膠膠囊適宜的賦形劑為如植物油，蠟、脂肪、半固體和液體多元醇等。制備溶液劑和糖漿劑適宜的賦形劑有如水、多元醇、蔗糖、轉(zhuǎn)化糖、葡萄糖等。制備注射劑適宜的賦形劑有如水、乙醇、多元醇、甘油、植物油等。栓劑的適宜賦形劑有例如天然的或硬化油、蠟、脂肪、半固體或液體多元醇等。藥用制劑還可含有保鮮劑、助溶劑、增粘物質(zhì)、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、矯味劑、改變滲透壓的鹽、緩沖劑、包衣劑或抗氧化劑，還可含有其它有治療價(jià)值的物質(zhì)。本發(fā)明中，式Ⅰ的化合物及其藥用酸加成鹽可用于病毒感染的治療和預(yù)防，尤其是逆病毒感染，劑量可在很寬的范圍內(nèi)變化，并可根據(jù)具體病例的需要而調(diào)整。通常，口服給藥每日劑量為約3mg～3g，優(yōu)選10mg～1g。(如約每人300mg)，優(yōu)選分為1-3份劑量(可以等分)。當(dāng)特別指明時(shí)，上述的劑量上限可被超出。下列實(shí)施例說(shuō)明了本發(fā)明。實(shí)施例1將含有561mg2-〔3(S)-氨基-2(R)-羥基-4-苯基丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(S)-羧酰胺和372mgN-(芐氧基羰基)-L-天冬酰胺的20ml干燥四氫呋喃溶液于冰鹽混合物中冷卻，往其中加189mg羥基苯并三唑，161mgN-乙基嗎啉和317mg二環(huán)己基碳化二亞胺，將混合物攪拌16小時(shí)，隨后用乙酸乙酯稀釋并過(guò)濾，濾液用碳酸氫鈉水溶液和氯化鈉溶液洗，蒸除溶劑，殘余物經(jīng)硅膠層析，用二氯甲烷/甲醇(9∶1)為流動(dòng)相，從甲醇/乙醚中得到434mg2-〔3(S)-〔〔N-(芐氧基羰基)-L-天冬酰胺?；嘲被?2(R)-羥基-4-苯基丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺白色固體;MSm/e650〔M+H〕+;HMRδ(d4CH3OH，400MHz)7.33(5H，m，PhCH2O)，7.25(2H，m)，7.18(2H，m)，7.09(1H，m)，5.05(2H，s，PhCH2O)，4.42(1H，dd，AsnαJ＝7.8，6.1)，4.22(1H，m，-CH2CHCH(OH)-J＝10.7，about4，about4)，3.85(1H，m，-CHCH(OH)CH2-J＝8.0，6.2，about4)，3.02(1H，dd，PhCH(H)CHJ＝-13.9，about4)，3.02(1H，dd，leqJ＝-12.0，small)，2.69(1H，dd，PhCH(H)CH-J＝-13.9，10.7)，2.63(1H，dd，-CH(OH)CH(H)N-J＝-12.6，8.0)，2.62(1H，dd，H3axJ＝about11，small)，2.57(1H，dd，Asnβ1J＝-15.2，6.1)，2.38(1H，dd，Asnβ2J＝-15.2，7.8)，2.19(1H，dd，-CH(OH)CH(H)N-J＝-12.6，6.2)，2.17(1H，dd，laxJ＝-12.0，3.2)，2.07(1H，m，H4axJ＝-12.7，about11，about11.5)，1.78(1H，m，H4aJ4a-4ax＝about11.5，J4a-4eq＝small，J4a-8a＝small)，1.63(1H，m，H8aJ8a-1ax＝3.2，J8a-1eq＝small，J8a-4a＝small)，1.35(1H，m，H4eqJ＝-12.7，small，small)，1.30(9H，s，t-butyl)，2.0-1.2(8H，m).用做起始物的2-〔3(S)-氨基-2(R)-羥基-4-苯基丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(S)-羧酰胺如下述方法制備。(ⅰ)將含有12.676g(71.6mmol)的1，2，3，4-四氫-3(S)-異喹啉羧酸(Chem.Pharm.Bull，1983，31，312)的200ml90%乙酸混懸液于80℃，于140大氣壓下，在5%銠-碳上氫化24小時(shí)，混合物冷至室溫，將催化劑濾除，蒸發(fā)濾液，得到的膠狀物溶于10ml乙酸乙酯，將其緩慢加到100ml猛烈攪拌的異丙醚中，生成樹(shù)脂狀沉淀。上清液用傾析法除去沉淀，用熱乙酸乙酯提取，將該熱溶液倒入猛烈攪拌的150ml乙醚/異丙醚(1∶1)的混合物中，得到淺灰色固體，過(guò)濾收集，用乙醚洗并干燥，得到5.209g十氫異喹啉-3(s)-羧酸的混合物，其中包括主要為(約65%)為4as，8as異構(gòu)體，和4aR，8aR異構(gòu)體(約25%)及大約10%的反向異構(gòu)體;MSm/e184〔M+H〕+。(ⅱ)將9.036g(49.4mmol)的前述十氫異喹啉-3(S)-羧酸的混合物溶于50ml(50mmol)的1M氫氧化鈉溶液中，所得溶液冷至0℃，在冷卻保持0～5℃溫度下，在1小時(shí)內(nèi)往其中滴加7.40ml(51.87mmol)芐基氯甲酸酯和58.7ml(58.7mmol)1M氫氧化鈉溶液，隨后將混合物再攪拌2小時(shí)，此時(shí)混合物升至室溫。往其中加100ml乙醚，混合物被過(guò)濾，除去不溶的R，R-異構(gòu)體，濾液的水層被分離出，加濃鹽酸調(diào)pH1.5～2，得到油狀沉淀物，混合物用乙酸乙酯提取兩次，每次用100ml，合并的有機(jī)相用水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸發(fā)得到油狀物，該油狀物溶于35ml乙酸乙酯，將2.85ml(25mmol)環(huán)己胺加入，過(guò)濾收集白色沉淀，通過(guò)甲醇/乙酸乙酯幾次分級(jí)重結(jié)晶，得到2.38g2-(芐氧基羰基)-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(S)-羧酸的環(huán)己胺鹽MSm/e318〔M+H〕+。(ⅲ)將2.334g的2-(芐氧基羰基)-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酸的環(huán)己胺鹽分配于50ml乙酸乙酯和50ml10%檸檬溶液中，分出有機(jī)相，用水洗，過(guò)濾，蒸發(fā)得到1.87g2-(芐氧基羰基)-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(S)-羧酸為無(wú)色膠狀物;MSm/e318(M+H)+。(Ⅳ)將含有0.634g(2.0mmol)2-(芐氧基羰基)-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酸的6ml二甲氧基乙烷溶液用0.23g(2.0mmol)的N-羥基琥珀酰亞胺和0.412g(2.0mmol)二環(huán)己基碳化二亞胺處理，混合物于室溫下攪拌18小時(shí)，混合物過(guò)濾，蒸發(fā)濾液得到0.879g淺黃色油狀物，即前述酸的N-羥基琥珀酰亞胺酯，將含有0.828g(2.0mmol)前述的N-羥基琥珀酰亞胺酯的5ml二氯甲烷溶液攪拌，冷至0℃，用0.219g(3.0mmol)叔丁胺處理，混合物于0℃攪拌2小時(shí)，隨后于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，混合物隨后用2M鹽酸，碳酸鈉溶液，和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，蒸發(fā)，殘余物溶于20ml乙醚，并過(guò)液，蒸發(fā)濾液，得到0.712g2-(芐氧基羰基)-NO-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺白色固體;MSm/e373〔M+H〕+。(Ⅴ)將含有0.689g(1.85mmol)2-(芐氧基羰基)-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺的20ml乙醇溶液在室溫，大氣壓下，且有0.01g10%鈀-碳存在下氫化反應(yīng)18小時(shí)，過(guò)濾除去催化劑，蒸發(fā)除去溶劑，得到一定產(chǎn)率的N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺，為澄清油狀物;MSm/e239〔M+H〕+，其未經(jīng)進(jìn)一步純化而用于下一步反應(yīng)。(Ⅵ)將含有440mgN-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺和549mg3(s)-(芐氧基甲酰胺基)-1，2(s)-環(huán)氧-4-苯基丁烷的6ml乙醇溶液于60℃攪拌7小時(shí)，再加54mg3(s)-(芐氧基甲酰胺基)-1，2(s)-環(huán)氧-4-苯基丁烷，將該溶液于20℃攪拌16小時(shí)。蒸發(fā)除去溶劑，殘余物經(jīng)硅膠層析(用乙醚/正己烷/甲醇(47.5∶47.5∶5)做流動(dòng)相，得到771mg2-〔3(s)-(芐氧基甲酰胺基)-2(R)-羥基-4-苯基丁基-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺白色固體，MSm/e536(M+H〕+。(Ⅶ)含有747mg2-〔3(s)-(芐氧基甲酰胺基)-2(R)-羥基-4-苯基丁基-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺的40ml乙醇溶液于10%的鈀-碳上，于20℃，大氣壓下氫化反應(yīng)5小時(shí)，過(guò)濾除去催化劑，蒸發(fā)濾液得到561mg2-〔3(s)-氨基-2(R)-羥基-4-苯基丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺，米色固體，不經(jīng)進(jìn)一步純化而用于下一步驟。實(shí)施例2含有154mg2-〔3(s)-〔(L-天冬酰胺?；?氨基〕-2(R)-羥基-4-苯基丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺和52mg喹哪啶酸的6ml干燥四氫呋喃溶液于冰鹽混合物中冷卻，隨后加41mg羥基苯并三唑，35mgN-乙基嗎啉和68mg二環(huán)己基碳化二亞胺，混合物攪拌64小時(shí)，隨后用乙酸乙酯稀釋?zhuān)⑦^(guò)濾，濾液用碳酸氫鈉水溶液，和氯化鈉水溶液洗，蒸發(fā)，殘余物經(jīng)硅膠層析，用二氯甲烷/甲醇(9∶1)做流動(dòng)相，得到50mgM-叔丁基-十氫-2-〔2(R)-羥基-4-苯基-3(s)-〔〔N-(2-喹啉基羰基)-L-天冬酰胺?；嘲被?丁基〕-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺白色固體;MSm/e671〔M+H〕+;NMRδ(d4CH3OH400MHz)8.52(1H，m)，8.18(1H，m)，8.14(1H，m)，8.02(1H，m)，7.84(1H，m)，7.69(1H，m)，7.18(2H，m)，6.90(2H，m)，6.72(1H，m)，4.93(1H，dd，AsnαCHJ＝6.6，6.8)，4.27(1H，m，-CH2CHCH(OH)-J＝3.8，3.8，11.0)，3.89(1H，m，-CHCH(OH)CH2-J＝7.2，6.4，3.8)，3.06(1H，dd，HleqJ＝-12.0，3.0)，3.02(1H，dd，PhCH(H)CH-J＝14.0，3.8)，2.77(1H，dd，Asnβ1J＝-15.6，6.6)，2.68(1H，dd，Asnβ2J＝-15.6，6.8)，2.68(1H，dd，PhCH(H)CH-J＝-14.0，11.0)，about2.68(1H，dd，-CH(OH)CH(H)N-J＝-12.0，7.2)2.63(1H，dd，H3axJ＝11.0，2.2)，2.22(1H，dd，-CH(OH)CH(H)N-J＝-12.0，6.4)，2.18(1H，dd，HlaxJ＝-12.0，2.2)，2.06(1H，m，H4axJ＝-11.0，11.0，11.0)，1.78(1H，m，4aJ4a-4ax＝11.0，J4a-4eq＝about4，J4a-8a＝about4)，1.65(1H，m，8aJ8a-1ax＝2.2J8a-1eq＝3.0J8a-4a＝about4)，1.37(1H，m，H4eqJ＝-11.0，2.2，about4)，1.30(9H，s，t-butyl)，2.0-1.2(8H，m).用做起始物的2-〔3(s)-〔(L-天冬酰胺?；?氨基〕-2(R)-羥基-4-苯基丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺按下列方法制備將含有195mg2-〔3(s)-〔〔N-(芐氧基羰基)-L-天冬酰胺?；嘲被?2(R)-羥基-4-苯基丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺的20ml乙醇溶液于室溫下，大氣壓下，在10mg10%的鈀-碳上氫化反應(yīng)18小時(shí)，過(guò)濾除去催化劑，減壓蒸發(fā)濾液，得到154mg2-〔3(s)-〔(L-天冬酰胺?；?氨基〕-2-(R)-羥基-4-苯基丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺，其不經(jīng)純化而用于下步反應(yīng)。實(shí)施例3將含有287mgN-(2-喹啉基羰基)-L-天冬酰胺和401mg2〔3(s)-氨基-2(R)-羥基-4-苯基丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺(于實(shí)施例1(ⅰ)-(Ⅶ)制備)的3ml四氫呋喃溶液冷至-10℃，往其中加163mg3-羥基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮和220mg二環(huán)己基碳化二亞胺，混合物于-10℃攪拌2小時(shí)，于20℃攪拌16小時(shí)，隨后用乙酸乙酯稀釋并過(guò)濾，濾液用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液洗，并蒸發(fā)，殘余物經(jīng)硅膠層析;用含4%(體積)甲醇的二氯甲烷作流動(dòng)相，得到537mgN-叔丁基-十氫-2-〔2(R)-羥基-4-苯基-3(s)-〔〔N-(2-喹啉基羰基)-L-天冬酰胺酰基〕氨基〕丁基〕-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺，其與實(shí)例2第一段中所得到的產(chǎn)物相同。用做起始物的N-(2-喹啉基羰基)-L-天冬酰胺按下列方法制備將含有540mg喹哪啶酸琥珀酰胺酯和300mgL-天冬酰胺單水合物及2ml二甲基甲酰胺的混合物于20℃攪拌96小時(shí)，蒸除溶劑，得到的白色固體殘余物于10ml二氯甲烷中猛烈攪拌，過(guò)濾用二氯甲烷洗，得到431mgN-(2-喹啉基羰基)-L-天冬酰胺，白色固體;MSm/e288〔M+H〕+。下列實(shí)施例介紹了以式Ⅰ的化合物或其藥用酸加成鹽為活性成分的藥物制劑的制備方法實(shí)施例A活性成分的水溶液經(jīng)無(wú)菌過(guò)濾，溫?zé)釙r(shí)與無(wú)菌明膠溶液混合，其含有酚做防腐劑。每1，00ml所得溶液含有3.0mg活性成分，150.0mg明膠4.7mg酚及蒸餾水加至1.0ml，混合物在無(wú)菌操作條件下充入容量為1.0ml的管形瓶中。權(quán)利要求1.具有下式L1氨基酸衍生物或其藥用酸加成鹽的制備方法其中，R代表芐氧基羰基或2-喹啉基羰基該方法包括(a)將下式的2-[(3(S)-氨基-2(R)-羥基-4-苯基丁基]-N-叔丁基-十氧-(4as，8as)-異喹啉-3(S)-羧酰胺與下式的酸或其衍生物反應(yīng)，或者其中R同前述定義，(b)將具有下式的化合物還原，并從所述混合物中分離出所需的(其中R同前述定義)2(R)-羥基異構(gòu)體，或(c)將下式的2-[3(S)-[(L-天冬酰胺?；?氨基]-2(R)-羥基-4-苯基丁基]-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺與生成芐氧基羰基或2-喹啉基羰基的試劑反應(yīng)，及(a)如需要，將所得到的式Ⅰ的化合物轉(zhuǎn)變成其藥用酸加成鹽。2.按權(quán)利要求1的方法，制備N(xiāo)-叔丁基-十氫-2-〔2(R)-羥基-4-苯基-3(s)-〔(N-(2-喹啉基羰基)-L-天冬酰胺酰基〕氨基〕丁基〕-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺。3.藥物的制備方法，特別是用于治療或預(yù)防病毒感染的藥物，該方法包括將權(quán)利要求1中的式Ⅰ化合物或其藥用酸加成鹽制成蓋它劑型。4.含有權(quán)利要求1中式Ⅰ化合物或其藥用酸加成鹽及藥用惰性賦形劑的藥物。5.用于治療或預(yù)防病毒感染的藥物，其含有權(quán)利要求中式Ⅰ化合物或其藥用酸加成鹽，及藥用惰性賦形劑。6.權(quán)利要求1中的式Ⅰ化合物或其藥用酸加成鹽用于制備治療或預(yù)防病毒感染的藥物。7.根據(jù)權(quán)利要求1所要求的方法，或其明顯的化學(xué)等效方法制備具有下式的氨基酸衍生物及其藥用酸加成鹽，(其中R代表芐氧基羰基或2-喹啉基羰基)。8.根據(jù)權(quán)利要求2所要求的方法或其明顯的化學(xué)等效方法制備N(xiāo)-叔丁基-十氫-2-〔2(R)-羥基-4-苯基-3(S)-〔〔N-(2-喹啉基羰基)-L-天冬酰胺?；嘲被扯』?(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺。9.2-〔3(s)-氨基-2(R)-羥基-4-苯基丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺。10.2-(3(s)-〔(L-天冬酰胺酰基)氨基〕-2(R)-羥基-4-苯基丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺。11.2-〔3(s)-氨基-2(R)-羥基-4-苯基丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺。12.2-(3(s)-〔(L-天冬酰胺?；?氨基〕-2(R)-羥基-4-苯基丁基〕-N-叔丁基-十氫-(4as，8as)-異喹啉-3(s)-羧酰胺。全文摘要下式的化合物及其藥用酸加成鹽，(其中R代表芐氧基羰基或2-喹啉基羰基)其抑制病毒起源的蛋白酶，可用做治療或預(yù)防病毒感染的藥物，其可通過(guò)通常的已知方法制備。文檔編號(hào)A61K31/4709GK1052482SQ9010993公開(kāi)日1991年6月26日申請(qǐng)日期1990年12月10日優(yōu)先權(quán)日1989年12月11日發(fā)明者約瑟夫·阿姆斯特朗·馬丁,薩利·萊德碩申請(qǐng)人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司